参白解毒方抑制HCT116细胞增殖的药效及机制

目的 探讨参白解毒方（SBJDF）抑制结直肠癌（CRC）细胞HCT116增殖的药效及机制。方法 利用参白解毒方（0、0.25、0.5、1、2、4 g·L^-1）处理HCT116细胞48 h，噻唑蓝（MTT）比色法检测参白解毒方对HCT116细胞活力的影响，分别设置空白组、参白解毒方（1、2、4 g·L^-1）组，倒置显微镜观察参白解毒方对HCT116细胞形态的影响，克隆形成实验观察参白解毒方对HCT116细胞增殖能力的影响，JC-1探针检测参白解毒方对HCT116细胞线粒体膜电位（Δψm）的影响，流式细胞仪检测HCT116细胞周期分布和细胞凋亡率，蛋白免疫印迹法（Western blot）分析参白解毒方对细胞周期，抗凋亡以及核转录因子-κB（NF-κB）信号通路相关蛋白的影响。结果 参白解毒方有效抑制HCT116细胞活力，引起细胞形态改变，呈浓度依赖性；与空白组比较，参白解毒方（1、2、4 g·L^-1）组克隆形成率均明显下降（P<0.05，P<0.01），参白解毒方（2、4 g·L^-1）组诱导HCT116细胞发生G₀/G₁期阻滞（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，参白解毒方（1、2、4 g·L^-1）组周期蛋白D₁（CyclinD₁）表达明显下降（P<0.05，P<0.01），参白解毒方（2、4 g·L^-1）组细胞周期蛋白A₂（CyclinA₂），周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）蛋白表达明显下降（P<0.05，P<0.01），参白解毒方（4 g·L^-1）组周期蛋白依赖性激酶1（CDK1）表达显著下降（P<0.01）。与空白组比较，参白解毒方（2、4 g·L^-1）组课诱导HCT116细胞凋亡，并下调抗凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关xl蛋白（Bcl-xl）表达（P<0.05，P<0.01），降低HCT116细胞线粒体膜电位；与空白组比较，参白解毒方（2、4 g·L^-1）组可下调NF-κB信号通路相关蛋白IκB激酶α（IKKα）、NF-κB抑制蛋白α（IκBα）、磷酸化p65蛋白（p-p65）的表达（P<0.05，P<0.01）。结论 参白解毒方有效抑制HCT116细胞增殖，其机制可能通过抑制HCT116细胞NF-κB信号通路的激活，引起细胞周期阻滞，诱导细胞凋亡。     

参白解毒方显著抑制小鼠结直肠腺瘤的形成及癌变： 基于PTEN/PI3K/AKT通路

目的 探讨参白解毒方（SBJDF）对结直肠腺瘤形成及癌变的影响及其对PTEN/PI3K/AKT信号通路的调控作用。方法 将4周龄的雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组（10只）、AOM/DSS模型组（20只）、参白解毒方低剂量组（14 g/kg,10只）和参白解毒方高剂量组（42 g/kg,10只）。除对照组外,其余各组采用AOM/DSS诱导小鼠结直肠腺瘤癌变模型,处理组于造模中给予参白解毒方灌胃干预。比较各组小鼠的生存率、体质量和生存状态,观察肠道组织腺瘤形成及癌变等病理情况,免疫组化检测肠道组织PTEN/PI3K/AKT信号通路相关分子的表达。结果 参白解毒方干预后小鼠的肿瘤发生率、数量和体积均显著低于AOM/DSS模型组,且高剂量的参白解毒方抑制效果更佳。HE病理切片结果显示模型组已形成腺癌,而参白解毒方可以抑制腺瘤的形成及癌变,参白解毒方低剂量组小鼠肠道同时存在腺瘤低级别瘤变和高级别瘤变,参白解毒方高剂量组小鼠肠道以正常粘膜组织为主,仅发现局部少量腺瘤低级别瘤变。机制研究发现模型组血浆中miRNA-222表达高于空白组（P<0.05）,用药各组miRNA-222的表达量较模型组下调（P<0.01）;小鼠肠道组织免疫组化结果显示,与AOM/DSS模型组相比,参白解毒方处理后PTEN、p-PTEN、GSK-3β表达上调,且在低剂量组、高剂量组表达有依次递增趋势;p-GSK-3β、PI3K、AKT、p-AKT、β-catenin、c-myc、CyclinD1、Survivin表达下调,且在低剂量组、高剂量组表达呈递减趋势。结论 参白解毒方可以显著抑制小鼠结直肠腺瘤形成及癌变,其作用机制可能与调控miRNA-222及影响PTEN/PI3K/AKT信号通路有关。     

