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目的:通过无血清法富集人胃癌 BGC -823干细胞,并对所获得的 BGC -823干细胞生物学特性进行研究。方法:采用无血清悬浮培养方法富集人胃癌 BGC -823干细胞球。后续实验分为 BGC -823干细胞组和 BGC -823细胞组:采用蛋白印迹(Western Blot)法和 Hoechst33342染色法对所富集细胞的干性进行鉴定;利用平板克隆实验检测细胞单克隆形成能力;采用 CCK -8法检测细胞对紫杉醇的敏感性;RT -PCR 法检测 P -gp mRNA 的表达;细胞免疫荧光双染观察干细胞球 CD44、P -gp 的表达情况。结果:采用无血清悬浮培养法成功获得干细胞球。CCK -8结果显示,BGC -823干细胞对紫杉醇敏感性较 BGC -823细胞降低(P <0.05)。干细胞球单克隆形成能力较人胃癌 BGC -823细胞增强(P <0.05)。Western Blot 和 Ho-echst33342染色法结果显示无血清富集的细胞为胃癌干细胞。RT -PCR、细胞免疫组化检测显示 BGC -823干细胞 CD44、P -gp 的表达较 BGC -823细胞升高,统计学差异明显(P <0.05)。结论:利用无血清富集法收集的人胃癌 BGC -823干细胞球为研究干细胞的理想模型,胃癌干细胞的形成是耐药出现的潜在机制。 相似文献
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目的探讨杞精明目汤含药血清对结膜松弛症(CCh)成纤维细胞表达丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的影响及其作用机制。方法体外培养结膜松弛症结膜成纤维细胞并鉴定,分为CCh对照组、CCh+20%含药血清组(含药血清组)、CCh+20%无药血清组(无药血清组),予20%的含药或无药血清干预48 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测p38MAPK、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)及其磷酸化水平的光密度值,Western Blot检测p38 MAPK、JNK、ERK蛋白及其磷酸化水平,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测p38 MAPK、JNK、ERK的m RNA表达,并行统计学分析。结果 ELISA结果显示:含药血清组较CCh对照组p38 MAPK、p-p38 MAPK光密度值明显降低(P0.05),而无药血清组与CCh对照组差异无统计学意义(P0.05)。含药血清组较CCh对照组JNK光密度值降低(P0.05),而无药血清组与CCh对照组差异无统计学意义(P0.05);含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-JNK光密度值下降(P0.05)。含药血清组较CCh对照组ERK、p-ERK光密度值下降,差异有统计学意义(P0.05);而无药血清组与CCh对照组差异均无统计学意义(P0.05)。Western Blot结果显示:含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-p38MAPK蛋白表达量明显下降(P0.05),且20%含药血清的p38 MAPK蛋白磷酸化水平下调更为明显。含药血清组、无药血清组与CCh对照组JNK、p-JNK蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05)。含药血清组、无药血清组与CCh对照组ERK蛋白表达量差异无统计学意义(P0.05);含药血清组、无药血清组较CCh对照组p-ERK蛋白表达量均明显降低(P0.05),其中含药血清组的ERK蛋白磷酸化水平下调更为明显。RT-PCR结果显示:无药血清组和含药血清组较CCh对照组p38 MAPK、JNK、ERK的m RNA表达水平均显著下降,差异有统计学意义(P0.05),且20%含药血清组p38 MAPK、JNK、ERK m RNA水平下调更为明显。结论杞精明目汤含药血清可下调结膜松弛症成纤维细胞MAPK信号通路相关蛋白和基因的表达,其对p38 MAPK、ERK蛋白的磷酸化水平和基因表达的抑制,可能是该方疗效机制的关键。 相似文献
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目的 研究华蟾素对人肝星状细胞(HSCs)LX-2活化的影响及其可能的分子机制。方法 将LX-2细胞分为空白组,对照组和华蟾素低、中、高实验组。空白组予以完全培养基进行培养,对照组予以含10 ng·mL-1转化生长因子-β1(TGF-β1)的培养基处理,华蟾素低、中、高实验组在对照组的基础上分别予以0.5,1和2 mg·mL-1华蟾素处理。以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测华蟾素对人肝星状细胞系LX-2细胞增殖的影响;以蛋白质印迹(Western blot)法检测各组细胞中α-平滑肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原(Collagen-Ⅰ)蛋白的表达;以实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测α-SMA和Collagen-ⅠmRNA的表达情况;以免疫荧光法检测各组细胞α-SMA蛋白的表达。结果 Western blot和RT-PCR结果显示随着TGF-β1浓度的递增,α-SMA、Collagen-Ⅰ在LX-2细胞中的表达增强,差异有统计学意义(P<0.01);表明TGF-β1可诱导LX-2细胞活化增殖。CCK-8实验测得华蟾素... 相似文献
