喘可治注射液联合化疗治疗老年非小细胞肺癌近期疗效观察

目的 观察喘可治注射液联合化疗治疗Ⅲ、Ⅳ期老年非小细胞肺癌（NSCLC）的近期疗效。方法 采用前瞻性、随机、对照的临床研究方法,将62例老年NSCLC病例按1∶1比例分为试验组（喘可治注射液+中医辨证论治+化疗）和对照组（中医辨证论治+化疗）,其中试验组32例,对照组30例。观察喘可治注射液联合化疗对瘤体大小、临床症状、体力状况（PS）评分、体质量的影响及化疗副反应。结果 试验组、对照组瘤体大小疗效评价：有效率（ORR）分别为31.3 %、16.7 %,稳定率（DCR）分别为84.4 %、73.3 %,两组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。试验组咳嗽、咯痰、夜尿频多、畏寒肢冷等临床症状缓解率优于对照组（P＜0.05）;试验组的PS评分改善优于对照组（P＜0.05）;试验组治疗后体质量增加率及稳定率均高于对照组（P＜0.05）;试验组骨髓抑制程度较对照组轻,其中白细胞及中性粒细胞变化有统计学意义（P＜0.05）。结论 喘可治注射液应用于Ⅲ、Ⅳ期老年NSCLC化疗患者具有增效减毒的协同作用,能明显改善临床症状、提高PS评分,维持体质量及有效减轻骨髓抑制。     

灵芝和紫芝对照提取物在灵芝样品指纹图谱分析的应用

目的使用赤芝对照提取物(CZERS)、紫芝对照提取物(ZZERS)对所收集18批次灵芝药材进行高效薄层色谱(HPTLC)以及高效液相色谱(HPLC)指纹图谱分析。方法使用HPTLC指纹图谱方法,高效娃胶预制板,以氯仿-乙腈-甲醇-甲酸=13:2:0.5:0.53次展开和环己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸=15:5:0.5:0.52次展开的方法分别分析灵芝三萜酸类和甾醇类成分。使用HPLC指纹图谱方法,Kromasil 100-5 C18柱(4.6mm×250 mm,5μm);流动相:A-乙腈,B-0.02%嶙酸;梯度洗脱程序:0~40min,29%→33%A,40-70 min,33%→65%A,70-105 min,65%→100%A;105-120 min,100%A;检测波长244 nm(DAD检测器);流速1.OmL·min^-1;进样量10μL;柱温25℃。结果使用对照提取物(ERS)和指纹图谱分析方法,可以区分赤芝,无柄灵芝和紫芝。不同种类和生长方式的灵芝成分存在差异。结论灵芝品种繁多,分野生和人工培养,而人工培养的培养基又有不同,导致不同灵芝个体间成分存在差异。使用特定品种的ERS和指纹图谱分析方法更加适合灵芝多成分整体质量控制的需求。     

喘可治注射液增强细胞因子诱导的杀伤细胞抗肿瘤活性的初步研究

目的通过喘可治注射液对细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）的表型及细胞因子分泌情况的影响,探讨喘可治注射液对CIK免疫活性的免疫调节作用。方法分离健康志愿者的外周血单个核细胞,在细胞因子的作用下,体外培养成细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）,在培养过程中同时加入喘可治注射液。LDH法检测不同浓度喘可治注射液培养条件下的CIK细胞的抗肿瘤活性。流式细胞术检测CIK细胞表型及细胞内因子的分泌情况变化。Annexin V/PI凋亡试剂盒检测CIK细胞的凋亡情况。结果喘可治注射液能提高CD3＋CD56＋双阳性的CIK细胞的比例,增强其杀伤肿瘤细胞的活性,促进具有抗肿瘤效应的Th1型的细胞内因子IFN-γ、TNF-α的分泌,而对CD4＋CD25＋抑制性细胞和Th2型的细胞因子IL-4的分泌影响不大。喘可治注射液对CIK细胞的凋亡没有明显作用。结论喘可治注射液可上调CIK细胞分泌Th1型的细胞因子,增强CIK细胞的抗肿瘤活性。     

