实时荧光定量PCR检测早产孕妇血浆中游离胎儿DNA

近年来研究学者证实孕妇血浆中存在着胎儿DNA，这一发现有极重要的潜在临床应用价值，这为非损伤性的疾病诊断及孕期监测提供了一种新的工具。本研究应用实时荧光定量聚合酶链反应（RQ-PCR）检测出现早产宫缩的孕妇血浆中游离胎儿DNA来确定胎儿DNA在母血浆中的存在，以期为孕期监测和早产的病理生理过程的进一步研究奠定基础。     

新辅助化疗联合广泛子宫切除加盆腔淋巴结清扫手术治疗67例子宫颈癌的临床分析

目的探讨术前新辅助化疗联合广泛子宫切除+盆腔淋巴结清扫对宫颈癌Ⅰb～Ⅱb期病人治疗。方法采用以多西他赛联合奥沙利铂的联合化疗方案对67例宫颈癌Ⅰb～Ⅱb期病人术前进行新辅助化疗1～2个疗程,临床观察有效后行广泛子宫切除+盆腔淋巴结清扫手术治疗。比较术前新辅助化疗和对照组的近期疗效情况。结果 67例术前新辅助化疗肿块妇科检查完全消退14例,肿块缩小达30例,临床总有效率为65.7%。新辅助化疗后,癌灶周边及癌灶间质内淋巴细胞浸润明显增多,肿瘤直径有明显的缩小,阴道浸润有明显的改善,差异有统计学意义(P<0.01)。术前新辅助化疗组患者的盆腔淋巴结转移显著减少(P<0.05),手术时间、手术出血量和术中术后并发症均低于直接手术组,但差异无统计学意义(P>0.05)。术前化疗组的复发率和转移率均低于单纯手术组,其中3年复发转移率差异有统计学意义(P<0.05)。结论新辅助化疗对初治的宫颈癌Ⅰb～Ⅱb期病人,可增加手术机会,可提高手术切除率,减少术中及术后并发症,减少复发与转移,值得临床推广应用。     

耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌医院感染监测分析

目的探讨耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌(CRAB)引发的医院感染分布及耐药性,为寻求更有效的预防和控制方式提供科学依据。方法采用回顾性调查的方法,对2010年至2011年深圳市第二人民医院医院感染病例中鲍曼不动杆菌(ABA)引发的医院感染中CRAB的分布及耐药情况进行分析。结果两年医院感染病例共分离137株CRAB菌株,其中以呼吸道标本的来源居第一位,分离率为67.9%;科室分布以重症监护病房(ICU)分离率最高,为57.7%,其次是神经外科病房,为21.9%。结果显示CRAB菌株呈现高度耐药性,对头孢吡肟、头孢他啶、哌拉西林/他唑巴坦、氨苄西林/舒巴坦、阿米卡星、庆大霉素、左氧氟沙星、环丙沙星等耐药率均在90%以上,而对米诺环素耐药率最低,为2.2%,其次是头孢哌酮/舒巴坦,耐药率为44.5%。结论应继续加强CRAB监测,要重点关注ICU病房及呼吸系统医院感染的预防控制。     

应用实时荧光定量PCR检测母血浆胎儿DNA进行RhD基因型产前诊断

目的建立实时荧光定量PCR(real time PCR)技术检测RhD阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行无创性产前诊断胎儿RhD基因型的方法。方法通过微量DNA抽提技术提取母血浆中胎儿游离DNA,利用Real time PCR检测22例妊娠15～40周的单胎RhD阴性孕妇血浆中胎儿游离DNA,进行男性性别决定基因(SRY)和RhD基因外显子7、10和内含子4的特异性扩增,基因型结果与血清学RhD定型结果对比,评价该技术方法的准确性。结果孕妇血浆中存在游离胎儿DNA。19例RhD真阴性孕妇血浆中,14例均检测到胎儿游离DNA的RhD基因外显子7、10和内含子4的特异性扩增,判断为RhD阳性,基因定型结果与血清学表型相符。3例未检测到胎儿游离DNA的RhD基因特异性扩增,结果与胎儿血清学表型相符。因此检测胎儿游离DNA的RhD基因型准确率达到89.5%。另外2例只检测到RhD基因外显子10扩增,通过新生儿脐血血清学吸收放散试验确定为RhDel型。3例RhDel型孕妇血浆中检测到RhD基因扩增,不适于胎儿RhD基因型的分型。结论实时荧光定量PCR方法检测RhD阴性孕妇血浆中游离胎儿DNA进行无创性诊断胎儿RhD基因型...     

孕妇血浆中游离胎儿DNA的研究进展

从孕妇血中分离胎儿细胞是无创性产前诊断的一种确定方法，但由于母血中胎儿细胞数量极少，而且从母血中分离和富集胎儿细胞的技术不成熟，使它应用于临床有一定的困难。许多研究者一直致力于探索一种简便有效的无创性产前诊断方法，分子生物学技术的发展为分子分析提供了很多有用的工具。本文对检测母血浆中游离胎儿DNA在遗传病的产前诊     