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肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)是肿瘤基质中最丰富的和关键的成分之一,具有多种肿瘤抑制/促进作用,并且在耐药性等领域起着关键作用。α-SMA、FAP、S100A4、PDGFRα/β和PDPN等可作为CAF的标记物。然而,各种常用的成纤维细胞标记物的表达是非常不同的,并且在不同的CAF亚群之间有很大的差异。最近基于特定细胞表面标记的CAF的表征不仅加深了我们对其表型异质性和功能多样性的认识,而且将CAF靶向治疗肿瘤提上了议事日程。本文综述了目前对CAFs的致瘤意义、起源和异质性的理解,以及不同的CAFs标记物在肿瘤发生、发展中的作用,为靶向CAFs的抗肿瘤临床治疗提供提供理论依据。 相似文献
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目的 观察肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激下,杞精明目汤颗粒剂对结膜松弛症(conjunctivochalasis,CCH)结膜成纤维细胞表达丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)的影响,探讨CCH的发病机制及有效治疗策略。方法 体外培养CCH结膜成纤维细胞,分为CCH组、CCH+TNF-α组及CCH+TNF-α+杞精明目汤组。CCK-8确定杞精明目汤颗粒剂有效浓度,用含10-2 mg·L-1的TNF-α刺激培养的成纤维细胞,加入杞精明目汤颗粒剂干预48 h,分别采用ELISA、Western Blot和RT-PCR检测MAPK信号通路相关蛋白及mRNA的表达,并行统计学分析。结果 CCK-8确定杞精明目汤颗粒剂有效浓度为1.61 g·L-1。三组MAPK信号通路相关分子细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)、c-jun氨基末端激酶(c-jun N-terminal kinase,JNK)、p38 MAPK及其磷酸化水平的吸光度(A450)值总体差异均有统计学意义(均为P<0.05),且TNF-α可明显上调CCH表达ERK1/2、JNK1/2、p-JNK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK(均为P<0.05),而杞精明目汤可显著下调TNF-α刺激后的CCH成纤维细胞表达ERK1/2、p-ERK1/2、JNK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK(均为P<0.05)。三组p-ERK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白总体差异均有统计学意义(均为P<0.05),且TNF-α可明显上调CCH成纤维细胞p-ERK1/2、p-JNK1/2、p38 MAPK、p-p38 MAPK蛋白的表达(均为P<0.05),杞精明目汤可显著下调TNF-α刺激后的CCH成纤维细胞表达p-ERK1/2、p38 MAPK(均为P<0.05)。三组ERK1/2、p38 MAPK mRNA表达总体差异均有统计学意义(均为P<0.05),且TNF-α可明显上调CCH成纤维细胞ERK1/2、p38 MAPK mRNA的表达(均为P<0.05),杞精明目汤可显著下调TNF-α刺激后的CCH成纤维细胞p38 MAPK mRNA表达(P<0.05)。结论 TNF-α可上调CCH成纤维细胞MAPK信号通路的表达,导致CCH的发生发展,而杞精明目汤颗粒剂在一定程度上可下调MAPK信号通路的表达从而发挥治疗作用。 相似文献
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目的 制备特异性抗人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18 E6多肽抗体。方法 通过在线分析软件ABCpred和Bcepred预测HPV 18E6特异性多肽序列,将多肽序列与牛血清蛋白(bovine albumin,BSA)偶联,以偶联后多肽为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗HPV18 E6多肽单克隆抗体; 以HPV18阳性分泌物标本DNA为模板,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)获得HPV 18 E6基因,将该基因插入表达质粒pET-28a,转化大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导目的蛋白表达; 采用Western Blot方法鉴定抗HPV18 E6多肽抗体与目的蛋白的反应性。结果 建立的杂交瘤细胞株能稳定产生HPV18 E6多肽单克隆抗体; 重组表达质粒pET-28a-HPV18 E6测序证明构建正确,成功表达HPV18 E6蛋白; 纯化后的抗HPV 18 E6多肽抗体可特异性识别原核表达HPV 18 E6蛋白。结论成功制备抗HPV18 E6多肽序列,该抗体具有较好的特异性。 相似文献
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