预知子提取物增敏奥沙利铂诱导结肠癌HCT116细胞凋亡的研究

目的 探讨预知子提取物增敏奥沙利铂(OXA)诱导结肠癌HCT116细胞凋亡的作用及机制,为减少OXA毒副作用发生的临床应用提供研究基础.方法 将预知子乙酸乙酯萃取成分进行中压柱层析分离,并进行抗肿瘤药效筛选,获取活性部位B14,并进一步分离和鉴定该活性部位成分;运用MTT法检测B14、OXA及二者联用对HCT116的增...     

缺氧微环境下仙连解毒方抑制结直肠癌细胞增殖的作用及机制

目的：观察缺氧微环境下仙连解毒方对含溴结构域蛋白4(Brd4)诱导的核转录因子-κB(NF-κB)信号通路激活的影响,探讨其抑制结直肠癌细胞HT-29增殖的作用机制。方法：于缺氧培养箱或常氧培养箱中培养人结直肠癌细胞HT-29,给予仙连解毒方（0.8、1、1.2、1.6、3.2、6.4、12.8 g·L-1）干预细胞48 h,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力;采用线粒体膜电位荧光探针（JC-1）检测仙连解毒方（1.25、2.5、5 g·L-1）对细胞线粒体膜电位的影响,采用流式细胞术检测结直肠癌细胞HT-29凋亡情况;细胞克隆形成实验及5-乙炔基-2’-脱氧尿苷（EDU）法检测结直肠癌细胞HT-29细胞增殖能力;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Brd4及其下游蛋白如c-核蛋白类基因（c-Myc）、六亚甲基双乙酰胺诱导蛋白1(HEXIM1)的表达水平,同时检测仙连解毒方对NF-κB信号通路相关蛋白的影响。结果：与空白组比较,仙连解毒方（0.8、1、1.2、1.6、3.2、6.4、12.8 g·L-1）组均能抑制结直肠癌细胞HT-29细胞活力（P<0.05,P&l...     

仙连解毒方干预“湿热瘀毒证”小鼠结直肠肿瘤的转录组学分析

目的 通过转录组测序技术（RNA-seq）分析仙连解毒方干预“湿热瘀毒证”小鼠结直肠肿瘤的转录组学特征。方法 将90只C57BL/6（雄性）小鼠随机分为正常组、“湿热瘀毒证”结直肠肿瘤模型组及仙连解毒方组,每组30只。模型组和仙连解毒方组予以高脂饲料喂养,以经典氧化偶氮甲烷（AOM）/葡聚糖硫酸钠（DSS）方式构建结直肠癌模型,仙连解毒方组从造模当天开始给药（12.9 g·kg^-1）,共给药112 d。末次给药结束4 h后,取各组小鼠结直肠组织,苏木素-伊红（HE）染色和亚甲基蓝染色观察小鼠结直肠的组织病理形态;提取结直肠组织总RNA,采用RNA-seq技术进行转录组学测序,进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析,并筛选、验证差异基因。结果 与模型组比较,仙连解毒方可显著改善小鼠结直肠充血水肿情况,减少小鼠结直肠肿瘤数量、体积;亚甲基蓝染色结果表明仙连解毒方可以显著抑制畸形隐窝灶（ACF）的发生（P<0.01）;HE染色显示仙连解毒方可显著减轻结直肠组织的损伤、异型增生;RNA-seq测序结果显示,模型组与正常组差异表达的基因共615个,上调基因446个,下调基因169个。仙连解毒方组与模型组差异表达的基因共54个,上调基因29个,下调基因25个。RNA-seq测序分析发现仙连解毒方主要调控NIMA相关蛋白激酶7（Nek7,P<0.01）,黏蛋白16（Muc16,P<0.01）,SiahE3泛素蛋白连接酶家族成员3（Siah3,P<0.01）,胰岛再生基因3g（Reg3g,P<0.01）,RNA聚合酶2延长因子相关因子2（Eaf2,P<0.01）,转化生长因子-α（TGF-α,P<0.05）,分泌珠蛋白家族1A成员1（Scgb1a1,P<0.05）,序列相似家族227成员B（Fam227B,P<0.05）,细胞色素P450家族2亚家族c多肽40（Cyp2c40,P<0.01）,锚蛋白重复及EF手结构域蛋白1（Ankef1,P<0.05）等基因的表达,并且肠上皮细胞增殖等生物过程、细胞色素P450酶对外源性药物的代谢作用,花生四烯酸代谢等信号通路被显著富集。结论 仙连解毒方具有干预“湿热瘀毒证”小鼠结直肠肿瘤发生、发展的作用,转录组学分析提示可能与干预代谢相关通路密切相关。     

