实验性自身免疫性重症肌无力模型构建方法进展

<正>重症肌无力(Myasthenia gravis,MG)是在细胞免疫依赖性补体参与下,由乙酰胆碱受体抗体(Acetylcholine receptor antibody,AChR Ab)介导而产生的自身免疫系统疾病。位于神经肌肉接头(Neuromuscular junction,NMJ)处的AChR是导致MG的自身免疫抗原。其发病原因及治疗方法仍有待进一步研究探讨,所以研究实验性自身免疫性重症肌无力动     

升陷汤治疗实验性自身免疫性重症肌无力大鼠免疫机制研究

目的:探讨升陷汤治疗实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)大鼠的免疫机制。方法:采用人工合成鼠源乙酰胆碱受体琢亚基97鄄116 肽段加完全弗氏佐剂免疫Lewis 大鼠构建EAMG,经评估确定建模成功25 只。将这25 只大鼠随机分为模型对照组,阳性药物组(强的松组),升陷汤低、中、高剂量组。观察该方对模型大鼠临床评分、体重、低频重复电刺激(RNS,5 Hz)衰减率、血清中乙酰胆碱抗体(AChR Ab)含量及TGF、IFNβ、IL-2、IL-4 和IL-17 水平的影响。结果:造模后各组较佐剂对照组RNS 衰减率明显增大(P<0.01 或P<0.05),且均超过10%,体重进行性下降,并出现典型肌无力样症状,证明造模成功。给药治疗后,升陷汤低、中、高剂量组大鼠RNS 衰减率均显著降低(P<0.01),体重下降均减缓,症状好转。与模型对照组相比,升陷汤低、中、高剂量组血清AChR Ab 含量均降低(P<0.05),TGFβ水平均升高,IFN、IL-2、IL-4 和IL-17 水平均降低(P<0.01 或P<0.05)。结论:升陷汤可使RNS 衰减好转,改善EAMG 大鼠体重持续下降趋势,并使体重增加趋势升高,其机制可能是上调TGFβ1水平,下调IFN、IL-2、IL-4 和IL-17 的水平,抑制B 细胞产生AChR Ab,降低血清AChR Ab 含量,减少对NMJ 处AChR 的损害,从而起到治疗EAMG 的作用。     

复方丹参滴丸联合西药治疗糖尿病周围神经病变的Meta分析

目的对复方丹参滴丸联合西药治疗糖尿病周围神经病变进行Meta分析。方法检索中国知网(CNKI)、中国生物医学文摘数据库(CBM)、维普数据库(VIP)、万方数据库、Pub Med、Embase和Cochrane library中发表的中、英文相关随机对照研究,截止日期为2017年8月31日。2名独立研究者按照文献纳入及排除标准筛选文献,并进行研究质量评价和资料提取,再采用Rev Man5.3软件进行Meta分析。结果共纳入13项研究,1 416例患者。Meta分析显示,复方丹参滴丸联合西药总有效率显著优于对照组(单用西药)(P0.000 01),并且能进一步改善胫神经感觉、胫神经运动、尺神经感觉、腓总神经感觉、腓总神经运动、正中神经感觉、正中神经运动神经传导速率(除正中神经感觉神经传导速率P=0.005外,其余P0.000 01),但对糖化血红蛋白的改善与对照组相比无显著差异(P=0.29)。结论复方丹参滴丸联合西药能有效治疗糖尿病周围神经病变,并且在改善神经传导速率方面优于单用西药,值得临床推广。     

黄芪升麻柴胡治疗实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的量效关系及免疫学机制研究

目的：探讨益气升提法治疗实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）大鼠中黄芪的最佳剂量,以及免疫机制。方法：采用Rα97.116免疫Lewis大鼠构建EAMG,随机分为佐剂对照组、模型对照组、益气升提黄芪低剂量组、益气升提黄芪中剂量组、益气升提黄芪高剂量组。观察大鼠抓力、体质量、低频重复电刺激（RNS）衰减率,检测血清AChR-Ab、IFN-γ、TGF-β、IL-6、IL-17含量及外周血淋巴细胞CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg比例,将EAMG大鼠临床表现与实验室检测指标综合汇总,进行综合评分,评价各组治疗效果。结果：治疗后,低中高三剂量益气升提组大鼠EAMG综合评分分别为82,58,88分（满分100分）,各组大鼠体质量回升,抓力回升,RNS衰减率显著降低（P<0.05,P<0.01,P<0.001）,血清AChR-Ab、IFN-γ、IL-6、IL-17含量显著下降,TGF-β含量显著升高（P<0.05,P<0.01,P<0.001）,外周血淋巴细胞CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg比例显著升高（P<0.05）。结论：益气升提法对EAMG大鼠具有明确治疗效果,黄芪高剂量组疗效最优,不同剂量黄芪配伍升麻柴胡对MG细胞因子网络的影响各不相同。益气升提法治疗EAMG的机制可能是通过升高TGF-β含量,降低IFN-γ、IL-6、IL-17含量,提高CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺Treg比例,降低血清AChR-Ab含量,从而减少神经肌肉接头处AchR损害。     

