基于UPLC-Q-TOF/MS的渴络欣胶囊化学成分研究

目的 采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）技术对中药复方渴络欣胶囊中的化学成分进行研究。方法 采用ACQUITY UPLC HSS T3 C₁₈色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.8 μm）,以甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,体积流量为0.3 mL/min;采用ESI源在正、负离子模式下分别采集数据。根据化合物精确相对分子质量及二级碎片离子信息,结合参考文献数据,鉴定渴络欣胶囊的主要化学成分。结果 从渴络欣胶囊中分离和鉴定出54个化学成分,包括蒽醌类化合物10个、黄酮类化合物10个、萜类化合物7个、酚类化合物16个等。结论 首次采用UPLC-Q-TOF/MS联用技术研究渴络欣胶囊中化学成分,进一步明确了其物质基础。     

基于细胞代谢组学的商陆皂苷甲诱导HKC细胞损伤的机制研究

目的 基于细胞代谢组学技术,考察商陆皂苷甲（EsA）诱导人肾小管上皮HKC细胞损伤前后对细胞代谢产物的影响,寻找潜在的生物标志物。方法 MTT法检测EsA 0（对照组）、0.125、0.250、0.500、0.750、1.000 mmol/L对HKC细胞活力的影响;试剂盒法检测EsA 0（对照组）、0.25、0.75 mmol/L对HKC细胞上清LDH含量的影响,明确EsA肾细胞毒性;利用UPLC-Q/TOF-MS分析技术,将EsA 0（对照组）、0.25、0.75 mmol/L作用24 h的HKC细胞进行代谢组学分析,采用Progenesis QI软件进行数据处理,将得到的数据导入SIMCA-P12.0 software进行多元统计分析,利用主成分分析（PCA）剔除离群值,进行正交偏最小二乘分析（OPLS-DA）得到变量权重值（VIP）,选取VIP＞1的差异代谢物,进行检验,获得具有统计学意义的生物标志物。通过HMDB、KEGG、METLIN等代谢物数据库对生物标记物进行鉴定,利用MetPA平台对进行代谢通路分析。结果 与对照组比较,EsA在大于0.25 mmol/L时对HKC细胞活力有显著的抑制作用（P<0.05、0.01）;细胞上清液中LDH含量显著上升（P<0.05）。通过代谢组学技术和相关数据库分析筛选出了15个生物标志物,主要涉及甘油磷脂代谢、嘧啶代谢、鞘脂代谢、氨基酸代谢和能量代谢途径。结论 EsA可诱导肾细胞损伤,可能与氧化应激损伤,氨基酸代谢失调,能量代谢异常以及脂质代谢紊乱相关。     

UPLC-Q-TOF/MSE结合UNIFI信息学平台快速检测与鉴别九味镇心颗粒中的化学成分

目的 建立UPLC-Q-TOF/MS^E结合UNIFI用于九味镇心颗粒化学成分的快速检测与鉴别方法。方法 采用UPLC-Q-TOF/MS^E技术对九味镇心颗粒中的化合物进行分析,使用Waters Acquity UPLC BEH C₁₈色谱柱（100 mm×2.1 mm,1.7 μm）,以0.1%甲酸水（A）-0.1%甲酸乙腈（B）洗脱（0~14 min,2% B;14.0~16.5 min,60% B;16.5~20.0 min,98% B）,体积流量设为0.3 mL/min,柱温为40℃,进样量5 μL。质谱分析采用电喷雾离子源,正、负离子模式下依赖MS^E方式采集数据,采集范围为m/z 50~1 200,基于UNIFI在线软件结合MassLynx软件及人工审核进行化学成分鉴定与匹配。结果 实现了九味镇心颗粒中89种化学成分的快速鉴别,其中有29个来源于君药（人参、酸枣仁）,47个来源于臣药（茯苓、五味子、延胡索、远志）,12个来源于佐药（地黄、天冬）,1个来源于使药（肉桂）。结论 建立的基于UPLC-Q-TOF/MS^E结合UNIFI方法首次对九味镇心颗粒的化学成分进行快速的筛选,为发现中药大复方中的非靶向分析和成分鉴定提供了新的视角,也可以为其物质基础、质量控制的研究提供依据。     

基于LC-MS和分子对接策略分析金芪降糖片治疗2型糖尿病的药效物质基础

目的:基于LC-MS和分子对接策略,探讨金芪降糖片治疗2型糖尿病的药效物质基础。方法:该研究采用UPLC-Q-TOF-MS技术鉴定其化学成分,在此基础上,结合在线疾病数据库和蛋白互作筛选疾病靶点,采用分子对接技术验证金芪降糖片中化学成分与疾病靶点的相互关系,寻找金芪降糖片治疗2型糖尿病的潜在药效物质基础。结果:基于UPLC-QTOF-MS,金芪降糖片共鉴定出51个化学成分,其中黄芪31个,黄连16个,金银花4个;通过CTD数据库、拓扑学分析以及相关文献,确定过氧化氢酶(CAT)受体,过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARG)受体和胰岛素(INS)受体为关键靶点;通过分子对接技术发现木兰花碱,黄连碱,表小檗碱,黄芪甲苷,咖啡酸,巴马汀,小檗碱,药根碱,小檗红碱,berberastine,groenlandicine,lycoranine B,demethyleneberberine,isomucronulatol-7-O-glucoside和calycosin-7-O-glucoside为金芪降糖片治疗2型糖尿病潜在的药效物质基础。结论:蛋白互作与网络拓扑学分析有助于实现核心靶点的快速定位;分子对接技术可实现大规模的虚拟筛选具有潜力的候选化合物;该文整合LC-MS和分子对接技术可方便快捷的寻找中药复方中的潜在药效物质基础,为后续的药物活性筛选实验提供参考。     