巴戟天的高效高压差低温连续式提取技术(HHLSE)研究

目的采用高效高压差低温连续式提取技术(HHLSE)对巴戟天水提工艺进行研究,以期为羊藿巴戟天口服液的HHLSE工艺研究提供依据。方法以耐斯糖为检测指标,配合含固比,以加水量、提取次数、提取压差为考察因素,应用L9(34)正交试验,筛选HHLSE提取耐斯糖的最佳水提工艺条件。结果 HHLSE提取耐斯糖的最佳水提工艺条件为:药材加30倍的水在-0.1～35MPa压差下提取1次;耐斯糖的提取保留率可达80%以上,含固比也较高。结论该工艺过程稳定,可以为羊藿巴戟天口服液的HHLSE工艺研究提供技术支持。     

喘可治抑制灭活HIV-1颗粒诱导人CD4＋T细胞凋亡机制研究

目的通过深入研究HIVp对CD4＋T细胞凋亡的影响,以探讨HIV病中CD4＋T细胞丢失的可能机制以及喘可治（CKZ）对CD4＋T细胞凋亡的调控作用。方法 AT-2灭活HIV-1ⅢB型病毒颗粒,ELISA法检测p24抗原的含量;然后将HIVp加入到PBMCs中,使p24抗原终浓度为1 ng.mL-1;在相应的组中加入喘可治,使其终浓度为40μL.mL-1（v/v）。48 h后,运用荧光标记的An-nexin V染色技术结合流式细胞术评价CD4＋T细胞的凋亡率;运用免疫荧光抗体染色技术结合流式细胞术检测CD4＋T细胞CD95和DR5的表达;运用胞内免疫荧光抗体染色技术和分子探针染色技术结合流式细胞术检测CD4＋T细胞Apo2.7和线粒体内膜膜电势（△ψm）的水平。结果与对照组相比,HIVp可以引起明显的CD4＋T细胞凋亡（P〈0.01）,而喘可治能够有效抑制HIVp引发的CD4＋T细胞凋亡（P〈0.01）。结论 HIVp通过外源性凋亡途径和内源性凋亡途径删除CD4＋T细胞,从而导致免疫缺陷;喘可治能够保护CD4＋T细胞而有望开发成为艾滋病治疗的辅助药物。     

中药喘可治对小鼠T淋巴细胞活化的双向调节作用机理研究

目的研究中药喘可治(Chuankezhi,CKZ)对小鼠T淋巴细胞活化的双向调节作用的机理。方法无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,分别加入巴戟天(Bajitian,BJT)提取物(50μg·mL-1)、淫羊藿(Yinyanghuo,YYH)提取物(100μg·mL-1)和喘可治(50μg·mL-1BJT+100μg·mL-1YYH),预孵育4h后,加入刺激剂,12h后,运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术检测CD3+T淋巴细胞早期活化标志CD69的表达水平。结果与对照组相比,巴戟天提取物处理组中CD3+T淋巴细胞CD69的表达水平明显升高;与刺激组相比,巴戟天提取物可以协同刺激CD69的表达。淫羊藿提取物对静息状态下的CD+3T淋巴细胞CD69的表达作用不明显,但可以抑制刺激剂引起的CD3+T淋巴细胞CD69的表达。与前两者相比,喘可治则呈现明显的双向免疫调节作用,即上调静息状态的CD+3T淋巴细胞CD69的表达,下调刺激状态的CD3+T淋巴细胞CD69的表达。结论喘可治对T淋巴细胞活化的双向调节作用是巴戟天和淫羊藿共同作用的结果,其中巴戟天具有促进免疫应答的作用,而淫羊藿具有抑制免疫应答的作用。