P －gp 在人胃癌干细胞中表达的初步研究

目的：通过无血清法富集人胃癌 BGC －823干细胞,并对所获得的 BGC －823干细胞生物学特性进行研究。方法：采用无血清悬浮培养方法富集人胃癌 BGC －823干细胞球。后续实验分为 BGC －823干细胞组和 BGC －823细胞组：采用蛋白印迹（Western Blot）法和 Hoechst33342染色法对所富集细胞的干性进行鉴定;利用平板克隆实验检测细胞单克隆形成能力;采用 CCK －8法检测细胞对紫杉醇的敏感性;RT －PCR 法检测 P －gp mRNA 的表达;细胞免疫荧光双染观察干细胞球 CD44、P －gp 的表达情况。结果：采用无血清悬浮培养法成功获得干细胞球。CCK －8结果显示,BGC －823干细胞对紫杉醇敏感性较 BGC －823细胞降低（P ＜0．05）。干细胞球单克隆形成能力较人胃癌 BGC －823细胞增强（P ＜0．05）。Western Blot 和 Ho-echst33342染色法结果显示无血清富集的细胞为胃癌干细胞。RT －PCR、细胞免疫组化检测显示 BGC －823干细胞 CD44、P －gp 的表达较 BGC －823细胞升高,统计学差异明显（P ＜0．05）。结论：利用无血清富集法收集的人胃癌 BGC －823干细胞球为研究干细胞的理想模型,胃癌干细胞的形成是耐药出现的潜在机制。     

α-常春藤皂苷的抗肿瘤药理作用研究进展

α-常春藤皂苷是从中药复方肠胃清中高压液相质谱分析所得的一个典型的五环三萜类皂苷,具有广泛的药理作用,如抗肿瘤、抗炎症反应和免疫调节等,其中最引人注目的是抗肿瘤作用。随着研究的不断深入,α-常春藤皂苷的抗肿瘤作用分子机制有一定突破,本文主要就近年来α-常春藤皂苷的抗肿瘤药理作用研究进展作简要综述,为今后研究和开发α-常春藤皂苷抗肿瘤作用提供依据。     

杞精明目汤含药血清对结膜松弛症MAPK信号通路的影响

目的探讨杞精明目汤含药血清对结膜松弛症(CCh)成纤维细胞表达丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的影响及其作用机制。方法体外培养结膜松弛症结膜成纤维细胞并鉴定,分为CCh对照组、CCh+20%含药血清组(含药血清组)、CCh+20%无药血清组(无药血清组),予20%的含药或无药血清干预48 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测p38MAPK、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)及其磷酸化水平的光密度值,Western Blot检测p38 MAPK、JNK、ERK蛋白及其磷酸化水平,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测p38 MAPK、JNK、ERK的m RNA表达,并行统计学分析。结果 ELISA结果显示:含药血清组较CCh对照组p38 MAPK、p-p38 MAPK光密度值明显降低(P0.05),而无药血清组与CCh对照组差异无统计学意义(P0.05)。含药血清组较CCh对照组JNK光密度值降低(P0.05),而无药血清组与CCh对照组差异无统计学意义(P0.05);含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-JNK光密度值下降(P0.05)。含药血清组较CCh对照组ERK、p-ERK光密度值下降,差异有统计学意义(P0.05);而无药血清组与CCh对照组差异均无统计学意义(P0.05)。Western Blot结果显示:含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-p38MAPK蛋白表达量明显下降(P0.05),且20%含药血清的p38 MAPK蛋白磷酸化水平下调更为明显。含药血清组、无药血清组与CCh对照组JNK、p-JNK蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05)。含药血清组、无药血清组与CCh对照组ERK蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05);含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-ERK蛋白表达量均明显降低(P0.05),其中含药血清组的ERK蛋白磷酸化水平下调更为明显。RT-PCR结果显示:无药血清组和含药血清组较CCh对照组p38 MAPK、JNK、ERK的m RNA表达水平均显著下降,差异有统计学意义(P0.05),且20%含药血清组p38 MAPK、JNK、ERK m RNA水平下调更为明显。结论杞精明目汤含药血清可下调结膜松弛症成纤维细胞MAPK信号通路相关蛋白和基因的表达,其对p38 MAPK、ERK蛋白的磷酸化水平和基因表达的抑制,可能是该方疗效机制的关键。     

化疗药物致肝损伤的作用机制

药物是造成肝损伤的重要原因,据统计约1100种药物可能造成肝损伤。由于难以鉴别诊断,药物相关损害仍然被误判。而不同的药物对于肝脏的损伤机制及程度均有不同,因此应对措施也应当具有针对性。有关化疗药物所造成的肝损伤的系统回顾较少。主要介绍了各类用于临床的化疗药物对肝脏的毒性机制,评述了不同化疗药物对肝脏的毒性程度。总结了化疗药物所致肝损伤的临床表现并为临床应对提出相关建议。     