丹参饮治疗糖尿病心肌病的网络药理学研究

目的通过整合网络药理学和生物信息学方法,构建活性成分-作用靶点、蛋白-蛋白相互作用(PPI)、关键靶点相应的生物功能和通路网络,预测丹参饮治疗糖尿病心肌病的分子作用机制。方法采用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)数据库筛选及预测丹参饮的生物活性成分及其潜在作用靶点,同时检索PharmGKB等4个数据库挖掘糖尿病心肌病的相关靶点,对2种靶点进行PPI网络构建,交互处理得到丹参饮治疗糖尿病心肌病的关键靶点,并利用SystemsDock WebSite对其进行分子对接验证;运用DAVID(Version 6.8)平台对关键靶点进行Pathway分析,结合Omicshare数据库筛选核心通路并利用Reactome数据库进行注释。结果以口服生物利用度(OB)和类药性(DL)数值作为筛选标准,从丹参饮中共获得78个活性成分,涉及到506个丹参饮治疗糖尿病心肌病的可能靶点,这些靶点主要富集在磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等多条信号通路上。结论本研究揭示了丹参饮治疗糖尿病心肌病可能的作用机制,体现了中药复方多成分、多靶点、多途径治疗疾病的特点,为进一步深入研究其作用机制提供了新思路。     

基于网络药理学探讨枣仁安神颗粒治疗失眠的作用机制

目的 基于网络药理学探讨枣仁安神颗粒治疗失眠的作用机制。方法 通过查阅相关文献,挖掘枣仁安神颗粒的入血成分,并采用反向分子对接,预测入血成分的相关靶点,与失眠靶点进行交集映射,获得其治疗失眠的作用靶点。利用蛋白互作筛选核心靶点,并进行分子对接验证。基于共有靶点,采用功能注释生物信息学芯片进行分析,得到枣仁安神颗粒治疗失眠的关键通路。结果 方中3味中药酸枣仁、丹参、北五味子共得到29个入血成分和184个潜在靶点,其中19个成分、60个靶点和36条通路与失眠极为密切,主要涉及神经活性配体-受体相互作用、色氨酸代谢、5-羟色胺能突触、GABA能突触等相关分子环节。结论 方中3味中药以作用靶点为媒介,连接入血成分及相关通路,从而发挥抗失眠的生物学效应,体现了中药多成分、多靶点,多途径协同起效的作用特点。     

基于网络毒理学商陆致大鼠肾损伤作用机制研究

目的基于网络毒理学策略,研究商陆致大鼠肾损伤的潜在作用机制。方法通过查阅在线数据库并挖掘文本,建立商陆的化学成分库;基于药效团的反向分子对接技术,预测化学成分的相关靶标,并与肾毒性靶标交集投射,得到商陆致大鼠肾毒性的作用靶标,并反推获得商陆致肾毒性的潜在物质基础;利用大规模蛋白互作筛选关键靶标,并通过GO和KEGG生物学注释分析肾毒性关键通路。构建商陆皂苷甲诱导肾毒性的大鼠模型,并采用分子生物学方法检测相关通路的重要靶标表达情况。结果通过文献和相关数据库共得到56个化学成分和148个潜在靶标,其中38个成分,34个靶标和93条通路与肾毒性的产生极为密切,主要涉及TNF信号通路、钙离子信号通路、NF-κB信号通路、VEGF信号通路等相关分子环节;病理结果显示,给予商陆皂苷甲7d后,大鼠肾脏组织发生了不同程度的损伤;Westernblotting法检测显示核转录因子-κB(NF-κB)抑制蛋白α(IκBα)蛋白表达下调(P0.01),p-IκBα蛋白表达上调(P0.05);ELISA法定量检测结果显示商陆皂苷甲使大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平显著升高(P0.05)。结论网络毒理学可用于初步筛选潜在毒性物质基础,基于网络毒理学筛选的商陆皂苷甲可诱导大鼠肾毒性,其分子机制与激动NF-κB信号通路,过表达炎性因子有关。     

Meta分析桥接网络药理学的黄连阿胶汤治疗2型糖尿病临床疗效评价及潜在作用机制初探

目的 基于Meta分析和网络药理学研究方法,评价黄连阿胶汤治疗2型糖尿病（T2DM）的临床疗效,初探其作用机制。方法 首先全面检索CNKI、VIP、Wanfang、PubMed、The Cochrane Library和Web of science数据库,查找截至2020年5月的黄连阿胶汤治疗T2DM的随机对照试验,根据Cochrane风险偏倚评估工具对纳入的文献进行评价,采用Review Manager软件进行定量合成;而后基于网络药理学,筛选黄连阿胶汤中的化学成分及其作用靶点,与T2DM靶点映射对比后利用生物信息学技术进行关键通路的相关注释,探讨黄连阿胶汤治疗T2DM的潜在机制。结果 Meta分析纳入15篇随机对照试验（RCTs）,共计1 254例受试者,结果显示,西药常规治疗的基础上联合使用黄连阿胶汤可显著提高有效率,且降血糖和调血脂效果更优;网络药理学通过在线数据库共得到258种化学成分和985个作用靶点,其中60种成分、121个靶点和181条途径与T2DM的治疗密切相关,主要涉及晚期糖基化终末产物及其受体（AGE-RAGE）信号通路、缺氧诱导因子-1（HIF-1）信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路、胰岛素抵抗（IR）等。结论 根据已有研究数据,黄连阿胶汤联合西药常规治疗可增加T2DM的临床疗效,降低血糖和调节血脂,主要通过改善IR、减轻炎症反应、降低氧化应激等治疗T2DM。