三黄泻心汤活血化瘀优势方抗动脉粥样硬化的作用机制

目的:研究三黄泻心汤活血化瘀优势方对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的影响并探讨其抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:采用体外培养的HUVECs,分为空白组,ox-LDL损伤组(模型组),三黄泻心汤活血化瘀优势方15.63,31.25,62.50 mg·L-1组;用200 mg·L-1ox-LDL孵育24 h,造成HUVECs损伤模型;细胞存活率采用噻唑蓝(MTT)比色法测定,放射免疫法检测细胞上清液中内皮素(ET-1),6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α),血栓烷素B2(TXB2)含量,半自动生化分析仪检测抗氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),一氧化氮(NO)水平。采用试剂盒荧光定量法检测活性氧(ROS)含量,检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1),血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)水平酶联免疫吸附测定。细胞凋亡率及线粒体膜电位变化采用流式细胞术,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax),半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine aspartate-specific protease-3,Caspase-3),Caspase-9表达。结果:与空白组比较,模型组HUVECs存活率降低;MDA,MCP-1,ICAM-1,VCAM-1的水平升高,SOD和NO含量降低,ROS的分泌增加,细胞凋亡率升高,Bax,Caspase-3和Caspase-9的表达量增加,Bcl-2的表达量减少(P0.05,P0.01)。与模型组比较,不同质量浓度的三黄泻心汤活血化瘀优势方使HUVECs存活率明显上升,显著降低MDA,MCP-1,ICAM-1,VCAM-1的水平;提高SOD和NO含量,且减少ROS的分泌,降低细胞凋亡率,降低Bax,Caspase-3和Caspase-9的表达量,增加Bcl-2的表达量(P0.05,P0.01)。结论:在ox-LDL诱导损伤的HUVECs模型上,三黄泻心汤活血化瘀优势方具有抑制细胞凋亡,减轻炎性反应和抗氧化的作用,可能与抗动脉粥样硬化有密切关系。