华蟾素对转化生长因子-β1诱导肝星状细胞激活的作用及机制研究

目的 研究华蟾素对人肝星状细胞(HSCs)LX-2活化的影响及其可能的分子机制。方法 将LX-2细胞分为空白组,对照组和华蟾素低、中、高实验组。空白组予以完全培养基进行培养,对照组予以含10 ng·mL^-1转化生长因子-β1(TGF-β1)的培养基处理,华蟾素低、中、高实验组在对照组的基础上分别予以0.5,1和2 mg·mL^-1华蟾素处理。以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测华蟾素对人肝星状细胞系LX-2细胞增殖的影响;以蛋白质印迹(Western blot)法检测各组细胞中α-平滑肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原(Collagen-Ⅰ)蛋白的表达;以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测α-SMA和Collagen-ⅠmRNA的表达情况;以免疫荧光法检测各组细胞α-SMA蛋白的表达。结果 Western blot和RT-PCR结果显示随着TGF-β1浓度的递增,α-SMA、Collagen-Ⅰ在LX-2细胞中的表达增强,差异有统计学意义(P<0.01);表明TGF-β1可诱导LX-2细胞活化增殖。CCK-8实验测得华蟾素...     

肿瘤相关成纤维细胞及其标记物的研究现状

肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)是肿瘤基质中最丰富的和关键的成分之一,具有多种肿瘤抑制/促进作用,并且在耐药性等领域起着关键作用。α-SMA、FAP、S100A4、PDGFRα/β和PDPN等可作为CAF的标记物。然而,各种常用的成纤维细胞标记物的表达是非常不同的,并且在不同的CAF亚群之间有很大的差异。最近基于特定细胞表面标记的CAF的表征不仅加深了我们对其表型异质性和功能多样性的认识,而且将CAF靶向治疗肿瘤提上了议事日程。本文综述了目前对CAFs的致瘤意义、起源和异质性的理解,以及不同的CAFs标记物在肿瘤发生、发展中的作用,为靶向CAFs的抗肿瘤临床治疗提供提供理论依据。     

杞精明目汤颗粒剂对肿瘤坏死因子-α刺激下结膜松弛症成纤维细胞MAPK信号通路的影响

目的　观察肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）刺激下,杞精明目汤颗粒剂对结膜松弛症（conjunctivochalasis,CCH）结膜成纤维细胞表达丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）的影响,探讨CCH的发病机制及有效治疗策略。方法　体外培养CCH结膜成纤维细胞,分为CCH组、CCH+TNF-α组及CCH+TNF-α+杞精明目汤组。CCK-8确定杞精明目汤颗粒剂有效浓度,用含10^-2 mg·L^-1的TNF-α刺激培养的成纤维细胞,加入杞精明目汤颗粒剂干预48 h,分别采用ELISA、Western Blot和RT-PCR检测MAPK信号通路相关蛋白及mRNA的表达,并行统计学分析。结果　CCK-8确定杞精明目汤颗粒剂有效浓度为1.61 g·L^-1。三组MAPK信号通路相关分子细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinase,ERK）、c-jun氨基末端激酶（c-jun N-terminal kinase,JNK）、p38 MAPK及其磷酸化水平的吸光度（A₄₅₀）值总体差异均有统计学意义（均为P<0.05）,且TNF-α可明显上调CCH表达ERK1/2、JNK1/2、p-JNK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK（均为P<0.05）,而杞精明目汤可显著下调TNF-α刺激后的CCH成纤维细胞表达ERK1/2、p-ERK1/2、JNK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK（均为P<0.05）。三组p-ERK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白总体差异均有统计学意义（均为P<0.05）,且TNF-α可明显上调CCH成纤维细胞p-ERK1/2、p-JNK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白的表达（均为P<0.05）,杞精明目汤可显著下调TNF-α刺激后的CCH成纤维细胞表达p-ERK1/2、p38 MAPK（均为P<0.05）。三组ERK1/2、p38 MAPK mRNA表达总体差异均有统计学意义（均为P<0.05）,且TNF-α可明显上调CCH成纤维细胞ERK1/2、p38 MAPK mRNA的表达（均为P<0.05）,杞精明目汤可显著下调TNF-α刺激后的CCH成纤维细胞p38 MAPK mRNA表达（P<0.05）。结论　TNF-α可上调CCH成纤维细胞MAPK信号通路的表达,导致CCH的发生发展,而杞精明目汤颗粒剂在一定程度上可下调MAPK信号通路的表达从而发挥治疗作用。     

抗HPV18 E6多肽单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备特异性抗人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18 E6多肽抗体。方法 通过在线分析软件ABCpred和Bcepred预测HPV 18E6特异性多肽序列,将多肽序列与牛血清蛋白(bovine albumin,BSA)偶联,以偶联后多肽为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗HPV18 E6多肽单克隆抗体; 以HPV18阳性分泌物标本DNA为模板,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)获得HPV 18 E6基因,将该基因插入表达质粒pET-28a,转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导目的蛋白表达; 采用Western Blot方法鉴定抗HPV18 E6多肽抗体与目的蛋白的反应性。结果 建立的杂交瘤细胞株能稳定产生HPV18 E6多肽单克隆抗体; 重组表达质粒pET-28a-HPV18 E6测序证明构建正确,成功表达HPV18 E6蛋白; 纯化后的抗HPV 18 E6多肽抗体可特异性识别原核表达HPV 18 E6蛋白。结论成功制备抗HPV18 E6多肽序列,该抗体具有较好的特异性。