猪苓多糖协同卡介苗对巨噬细胞表达CD11b、CD18以及协同刺激分子的影响

目的：了解猪苓多糖协同对巨噬细胞J774 A.1CD11b、CD18及协同刺激分子表达的影响.方法：应用流式细胞术检测猪苓多糖协同卡介苗刺激J774 A.10.5 h、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h及48 h后,其CD11b、CD18及协同刺激分子CD86、CD40表达的变化.结果：BCG（50 mg/L）组作用1 h后,J774 A.1 CD11b、CD18的表达高于空白组;联合应用PPS（50 mg/L）组刺激12 h,其CD11b、CD18的表达明显高于BCG组（P＜0.05）.BCG组0.5 h、3 h、12 h、24 h、48 h,其协同刺激分子的表达增高;联合应用PPS协同刺激J774 A.10.5 h、1 h、3 h、6 h,协同刺激分子的表达高于BCG组.结论：卡介苗能提高巨噬细胞CD11b、CD18及协同刺激分子的表达,联合应用猪苓多糖可使其作用增强.     

SARS患者康复期淋巴细胞功能状态及T细胞受体Vβ24个亚家族表达的格局

背景:严重急性呼吸道综合征(severe acuterespi ratory syndrome,SARS)是由SARS相关冠状病毒感染引起的急性传染性疾病。但目前其康复期患者细胞免疫状态仍有待进一步研究。目的:观察SARS患者康复期淋巴细胞功能状态和T细胞受体(TCR)Vβ24个亚家族表达的格局。设计:前后对照观察。单位:广东省中医院中心实验室。对象:选择2003-01/04在广州中医药大学第二附属医院收治的76例治愈的SARS患者,全部病例均符合"非典型肺炎的临床诊断标准"、"非典型肺炎重症病例诊断标准、出院标准"及《中医临床诊疗术语证候部分》的诊断标准,男30例,女46例,平均(32±11)岁。选择10名同期健康到院体检者,女5名,男5名,平均(32±7)岁,所有受试对象对检测项目知情同意。方法:①TCRVβ24个亚家族的表达检测:取受试对象全血2mL,用EDTA-K2抗凝管抗凝。在流式细胞术检测专用管中,分别加入各种荧光素标记的mAb:抗CD3、抗CD4、抗CD8、抗CD25、抗CD28、抗HLA-DR、PC5-抗CD3mAb、TCRVβ1(PE FITC)、Vβ2(PE FITC)、Vβ3(FITC)、Vβ4(PE FITC)、Vβ5.1(PE FITC)、Vβ5.2(PE)、Vβ5.3(PE)、Vβ7.1(PE FITC)、Vβ7.2(FITC)、Vβ8(FITC)、Vβ9(PE)、Vβ11(PE)、Vβ12(FITC)、Vβ13.1(PE)、Vβ13.2(PE)、Vβ13.6(PE FITC)、Vβ14(FITC)、Vβ16(FITC)、Vβ17(PE FITC)、Vβ18(PE)、Vβ20(FITC)、Vβ21.3(FITC)、Vβ22(PE FITC)和Vβ23(PE)10μL,然后加入抗凝血50μL。混匀后,于室温避光孵育15min,再加入溶血素溶血、洗涤。最后将沉淀溶在300μLPBS中,用CoulterESP流式细胞仪进行检测。②T细胞亚群,T、B细胞的活化状态及Ts细胞和Tc细胞百分率的检测:每次收集5000个细胞,用仪器所带软件分别计算T细胞亚群(CD3、CD4和CD8)、活化的T、B细胞(CD3 /CD25 、CD3 /HLA-DR 、和CD3-/HLA-DR )、Ts细胞和Tc细胞(CD8 /CD28 、CD8 /CD28-)的百分率。主要观察指标:①T细胞亚群(CD3、CD4和CD8)的表达。②活化的T、B细胞(CD3 /CD25 、CD3 /HLA-DR 、和CD3-/HLA-DR )的表达。③Ts细胞和Tc细胞(CD8 /CD28 、CD8 /CD28-)的百分率。④TCRVβ24个亚家族的表达。结果:所有受试对象均进入TCRVβ24个亚家族检测结果分析,74例SARS患者及健康对照者10名均进入其余检测结果分析。①T细胞亚群的检测结果:CD4 细胞的百分率均数低于参考值[(33.33±6.64)%,(43±9)%,P<0.01],CD8 细胞的百分率高于参考值[(34.07±6.40)%,(30±9)%,P<0.01]。②活化的T、B细胞表达检测:表达HLA-DR的T、B细胞增加,而表达CD25的T细胞减少。有53例CD25 细胞的百分率低于正常参考值,有64例CD3 /CD25 T细胞的百分率低于正常参考值。只有CD3 /HLA-DR 和CD3-/HLA-DR 细胞的百分率高于正常参考值,其中表达CD3 /HLA-DR 的T细胞增加36例,表达CD3-/HLA-DR 的T细胞增加30例。③Ts细胞和Tc细胞的百分率:Ts细胞(CD8 /CD28-)的百分率较参考值增高[(28.75±7.31)%,(15.99±5.1)%,P<0.01];Tc细胞(CD8 /CD28 )的百分率则低于参考值[(5.99±3.60)%,(13.2±4.1)%,P<0.01]。其中有39例Tc细胞的百分率降低,有48例Ts细胞的百分率升高,CD4 与CD8 T细胞的比值均在正常参考值范围内。④TCRVβ24个亚家族表达:康复期SARS患者TCRVβ24个亚家族表达中,TCRVβ14的表达最高,TCRVβ5.3、和23表达次之,出现TCRVβ24个亚家族表达的不同。正常对照组中只有TCRVβ14表达最高,与SARS患者的结果相一致,但TCRVβ24个亚家族的分布格局不同。两组进行比较,Vβ1、Vβ5.2、Vβ5.3、Vβ7.2、Vβ9、Vβ11、Vβ13.1、Vβ13.2、Vβ17、Vβ18、Vβ22和Vβ23的表达差异显著,康复期SARS患者组均高于正常对照组(P<0.05-0.01)。结论:康复期SARS患者CD8 CD28-T细胞数的升高可导致CD8 T细胞数升高;而Ts细胞数的增加,因其分泌的抑制因子增多,从而造成CD3 和CD4 T细胞数降低。SARS患者康复期TCRVβ24个亚家族在T细胞上的表达不同。CD3 /HLA-DR 和CD3-/HLA-DR T细胞数的升高,可能与T、B细胞的活化较晚有关。     

