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目的人单酰基甘油脂肪酶(human monoacylglycerol lipase,MAGL)是一类促进脂肪分解成甘油和脂肪酸的丝氨酸水解酶,是抗肿瘤药物研发的新靶点。为了建立高通量的MAGL抑制剂筛选模型,本研究对人MAGL进行了基因克隆、体外重组表达、纯化以及活性研究。方法通过RT-PCR方法从人脑总RNA中扩增人MAGL基因,并将该基因克隆入pET28a(+)表达载体。将重组蛋白在E.coli BL21(DE3)宿主菌中通过1mmol/L IPTG诱导表达。表达产物用Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱进行分离纯化,通过SDS-PAGE进行分析。以7-hydroxycoumarinyl arachidonate(7-HAC)为荧光底物进行酶的活性测定。结果成功扩增出人MAGL基因,并构建了pET28a-MAGL表达载体。SDS-PAGE检测结果表明重组人MAGL蛋白在宿主菌中的表达量可达菌体总蛋白量的25%,经Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱分离纯化后的重组蛋白纯度大于90%,其比活力达到7900IU/mg,,较纯化前提高了23倍。酶活性分析结果证明重组表达并纯化的蛋白具有单酰基甘油脂肪酶活性,另外,利用已知的MAGL抑制剂N-arachidonylmaleimide(NAM)对该酶表现出强的抑制活性,IC50值为0.53μmol/L。结论本研究成功利用大肠埃希菌原核表达体系重组表达并纯化了人单酰基甘油脂肪酶,为建立以MAGL为靶点的抗肿瘤药物筛选模型奠定了基础。 相似文献
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目的考察粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(Gm-csf)对乙型肝炎疫苗免疫原性及诱导的细胞免疫效果的加强作用。方法将Gm-csf和乙型肝炎疫苗分别采用4种不同方式免疫BALB/c小鼠,免疫后,制备脾细胞,再以相应的HBsAg体外刺激,酶联免疫法(ELISA)测定细胞因子分泌水平,MTT法测定脾细胞对抗原刺激指数;以YAC-1细胞为靶细胞,测定细胞毒性T淋巴细胞活性;同时ELISA法测定血清中特异性抗体IgG1和IgG2a。结果GM+疫苗组小鼠脾细胞产生的IFN-γ水平最高,显著高于其它组(P<0.05),而各免疫组IL-5水平没有显著差别(P>0.05);GM+疫苗组小鼠脾细胞对抗原刺激的刺激指数显著高于其它各组(P<0.05);GM+疫苗组小鼠脾细胞对YCA-1的杀伤性显著高于其它各组(P<0.01)。结论通过Gm-csf的联合免疫,可提高乙型肝炎疫苗的免疫原性,增强乙型肝炎疫苗诱导的细胞免疫水平。 相似文献
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母乳喂养对儿童体格生长的影响 总被引:1,自引:1,他引:0
<正>母乳喂养作为一种最自然的喂养方式,对儿童身心健康的影响一直是人们关注和研究的热点。本文就母乳喂养对儿童体格生长的影响及其机制综述如下。 相似文献
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大肠杆菌分泌表达重组人肝再生增强因子的纯化、鉴定与活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的建立一种大肠杆菌分泌表达型重组人肝再生增强因子(rhALR)的纯化工艺,并对产品进行鉴定和活性研究。方法通过沉淀、色谱等方法的条件优化,建立纯化工艺,通过电泳、HPLC、N-末端氨基酸测序、免疫杂交、同位素掺入、全波长扫描等方法对纯化产品进行鉴定和活性测定。结果建立了rhALR的纯化工艺路线,40%(NH4)2SO4沉淀,Butyl-S FF疏水色谱,CM-S FF离子交换色谱,Superdex-75分子筛色谱纯化,重组蛋白质的纯度大于95%。该蛋白质稳定存在的形式为二聚体,其单体的相对分子质量为15 000。该蛋白质结合辅酶黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD),对损伤后的肝细胞具有明显的促进作用,明显优于以包涵体形式表达的rhALR。结论从大肠杆菌分泌表达体系能分离纯化得到高纯度、具有生物学功能和活性的rhALR,是潜在的临床治疗肝病药物。 相似文献
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目的探讨经外周静脉置入中心静脉导管(PICC)规范化培训对降低肿瘤患者堵管发生的影响。方法收集2009—2010年我科行PICC的肿瘤化疗患者145例,2009年的67例作为对照组、2010年的78例作为观察组,对比经过规范化培训和未经规范化培训的护士为患者护理PICC,防止堵管的效果。结果观察组的堵管发生率及未通致拔管率均低于对照组,再通率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论对护理人员进行规范化导管相关知识和技能培训可降低PICC堵管发生率。 相似文献
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目的:探讨导乐陪伴分娩对产程、分娩结局及新生儿母乳喂养的影响。方法:对60例导乐分娩及60例非导乐分娩产妇的分娩方式、产程时间、对护士助产士的满意度、产妇泌乳始动时间进行比较。结果:导乐陪伴分娩组能够缩短产程,降低剖宫产率,提高阴道分娩率(P〈0.05);对助产士的满意度提高(P〈0.05),产妇泌乳始动时间提前(P〈0.05)。结论:导乐陪伴分娩是坚持以人为本的护理新模式,提高了产科的质量,在确保母婴安全方面效果明显,值得进一步推广。 相似文献
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目的:探讨小儿心肺复苏的抢救与护理对策。方法:对56例小儿心肺复苏患者进行抢救与有效的护理。结果:56例心跳呼吸骤停患儿经复苏囊加压给氧,后经口气管插管行机械通气并辅助徒手心脏按压,经静脉或气管应用常规心肺复苏药物有38倒恢复自主呼吸病情稳定,4例经抢救虽恢复心跳,因疾病或家属原因,放弃或转院治疗,14例死亡,其中10例因入院时心跳停止,复苏无效。结论:小儿心跳骤停早发现,判断准确,采取及时有效的抢救方法能进一步提高抢救成功率。 相似文献