AmpliSensor-聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌及临床应用

目的探讨Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ－聚合酶链反应（ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ）在结核病诊断中的价值。方法采用ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ对７８４例结核病患者及１６０例肺癌患者的标本进行检测，并与ＰＣＲ（凝胶电泳后，经溴化乙锭染色）、涂片、培养等法比较。结果ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ的敏感性显著高于涂片及培养（Ｐ＜０．０１）。特异性较ＰＣＲ法高。结论ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ可以通过标准曲线划定检出下限，并可换算出标本中原始的靶ＤＮＡ值，同时具有较高的特异性和敏感性，对肺结核尤其是肺外结核的诊断有一定的临床意义。     

肺结核病人细胞免疫功能变化与治疗效果的关系

目的：探讨肺结核病人细胞免疫功能变化与治疗效果的关系。方法：采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（A-PAAP）法,对121例肺结核患者和32名正常对照组分别测定了其外周血T淋巴细胞亚群及NK细胞,患者按病情分为初治组、复治组和难治组相互对比,并追踪治疗后3个月数据变化,结果;肺结核患者外周血CD3、CD4百分比降低,CD8升高,CD4/CD8比值下降,与健康人有明显差异。而且CD3、CD4的数量随病情延长及加重呈递减改变,有显著下降：CD8大复治病人显著上升;CD4/CD8比值下降明显,初治组最高,复治组最低;NK细胞在复治病人显著下降。经过两个月抗结核治疗后有明显改善,其中CD3、CD4/CD8有显著提高,NK细胞在复、难治病人亦有回升,但比较痰菌阴转与持阳患者的结果并无显著性差异。结论：肺结核患者细胞免疫功能低下,经抗结核治疗后有好转,但与疗效不成正比。     

结核分枝杆菌多克隆抗体在结核性病变中的诊断价值

目的探讨用结核分枝杆菌多克隆抗体检测组织中的结核分枝杆菌抗原对结核病的诊断价值。方法收集各部位不同类型结核性病变组织标本288例,非结核性病变组织标本81例,采用结核分枝杆菌多克隆抗体免疫组化染色标记检测组织中的结核分枝杆菌抗原,并与抗酸染色比较。结果结核组对结核分枝杆菌多克隆抗体呈阳性反应者234例,占81.25%,抗酸染色阳性者61例,占21.18%。阳性染色在结核病变组织中的干酪样坏死灶、郎汉氏巨细胞和上皮样细胞的胞质内出现鲜红色颗粒。渗出为主型的结核分枝杆菌多克隆抗体染色阳性率与变质为主型及增殖为主型相比均有统计学意义。结论采用结核分枝杆菌多克隆抗体免疫组化标记对结核病的诊断明显高于抗酸染色,有一定的鉴别诊断价值。     

治疗期肺结核患者外周血CD4+T细胞变化的临床意义

目的:探讨肺结核患者强化治疗期外周血CD4+T细胞变化的临床意义.方法:应用流式细胞术对62例肺结核患者外周血的CD4+T细胞计数,根据患者治疗前影像学肺部病灶累及程度及治疗前后影像学变化进行分组比较,并与30例健康者作比较.结果:治疗前肺结核组CD4+T细胞计数(439.21±210.56)/mm3+明显低于健康对照组(748.47±261.85)/mm3(P<0.01).治疗前多叶受累组的CD4+T细胞计数(399.83±194.17)/mm3低于局限组对应的(521.90±224.40)/mm3(P<0.05);治疗后病灶吸收明显组的CD4+T细胞计数从(480.75±228.49)/mm3+上升至(616.75±280.57)/mm3,达健康组水平(P>0.05),而病灶吸收不明显的CD4+T细胞计数仅从(412.97±197.00)/mm3上升至(447.55±204.60)/mm3,仍低于健康水平(P<0.01).结论:肺结核患者存在外周血CD4+T细胞减少,经抗结核治疗后,外周血减少的CD4+T细胞部分可恢复,外周血CD4+T细胞与肺结核病情严重性相关,病情越严重CD4+T细胞数越低.     

