辣椒粉中苏丹红Ⅰ的免疫亲和柱-高效液相色谱法检测

目的 建立用免疫亲和柱分离净化、高效液相色谱法测定食品中苏丹红Ⅰ的方法.方法 将制备好的苏丹红Ⅰ单克隆抗体与经修饰的琼脂糖凝胶Sepharose-4FF偶联,制成苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,样品经乙腈提取,并用PBS缓冲液稀释成20％乙腈-PBS溶液后,过实验室自制的苏丹红Ⅰ免疫亲和柱净化,建立IAC-HPLC法检测苏丹红I含量.结果 测得辣椒粉中SudanⅠ的回收率为29.12％ ～90.32％,并随机抽检了市售的及自种的四种辣椒粉,检测结果均为阴性.结论 成功制备了苏丹红Ⅰ免疫亲和柱,并建立了免疫亲和柱-HPLC法测定辣椒粉中的苏丹红Ⅰ的方法.     

苏丹红I直接竞争ELISA检测方法的研究

苏丹红的快速检测方法是应用于快速、高效的检测食品中苏丹红含量的有效方法,利用本实验室获得的苏丹红I单克隆抗体,合成了HRP酶标记苏丹红I抗体,同时合成了HRP酶标记苏丹红I抗原,分别建立了苏丹红I直接竞争ELISA的检测方法,为苏丹红I的快速检测方法提供了依据.     

蒜氨酸酶基因水平研究进展

蒜氨酸酶又叫半胱氨酸亚砜裂解酶,能将蒜氨酸催化成蒜素,后者具有抗血小板聚集、调节血压、降血糖、降胆固醇、抗细菌、抗病毒、抗真菌、抗寄生虫、增强免疫力、抗肿瘤和抗氧化等药理学功能。该文从基因水平角度,综述了蒜氨酸酶在不同葱属植物中的基因研究情况,归纳了NCBI核酸数据库中检索到的九种植物中32条蒜氨酸酶核酸序列,并具体介绍了洋葱鳞茎蒜氨酸酶基因;综述了蒜氨酸酶基因研究方法发展历程以及蒜氨酸酶基因重组与表达的研究进展。     

丝状噬菌体pⅧ展示系统表达赭曲霉毒素A模拟表位及应用研究

目的传统赭曲霉毒素A(OTA)竞争抗原毒性强、成本高、制备难度大。将OTA模拟表位展示于丝状噬菌体pⅧ表面,获得无毒、易于制备的OTA竞争抗原替代物。方法构建带有OTA模拟表位的重组噬菌粒pC89-COTA,为了提高OTA模拟表位与抗体的结合率,在OTA模拟表位序列5'端引入了肠激酶酶切位点。噬菌粒转化进大肠杆菌XL1-blue后再经野生KM13噬菌体感染,获得带有OTA模拟表位的重组噬菌体。用该噬菌体代替竞争抗原建立OTA的无毒ELISA分析方法。结果成功表达出带有OTA模拟表位的重组噬菌体,经肠激酶酶切的OTA模拟表位噬菌体与OTA抗体的结合效率显著高于未酶切的噬菌体。利用酶切后的噬菌体建立OTA的无毒ELISA分析方法,其最低检出限为100pg/ml,线性范围为250pg/ml～1000pg/ml。进行加标回收实验,回收率为99.8%～112.3%,相对标准偏差为8.19%～11.64%,测试16份市售样品,阳性率为31.25%。结论成功表达了OTA模拟表位噬菌体,建立了OTA的无毒ELISA检测方法。     

黄曲霉毒素B1抗原模拟表位高效表达

目的 构建黄曲霉毒素B1(AFB1)模拟表位pⅧ噬菌体展示载体,为建立无毒害免疫学检测方法提供依据.方法 构建呈现AFB1抗原模拟表位的噬菌体载体,并引入肠激酶酶切位点,诱导表达,肠激酶处理重组噬菌体颗粒,酶联免疫吸附法鉴定反应原性.结果 重组质粒酶切谱、PCR扩增结果及测序结果均与设计一致,在pC89载体中插入了GACGACGACGACAAGCATCCTAGTGATCCGCGTCATGGG序列,肠激酶处理后的重组噬菌体颗粒可与AFB1抗体特异性结合,吸光度(A)值可达2.112.结论 成功构建了包含肠激酶酶切位点的AFB1抗原模拟表位pⅧ噬菌体表达载体,重组噬菌体颗粒经初步表达有一定反应原性.     

次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型产抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体杂交瘤细胞的筛选

目的筛选次黄嘌呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶(HAT)敏感型产抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体杂交瘤细胞株,为双特异性抗体的制备作好准备。方法在培养瓶中培养产抗苏丹红I单克隆抗体杂交瘤细胞株H6,取长到对数生长期的细胞,加入1.25μg/ml的8-氮鸟嘌呤,继续培养,当细胞长到60%左右时,弃去一部分细胞,加入2.5μg/ml的8-氮鸟嘌呤,继续培养,重复以上操作,倍比提高8-氮鸟嘌呤的含量,直至8-氮鸟嘌呤浓度达到20μg/ml,取细胞上清ELISA检测其产抗体情况。结果成功诱导筛选到HAT敏感的次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型杂交瘤细胞6株,均能分泌抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体。结论该方法能成功筛选HAT敏感型抗苏丹红Ⅰ单克隆抗体杂交瘤细胞。