猪苓多糖对卡介苗刺激巨噬细胞表达前炎症细胞因子mRNA的影响

目的检测猪苓多糖（polyporus polysaccharide，PPS）协同卡介苗（bacillus calmette guerin，BCG）对巨噬细胞自介索-1β（Interleukin-lbeta，IL-1β）和肿瘤坏死因子α（Tumor Necrosis Factor-alpha，TNF-α）mRNA表达的影响，研究其参与免疫启动的过程。方法将BCG或BCG加PPS作用于体外培养的小鼠巨噬细胞J774细胞株，运用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术，检测巨噬细胞IL-1β和TNF-α mRNA的表达水平。结果单用BCG或BCG和PPS合用刺激巨噬细胞后，IL-1β和TNF-53 mRNA表达水平较阴性对照组均显著升高。BCG和PPS合用，巨噬细胞IL-1βmRNA表达水平比单用BCG高，两者差异有显著性。同等剂量的情况下，单用BCG或BCG和PPS合用，两者TNF-α mRNA表达水平无明显差异。表达峰值时间：TNF-α为0．5h，IL-1β为3h。结论BCG可增强巨噬细胞IL-1β和TNF-α mRNA的表达，一定剂量的PPS能协同BCG提高IL-1β mRNA的表达，参与免疫启动反应。     