rpoB基因在结核分枝杆菌利福平/利福布丁交叉耐药株中突变情况的差异分析

目的 了解结核分枝杆菌利福平/利福布丁交叉耐药株与利福平耐药/利福布丁敏感株rpoB全基因突变特征的差异.方法 测定rpoB全基因序列,比较278株利福平/利福布丁交叉耐药(rifampicin/rifabutin cross-resistant,RIF/Rfb-R)株和40株利福平耐药/利福布丁敏感(rifampicinresistant/rifabutin-susceptible,RIF-R/Rfb-S)株,30株利福平/利福布丁敏感(rifampicin-susceptible/rifabutin-susceptible,RIF-S/Rfb-S)株及标准株H37 Rv之间的rpoB全基因序列突变差异.结果 利福平/利福布丁敏感株和H37Rv rpoB全基因未发现突变;利福平/利福布丁交叉耐药株的常见突变位点是531(70.5％)和526( 20.9％).223( 80.2％)株单点突变株分别含有S531L、S531W、H526D、H526Y、H526R、Q513K、Q513P、Q510H、V176F、P287R、Y395C及H404Y单点突变,55( 19.8％)株多重突变株分别以S531L、H526R、H526Y、H526D、D516G和Q513K位点与其他位点联合突变为主.利福平耐药/利福布丁敏感株的常见突变位点分别是516(65.0％)、526( 17.5％)和533( 10.0％).21(52.5％)株单点突变株分别含有L533P、H526L、H526S、S522L、D516V、D516Y和D516F单点突变,19(47.5％)株多重突变株分别以D516V和L533P位点与其他位点联合突变为主.结论 本批标本中,利福霉素耐药株rpoB基因突变率为100％,利福平/利福布丁交叉耐药株与利福平耐药/利福布丁敏感株rpoB全基因单点突变株的突变位置或氨基酸替换类型、多重突变株的突变位置或组合类型以及常见突变位点或其氨基酸替换类型完全不同,rpoB全基因DNA序列分析对临床科学应用利福平和利福布丁有指导意义.     

MGIT 及BacT/Alert MP液体培养基检测分枝杆菌效果的评价

目的 评价 BacT/Alert MP、MGIT 960 7 mL、MGIT 4 mL 3种液体培养基检测分枝杆菌的效果.方法收集肺结核病疑似患者的149份抗酸染色涂阳、188份涂阴痰标本,分别采用BacT/Alert MP、MGIT 960 7 mL、MGIT 4 mL以及罗氏培养基(L-J)进行分离培养效果比对.另...     

白介素-10基因多态性与肺结核病易感性的研究

目的 研究白介素-10(IL-10)基因(-1082 G/A)多态性与肺结核病易感性的关系.方法 利用序列特异性引物多聚酶链反应(RCR-SSP)技术对40例肺结核患者及40例对照人群IL-10(-1082 G/A)多态性进行检测,并对其易感性进行分析.结果 对照组IL-10(-1082 G/A)AA基因型频率(0.825)显著高于患者组(0.55)(P＜0.01).GA基因型患者组显著高于对照组(P＜0.05).患者纽G等位基因频率(0.25)显著高于对照组(0.1)(P＜0.01),RR为1.57,95%CI(1.10～2.24),P＜0.05.结论 IL-10(-1082 G/A)多态性可能与肺结核病的易感性相关,因此其多态性检测可作为遗传标记进行检测,用于早期发现对肺结核病易感的高风险人群,对于结核病防治工作具有重要意义.     

荧光定量聚合酶链反应技术检测痰结核分枝杆菌DNA及其临床应用研究

目的探讨荧光定量聚合酶链反应(fluoreseenee quantitative PCR，FQ-PCR)技术在肺结核诊断中的临床价值。方法对144例活动性肺结核的痰及30例健康对照者的痰进行FQ-PCR检测，并与痰涂片检查法、改良罗氏培养法结果进行比较。结果FQ-PCR检测痰结核分枝杆菌阳性率、痰涂片抗酸检查法阳性率、改良罗氏培养法阳性率分别为61．1％(88／144)、51．4％(74／144)、55．6％(80／144)，以FQ-PCR检测痰结核分枝杆菌阳性率为最高，FQ-PCR检测特异性为100％。结论FQ-PCR技术检测痰结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性．该方法快速、准确．对肺结核的诊断有一定价值。     

利血平对耐药结核分枝杆菌临床株的作用

目的 观察泵抑制剂(利血平)对耐药结核分枝杆菌临床分离株的作用.方法 应用3组BacT.ALERT3D培养仪系统的培养基,分别命名为A、B、C组培养基.3组培养基均接种42株耐药结核分枝杆菌临床分离株,其中A、B组同时加入利福平1 μg/mL;环丙沙星2 μg/mL.;利福平1 μg/mL和环丙沙星2 μg/mL;A、C组同时加入利血平20 mg/L;C组未加入任何抗结核药物.结果 在A组培养基中,耐利福平1μg/mL的14株菌株中有2株恢复对利福平的敏感性,12株仍然耐药;耐环丙沙星2μg/mL的6株菌株和耐利福平1μg/mL及环丙沙星2μg/mL的22株菌株全部恢复药物敏感性.在B组培养基中,42株耐药结核分枝杆菌临床分离株,药物耐药性无变化.在C组培养基中,42株耐药结核分枝杆菌临床分离株明显生长,说明利血平对所研究菌株无抑制作用.A组与B组培养基细菌的药物敏感性差异有统计学意义(P＜0.01).结论 结核分枝杆菌存在耐药机制之一的外排系统;泵抑制剂之一利血平对耐药的结核分枝杆菌临床分离株有抑制其外排作用,使结核分枝杆菌恢复敏感性.