黄连-苦参不同配比中特征性成分的量-质变化相关性研究

目的 分析不同配比“黄连-苦参”药对的特征性成分量-质变化相关性,为该药对的量-效相关性及临床应用提供合理的用量比例参考。方法 采用HPLC法,建立不同配比9批“黄连-苦参”药对（5∶1、4∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5）,建立药对HPLC特征指纹图谱及其特征性成分含量测定方法,分析9组样品成分的差异性与相关性。结果 9种配比的黄连-苦参药对共确定16个共有峰,指认苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱、木兰花碱、非洲防己碱、表小檗碱、药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱共10个共有峰。含量测定结果显示,黄连-苦参配对后相比黄连药材及苦参药材,特征性成分均有显著性差异。黄连-苦参（5∶1）时苦参碱、槐定碱、木兰花碱含量为各比例最高,相比单药材提取具有显著性差异;黄连-苦参（4∶1）时,非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱含量为各比例最高,相比单药材提取具有显著性差异,且黄连总生物碱溶出最高;黄连-苦参（1∶1）时苦参总生物碱含量最高,且药根碱含量为各比例最高;黄连-苦参（1∶3）时氧化苦参碱含量为各比例最高。结论 黄连-苦参不同配比时,以特征性成分个数与含量为标示的“质”与配伍用“量”之间的相关差异性较明显,显示出一定的成分相互促溶作用。苦参中3种成分的溶出量随黄连比例的降低呈现“U”型分布,而黄连中7种成分溶出量随黄连比例的降低整体呈现降低趋势。与黄连、苦参各药材单提相比,各比例下苦参中总生物碱类成分的溶出均有不同程度的提升,黄连中总生物碱类成分在黄连-苦参（5∶1）及（4∶1）比例下溶出表现为提升,其他比例表现为降低。药对中生物碱类成分的溶出规律与临床验方中药对的使用配比成正相关。为进一步开展该药对的量-效关联性分析确定了物质基础,也为临床潜方时确定适宜用量提供参考。     