三次随访康复期SARS患者T细胞亚群的分析

目的了解康复期SARS患者外周血T细胞及其亚群的变化。方法对出院后的康复期SARS患者,采用统一调查问卷及实验室检测进行3次随访研究。应用流式细胞仪检测CD3 、CD4 、CD8 、CD8 CD28 、CD8 CD28-、CD3 CD25 、CD3 CD69 、CD3 HLA-DR 、CD4 CD45RA 、CD4 CD45RO T细胞的表达率及CD4 /CD8 的比值,结果用SPSS和PEMS统计软件进行分析。结果3次随访中,CD3 、CD3 CD4 、CD3 CD8 、CD8 CD28 、CD28 、CD4 CD45RA 、CD4 CD45RO 的百分率均低于正常参考值(P<0.01),而CD8 CD28-的百分率高于正常参考值(P<0.01)。从三次随访的趋势来看,CD8 CD28-的表达逐渐下降,活化相关分子CD3 CD69 、CD3 CD25 、HLA-DR的表达也呈下降趋势。CD4 /CD8 的比值逐渐上升,恢复至正常水平。结论随着康复期的延长,病毒对T细胞及其亚群的影响逐渐减少,且CD8 细胞的恢复较快。     

SARS患者急性期病情严重程度与康复期免疫功能的关系

目的考察SARS患者发病期病情轻重程度与康复期机体免疫功能受损的关系。方法将患者分为未使用呼吸机组（A）和使用过呼吸机组（B）,通过回顾性分析SAILS患者住院期间和康复期的病例资料,比较两组患者肺部病灶阴影范围和吸收时间、WBC总数及其分类、康复期淋巴T细胞亚群与活化分子等。结果B组的肺部病灶范围在第2周内显著性大于A组,吸收时间也长于A组;A组的WBC总数,中性（N）、淋巴细胞（L）计数和百分数均在正常参考值范围,B组WBC总数、N计数与百分数高于A组,L百分数低于A组;第1次随访B组CD8^＋、CD8^＋／CD28^-、CD3^＋／HLA-DR^＋T细胞显著性高于A组,CD3^-／HLA—DR^＋细胞显著低于A组;第2次随访仅B组CD3^-／HIA—DR^＋细胞仍显著低于A组,其余免疫细胞无统计学差异。结论SAILS患者未使用呼吸机组较使用过呼吸机组肺部病理性损害小,免疫功能基本正常或受损程度很小。     

两次随访的康复期SARS患者T细胞亚群及其相关活化分子的研究

目的 :探讨康复期SARS患者外周血T细胞亚群及其相关活化分子的变化。方法 ::对出院后的SARS患者 ,采用统一调查问卷及实验室检测进行随访研究。两次随访中 ,应用流式细胞仪检测了我院 70余例经中西医结合治疗的康复期SARS患者外周血中CD3 、CD4 、CD8 、CD8 CD2 8 、CD8 CD2 8-、CD3 CD2 5 、CD3 CD6 9 、CD3 HLA DR T细胞的百分率及CD4 /CD8 T细胞的比率的改变 ,并以描述性分析及t检验进行比较分析。结果 :两次随访中 ,CD3 、CD4 和CD8 CD2 8 T细胞的百分率 (均值 )及CD4 /CD8 T细胞的比率 ,均明显低于正常值 (P <0 .0 5 ) ,而CD8 CD2 8-T细胞的百分率则显著增高 (P <0 .0 1)。第 2次随访中 ,检测的CD3 、CD8 、CD3 CD2 5 、CD3 CD6 9 及CD3 HLA DR T细胞的百分率 (均值 ) ,及CD4 /CD8 T细胞的比率 ,与第 1次的相比较差异较显著 (P <0 .0 1) ,其余项目差异均不明显。结论 :随着康复期的延长 ,患者的免疫功能逐渐恢复 ,病毒对T细胞活化的影响逐渐减少。     

