腺苷A3受体对浅筋膜成纤维细胞cAMP/Epac信号通路及炎症因子表达的影响

目的 探讨沉默腺苷A3受体对浅筋膜成纤维细胞cAMP/Epac信号通路及炎症因子表达的影响。方法 选取SD大鼠浅筋膜组织,通过组织块培养法提取成纤维细胞,细胞免疫荧光实验检测Vimentin、CD45、FⅧ、AKA表达,腺苷预处理细胞并分为Control组、10 nmol/L组、100 nmol/L组、10 μmol/L组和100 μmol/L组,均培养48 h。腺苷siRNA干扰实验将细胞分为对照组、腺苷组、A3R干扰组、空载组。对照组不予任何处理,腺苷组用10 μmol/L腺苷培养48 h,其余两组用2 μL Lipofectamine 2000转染A3R siRNA,在培养箱孵育6 h后换上维持液继续培养48 h。Western blotting检测细胞腺苷A3受体蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测cAMP、Epac mRNA表达,Western blotting检测cAMP、Epac蛋白表达,酶联免疫吸附试验检测白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,免疫荧光检测细胞间黏附分子-1表达。结果 Control组、10 nmol/L组、100 nmol/L组、10 μmol/L组和100 μmol/L组A3R蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）,腺苷预处理可剂量依赖性地上调A3R蛋白表达。对照组、腺苷组、A3R干扰组、空载组A3R蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）,腺苷siRNA干扰可下调A3R蛋白表达,而空载组并无明显影响。A3R干扰组cAMP、Epac mRNA相对表达量高于对照组（P <0.05）。A3R干扰组cAMP、Epac蛋白相对表达量高于对照组（P <0.05）。A3R干扰组IL-6、TNF-α相对表达量高于对照组（P <0.05）。结论 在浅筋膜成纤维细胞中,腺苷A3受体通过下调cAMP/Epac信号通路减少炎症因子的表达。     

清肺化痰汤联合地塞米松通过调控PI3K/AKT通路上调HDAC2治疗COPD的研究

目的:探讨清肺化痰汤联合地塞米松通过调控PI3K/AKT信号通路上调组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)。方法:将60只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松0.5 mg/kg组、地塞米松+清肺化痰汤7.5、15、30 g/kg组，运用香烟烟雾(CS)吸入、气道脂多糖滴入建立COPD大鼠模型，造模28 d后给药，连续给药14 d,末次给药24 h后，以小动物肺功能仪测定大鼠呼吸功能；取肺组织，HE染色观察大鼠肺组织炎症程度及病理变化；Masson染色检测大鼠气道重塑情况；ELISA法检测肺组织匀浆中的肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)的含量；Real-time RT-qPCR法检测大鼠肺组织Hdac2 mRNA的表达；Western blot法检测大鼠肺组织HDAC2、p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白的表达。结果:与正常对照组相比，模型对照组COPD大鼠肺功能显著下降，大鼠气道周围肺组织结构大量破坏，肺泡隔结构消失，胶原沉积显著增多，TNF-α与IL-1β的含量显著升高，肺组织中Hdac2 mRNA及HDAC2蛋白...