潜阳育阴颗粒调控NR3C2/ROS/ERK信号通路抑制醛固酮诱导足细胞损伤的机制

目的 探讨潜阳育阴颗粒对醛固酮干预的小鼠足细胞的保护机制。方法 将30只C57BL/6J小鼠随机分为5组：正常组、模型组、潜阳育阴颗粒低、高剂量组、螺内酯组,每组6只;除正常组外其余小鼠均植入微型渗透泵持续注入醛固酮（300 μg·kg^-1·d^-1）,诱导小鼠肾损伤,造模后给药组分别给予潜阳育阴颗粒低剂量、高剂量（2.6、5.2 g·kg^-1·d^-1）,螺内酯（18 mg·kg^-1·d^-1）连续干预28 d。苏木素-伊红（HE）染色及马松（Masson）染色观察小鼠肾脏病理改变;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠肾脏组织足细胞裂孔膜结构蛋白Nephrin、足细胞丝结蛋白Desmin、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白（Bax）、剪切的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）、核受体亚家族3C组成员2（NR3C2）、细胞外调节蛋白激酶（ERK）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）的表达水平;原位末端标记法（TUNEL）染色观察小鼠肾脏组织的凋亡水平;检测小鼠肾脏组织超氧化物歧化酶（SOD）水平;体外研究分为5组：正常组、模型组（醛固酮浓度200 nmol·L^-1）、潜阳育阴颗粒低、中、高质量浓度组（25、50、100 mg·L^-1）。细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测不同浓度潜阳育阴颗粒对醛固酮诱导的足细胞相对活力的影响;Western blot检测足细胞中Nephrin、Desmin、Bax、Bcl-2、cleaved Caspase-3、NR3C2、p-ERK/ERK表达水平;流式细胞术结合异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/碘化丙啶（PI）检测足细胞的凋亡水平;2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法（DCFH-DA）观察足细胞的活性氧（ROS）水平。结果 与正常组比较,模型组小鼠肾脏结构病变、出现纤维化情况,凋亡程度升高（P<0.01）,SOD水平显著下降（P<0.01）;醛固酮浓度在200 nmol·L^-1时足细胞活性明显下降（P<0.05）,模型组足细胞形态病变、细胞间微丝结构排列错乱,凋亡水平升高（P<0.01）,细胞内ROS水平显著升高（P<0.01）,小鼠肾脏组织及足细胞中Nephrin、Bcl-2、p-ERK/ERK蛋白表达明显下降（P<0.05,P<0.01）,Desmin、Bax、cleaved Caspase-3、NR3C2蛋白表达明显上升（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,潜阳育阴颗粒各剂量改善小鼠肾脏结构损伤和纤维化情况,减轻小鼠肾脏凋亡水平（P<0.05,P<0.01）,提高肾脏SOD含量（P<0.05,P<0.001）,改善足细胞活性（P<0.05,P<0.01）,恢复足细胞足突结构,改善足细胞凋亡（P<0.01）,下调足细胞ROS水平（P<0.01）,上调小鼠肾脏组织和足细胞中Nephrin、Bcl-2、p-ERK/ERK蛋白表达（P<0.05,P<0.01）,下调Desmin、Bax、cleaved Caspase-3、NR3C2蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 潜阳育阴颗粒通过调节NR3C2/ROS/ERK信号通路改善醛固酮诱导的小鼠足细胞损伤。     

潜阳育阴颗粒对自发性高血压大鼠肾脏足细胞损伤的影响及其机制研究

  目的  探讨潜阳育阴颗粒(QYYY)对高血压肾损害的治疗作用及其作用机制。  方法  以自发性高血压大鼠(SHR)为动物模型,潜阳育阴颗粒(低、中、高剂量)为干预,HE染色及Masson染色观察各组大鼠肾脏病理情况,Western Blot检测TRPC6及足细胞损伤相关蛋白Desmin、Nephrin和Podocin的表达。细胞实验用潜阳育阴含药血清低、中、高剂量(QYYYL、QYYYM、QYYYH)干预血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的大鼠足细胞损伤模型,Western Blot检测TRPC6及足细胞损伤相关蛋白的表达。免疫荧光观察TRPC6、Desmin的表达。  结果  HE染色及Masson染色观察到潜阳育阴颗粒能明显改善SHR的肾损害,与模型组相比,QYYY能明显降低TRPC6、Desmin,升高Nephrin、Podocin表达水平及改善Ang Ⅱ所诱导的足细胞损伤(P < 0.05, P < 0.01)。  结论  QYYY可以改善高血压肾损害,其机制可能与TRPC6及足细胞损伤相关蛋白的表达有关。