早产孕妇血浆中游离胎儿DNA-SRY基因片段的定量检测

目的建立实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测早产孕妇血浆中游离胎儿DNA的男性性别决定基因(SRY)的方法。方法利用RQ-PCR技术检测25例正常孕妇和102例早产孕妇血浆中游离胎儿DNA-SRY基因,用一系列稀释的标准品建立此检测方法的标准曲线。结果RQ-PCR检测到早产孕妇血浆中游离胎儿DNA-SRY基因的存在,其特异性为100%,灵敏度92.7%,准确率96.1%。早产孕妇血浆中游离胎儿DNA-SRY的中位浓度为321.8拷贝数/mL,较正常孕妇高(P<0.05)。结论RQ-PCR能简单、快速、方便地对孕妇血浆的游离胎儿DNA-SRY基因进行检测,其灵敏度高,特异性好,能定量分析,对进一步了解早产的病理生理情况可能有一定的应用价值。     

中医药治疗重症肌无力系统评价的再评价

目的 对中医药治疗重症肌无力（myasthenia gravis，MG）的系统评价进行再评价研究。方法 计算机检索PubMed、EMbase、The Cochrane Library（2018年11期）、CBM、CNKI、万方等6个数据库，检索时限均为从建库至2018年11月20日。采用AMSTAR工具评价纳入系统评价的方法学质量，并应用GRADE证据评价工具进行证据质量分级。结果 共纳入相关系统评价或 Meta分析9篇，包含42个结局指标。方法学质量评价结果显示，所纳入9篇系统评价的首要问题是均未提供前期设计方案，其次是未说明相关利益冲突（7篇）。证据质量分级结果显示，在42个结局指标中，极低质量11个，低质量27个，中等质量仅4个，导致降级最主要因素为局限性（42个结局指标），其次为不精确（19个结局指标）和不一致（18个结局指标）。结论 基于系统评价再评价结果，中草药治疗MG具有一定疗效和安全性，针灸治疗MG的系统评价文献数量较少，鉴于二者均存在方法学质量总体较差、证据等级总体偏低，该研究结论存在一定局限性，临床医师在使用这些证据进行临床决策时尚需谨慎。建议今后进一步加强原始研究顶层设计科学性和报告规范性，同时更多关注中草药联合针灸治疗MG的综合效应的系统评价研究。     

基于网络药理学和分子对接探讨升陷汤治疗重症肌无力的作用机制

目的 通过计算机网络药理学及分子对接技术，预测升陷汤治疗重症肌无力的药效基础和核心靶点并通过动物实验进一步验证已明确其作用机制。方法 通过中药系统药理学分析平台（TCMSP）数据库筛选升陷汤的活性成分和潜在靶点，利用GeneCards等数据库筛选疾病相关的靶点；将药物与疾病靶点互相映射取交集；结合STRING数据库和Cytoscape 3.8.2对交集靶点分别进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络分析、基因本体（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路分析；运用Cytoscape 3.8.2软件构建疾病-中药活性成分-靶点网络图；运用AutoDock和PyMOL软件对中药的关键活性成分与Hub gene进行分子对接验证，最后采用Rα97-116肽段主动免疫造模法，成功构建实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）大鼠模型后将分子对接验证得到的核心靶点进行动物实验验证。结果 共获得655个疾病靶点，118个药物活性成分，21个药物与疾病交集靶点，3个Hub gene；GO富集发现主要涉及活性氧代谢过程的调节、蛋白质转运的正调控、建立蛋白定位的正调控等生物功能；经过KEGG通路富集分析，其主要涉及Toll样受体信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路、低氧诱导因子-1（HIF-1）信号通路、T细胞受体等信号通路等。分子对接结果显示槲皮素与Akt1结合能最低且稳定，并通过氨基酸残基LYS-30发生相互作用。蛋白免疫印迹法（Western blot）分析结果显示，升陷汤能显著抑制EAMG大鼠脾脏内磷酸化（p）-Akt蛋白的表达。结论 该研究初步揭示了升陷汤治疗MG的药理机制可能是主要化学成分通过调节关键核心蛋白Akt的表达，进而可能参与并影响PI3K/Akt等信号通路来实现的，为进一步深入研究奠定了理论基础及实验依据。     

微生态调节剂治疗细菌性阴道病与早产的预防

细菌性阴道病(BV)与早产直接相关.对患BV妊娠妇女早期给予治疗可明显降低不良妊娠结局发生率.药物如抗生素治疗有一定疗效,但妊娠期用药可能影响胎儿生长发育,同时也不能降低早产(PTD)的发病率.BV主要发病机制是阴道内乳酸杆菌减少导致菌群失调,采用从健康妇女阴道分离的乳酸杆菌为主要成分制成的微生态活菌治疗BV,对预防早产改善不良妊娠结局有重要意义.     

早产孕妇血浆中游离胎儿DNA-SRY基因片段的定量检测

目的 建立实时荧光定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测早产孕妇血浆中游离胎儿DNA的男性性别决定基因(SRY)的方法. 方法 利用RQ-PCR技术检测25例正常孕妇和102例早产孕妇血浆中游离胎儿DNA-SRY基因,用一系列稀释的标准品建立此检测方法的标准曲线. 结果 RQ-PCR检测到早产孕妇血浆中游离胎儿DNA-SRY基因的存在,其特异性为100%,灵敏度92.7%,准确率96.1%.早产孕妇血浆中游离胎儿DNA-SRY的中位浓度为321.8拷贝数/mL,较正常孕妇高(P＜0.05). 结论 RQ-PCR能简单、快速、方便地对孕妇血浆的游离胎儿DNA-SRY基因进行检测,其灵敏度高,特异性好,能定量分析,对进一步了解早产的病理生理情况可能有一定的应用价值.