安胃汤含药血清对胃黏膜肠上皮化生细胞内质网应激-自噬通路的影响

目的 观察安胃汤(黄连、制半夏、白芍等)含药血清对胃黏膜肠上皮化生(GIM)细胞的影响,并基于内质网应激(ERS)-自噬通路探讨其作用机制。方法 将SD大鼠随机分为空白组及安胃汤低、中、高剂量组(5.4、10.7、21.4 g·kg^-1·d^-1),每组5只;每日1次,连续灌胃给药7 d,制备空白血清及安胃汤含药血清。采用150μmol·L^-1鹅去氧胆酸(CDCA)干预24 h,诱导人胃黏膜上皮细胞(GES-1),复制GIM细胞模型。将细胞分为正常对照组(未经CDCA干预的GES-1细胞)、模型组及安胃汤低、中、高剂量组,以10%空白血清及安胃汤低、中、高剂量含药血清干预24 h。采用Western Blot法检测肠上皮细胞的特异因子MUC2、VILLIN、CDX2蛋白表达情况;MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡;免疫荧光法检测细胞中ATF6蛋白表达水平;RT-qPCR法检测细胞中GRP78、LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA表达水平;Western Blot法检测细胞中GRP78、LC3-Ⅱ、L...     

基于miR-584调控内质网应激途径安胃汤干预胃黏膜肠上皮化生作用机制研究

目的 探讨安胃汤基于miR-584调控内质网应激途径干预胃黏膜肠上皮化生细胞的作用机制。方法 运用鹅去氧胆酸诱导人胃黏膜GES-1细胞系构建胃黏膜肠上皮化生细胞模型;实验动物分为正常组、模型组、阴性对照组、安胃汤组,在此研究基础上设置miR 584 inhibitor组、miR 584 inhibitor NC组、miR 584 mimics组、miR 584 mimics NC组,分别进行瞬时转染后给予安胃汤含药血清干预。采用激光扫描共聚焦显微镜观察ER-Tracker Red变化,蛋白免疫印迹法检测内质网应激相关蛋白Caspase 12、GRP78、ATF6、PERK、CHOP表达情况和肠上皮化生相关蛋白CDX2、MUC2、KLF4、SOX2的表达。结果 安胃汤作用于胃黏膜肠上皮化生细胞,下调CDX2、MUC2、KLF4蛋白表达(P<0.01),上调SOX2表达(P<0.01),显著增强内质网相对荧光强度(P<0.01),显著上调肠上皮化生细胞中内质网应激相关蛋白Caspase 12、GRP78、ATF6、PERK、CHOP的表达(P<0.01);转染后给药...     

安胃汤含药血清对胃黏膜肠上皮化生模型细胞自噬及凋亡的影响

目的 探讨安胃汤（半夏、黄连、干姜、乌药、百合等）含药血清对胃黏膜肠上皮化生（Gastric intestinalmetaplasia,GIM）模型细胞自噬及凋亡的影响。方法 采用鹅去氧胆酸（CDCA）诱导人胃黏膜上皮细胞GES-1,制备GIM细胞模型。实验分为正常组（正常胃黏膜上皮细胞GES-1常规培养）、模型组（经CDCA复制成GIM模型后常规培养）、空白对照组（GIM模型细胞以等量空白血清培养）、安胃汤组（GIM模型细胞+7%安胃汤含药血清）,各组细胞干预24 h后检测。采用流式细胞术（Annexin V-PE/7-AAD双染法）检测细胞凋亡;免疫荧光双标法检测肠上皮化生相关蛋白SOX2、CDX2的表达情况;透射电镜观察细胞超微结构及自噬情况;qRT-PCR法检测细胞LC3、Bax mRNA表达情况;Western Blot法检测细胞MUC2、KLF4、LC3、Bax蛋白表达情况。结果 与正常组比较,模型组细胞的MUC2、KLF4蛋白表达显著上调（P<0.01）,细胞的凋亡率明显降低（P<0.05）;SOX2荧光强度明显降低（P<0.05）,CDX2荧光强度显著...