原发性高血压肝阳上亢患者外周血单个核细胞蛋白质组的双向电泳分析

目的：探寻高血压肝阳上亢证候相关蛋白。方法：应用双向电泳技术分离10例原发性高血压肝阳上亢患者及10例正常对照者外周血单个核细胞的总蛋白，结果用PDQuest7．1．1分析．结果：两组蛋白斑点总体分布相似，大部分蛋白集中分布在PI5．0～8．0，Mr17．5～45．0KD区域。高血压肝阳上亢病例检测到917个点，其中为其独自所有的点有515个。正常对照908个点，两者完全匹配的点有402个。在PI5．0～8．0，Mr17～45KD区域，实验组和正常对照所检测到的蛋白斑点分别为390和402个，其中互相完全匹配的斑点为143个，其余为差异蛋白。结论：原发性高血压肝阳上亢电泳图谱中独有的515个点可能与高血压肝阳上亢证候相关。此结果亦为下一步蛋白鉴定提供基础.     

参附注射液对慢性心力衰竭大鼠JAK-STAT细胞信号传导调节的研究

目的 探讨参附注射液对心力衰竭大鼠JAK-STAT信号通路的调节作用. 方法 将40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、参附注射液组、贝那普利组,每组各10只.采用阿霉素腹腔注射法对模型组、参附注射液组、贝那普利组建立慢性心力衰竭大鼠模型.造模成功后,分别给予等容生理盐水、参附注射液0.8 ml/100 g,贝那普利0.045 mg/100 g灌胃,连续干预8周.测定并比较各组大鼠心功能和心肌肥厚指标,心肌组织中白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、内皮素、血管紧张素Ⅱ（Ang-Ⅱ）的含量,并采用免疫组化的方法观察大鼠心肌组织JAK1、STAT3蛋白的表达.结果 各组大鼠间心功能指标、心肌肥厚指标、IL-6、TNF-α、内皮素、Ang-Ⅱ水平比较,差异均有统计学意义（P均＜0.05）.进一步两两比较,参附注射液组、贝那普利组大鼠较模型组各指标均有显著改善（P均＜0.05）,且参附注射液组在改善左心室收缩压、左心室内压最大上升速率、TNF-α及内皮素水平较贝那普利组更为明显（P均＜0.05）.参附注射液组及贝那普利组大鼠JAK1、STAT3蛋白的表达显著高于对照组,低于模型组（P均＜0.05）,但是两组间比较差异均无统计学意义（P均＞0.05）.结论 参附注射液通过阻断JAK-STAT细胞信号传导通路的介导,抑制机体细胞因子释放,减少JAK1、STAT3蛋白表达,抑制心肌重塑,改善心肌舒缩功能.     

从调控T淋巴细胞亚群失衡探讨健脾益气法改善支气管哮喘缓解期气道炎症的免疫学机制

支气管哮喘(简称"哮喘")是临床常见的气道炎症性疾病,T淋巴细胞亚群在哮喘气道炎症机制中发挥重要作用,其中效应性T细胞与调节性T细胞免疫失衡是主要机制.中医学认为,"伏痰"是哮喘缠绵难愈的宿根,正气亏虚是伏痰产生的根本原因,脾虚失运是伏痰产生的关键所在,因此健脾益气、扶正祛伏痰应是哮喘重要治法.伏痰与现代医学所谓的哮喘...     

严重急性呼吸综合征患者康复期T细胞受体Vβ24个亚家族取用格局分析

严重急性呼吸综合征(SARS)，其病原体是SARS相关冠状病毒。T细胞通过具有高度多样性的T细胞受体(TCR)识别外来病毒抗原，并参与疾病的发生和发展过程。本研究应用流式细胞术，观察了我院60例SARS康复期患者和10例健康志愿者外周血TCRVB24个亚家族取用格局。