仙连解毒方对结直肠癌湿热瘀毒证模型小鼠肠道细胞类型的影响

目的 采用单细胞转录组测序技术探讨仙连解毒方治疗结直肠癌湿热瘀毒证的作用机制。方法 30只雄性C57BL/6N小鼠随机分为对照组、模型组、仙连解毒方组,每组10只。模型组和仙连解毒方组小鼠采用高脂饮食与氧化偶氮甲烷（AOM）/葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导建立结直肠癌湿热瘀毒证模型,对照组给予正常饮食。3个循环的DSS饮水结束后,仙连解毒方组开始给予仙连解毒方12.9 g/kg灌胃,对照组及模型组给予等体积的生理盐水,每天1次,连续灌胃6天后停1天,连续给药16周。末次给药结束4 h后,取各组小鼠结直肠组织,HE染色观察小鼠结直肠的组织病理形态。取距肛门6 cm的远端结肠段2 cm,解离组织样本,分离单细胞悬液,提取RNA行qPCR扩增,进行单细胞转录组测序。采用CellRanger-v5.0.0进行数据质控,Seurat-v3.1.1软件包进行降维聚类分析、细胞类型鉴定,对差异基因行GO和KEGG富集分析。结果HE染色结果显示,空白组小鼠结肠腺体排列规则,细胞核位于基底部,呈扁平或立方状;模型组上皮细胞极性消失,呈巢状、筛孔状,中央见坏死,细胞核浆比增大,核染色深,核仁明显,核分裂现象显...     

结直肠腺瘤的中医药防治进展＊

本文参阅了近5年来有关中医药防治结直肠腺瘤方面的相关文献，从中医病因病机、体质辨识、辨证论治、临床研究、药理研究等方面对结直肠腺瘤的研究进展进行归纳总结，发现结直肠腺瘤的主要病机为脾气亏虚，湿热痰瘀互结，阳虚质、气虚质、痰湿质、湿热质人群易感，临床主要证型为湿郁肠腑证、脾虚湿热证、痰湿瘀阻证、痰湿瘀毒证、肝郁脾虚证等。中医药在防治腺瘤复发和癌变方面具有明显优势，如何规范地运用中医药防治结直肠腺瘤是今后的研究方向。     

参白解毒方基于Wnt/β-catenin信号通路对结直肠癌细胞增殖和迁移的抑制作用

目的：研究参白解毒方对结直肠癌细胞增殖和迁移的药效及其作用机制。方法：用参白解毒方处理人结直肠癌细胞HT29、SW480和SW620,MTT和平板克隆形成实验检测细胞的增殖和自我更新能力;细胞划痕实验检测HT29细胞的迁移能力;实时定量PCR或Western Blot检测上皮-间充质转化（EMT）相关标记物（E-Cadherin、N-Cadherin和Vimentin）、Wnt5a和β-catenin的表达水平;实时定量PCR检测Wnt/β-catenin信号通路下游的结直肠癌肿瘤干细胞标志物CD44和CD133的表达水平。结果：参白解毒方可抑制结直肠癌细胞HT29、SW480和SW620的增殖（P<0.01,P<0.05）,减少HT29细胞形成克隆的数目（P<0.05,P<0.01）;细胞划痕实验结果表明参白解毒方可以显著抑制HT29细胞的迁移（P<0.05,P<0.01）,且具有剂量依赖性。实时定量PCR和Western Blot结果显示,参白解毒方可以剂量和时间依赖性的上调上皮细胞标志物E-Cadherin mRNA和蛋白的表达,下调间质细胞标...     

α-常春藤皂苷调控SNX10介导的谷氨酰胺代谢抑制肠上皮细胞恶性转化研究

目的 研究干扰分选连接蛋白10(sorting nexin 10,SNX10)表达对人正常肠上皮FHC、NCM460细胞增殖、谷氨酰胺代谢的影响及α-常春藤皂苷调控作用的分子机制。方法 利用转染技术构建稳定敲低SNX10的FHC、NCM460细胞,qRT-PCR和Western blotting检测敲低效率;CCK-8、克隆形成实验检测细胞增殖能力;MTT筛选α-常春藤皂苷实验浓度并检测其对SNX10表达的影响;检测细胞内还原型谷胱甘肽含量;Western blotting检测细胞SNX10、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mammalian target of rapamycin complex 1,m TORC1)/c-myc信号通路相关蛋白及下游谷氨酰胺转运蛋白SLC7A5表达情况。结果 敲低SNX10后FHC、NCM460细胞增殖异常加快（P<0.01）,细胞内还原型谷胱甘肽含量异常升高（P<0.01）,m TORC1/c-myc通路被激活,下游SLC7A5表达升高;而α-常春藤皂苷干预SNX10敲低细胞系后,细胞SNX10表达升高（P<0.05、0.01）,...