风湿祛痛胶囊对VEGF诱导的人脐静脉内皮细胞功能的影响

目的:观察风湿祛痛胶囊对血管内皮细胞生长因子(VEGF)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的增殖、迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力的影响,以及对VEGF受体2(VEGFR2)的干预作用。方法:VEGF体外诱导HUVEC,加入风湿祛痛胶囊低、中、高质量浓度(0. 02,0. 1,0. 5μg·L-1)作用后,分别采用噻唑蓝(MTT)比色法、转移小室(transwell)法、黏附实验、细胞侵袭及管腔形成实验检测HUVEC的增殖活性、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中VEGFR2磷酸化水平和蛋白含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测VEGFR2 mRNA表达水平。结果:与正常组比较,VEGF诱导24,48 h后均能显著升高HUVEC的增殖活性(P 0. 01),诱导24 h能明显升高HUVEC的迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力(P 0. 01),显著升高HUVEC中VEGFR2磷酸化及蛋白和mRNA表达水平(P 0. 01);与VEGF组比较,风湿祛痛胶囊低、中、高质量浓度组作用48 h均能明显抑制HUVEC增殖活性(P 0. 05,P 0. 01),作用24 h对VEGF诱导的HUVEC迁移、黏附、侵袭和管腔形成能力有明显抑制作用(P 0. 05),也能下调VEGFR2磷酸化及蛋白和mRNA表达水平(P 0. 05)。结论:风湿祛痛胶囊能降低VEGF诱导的HUVEC细胞增殖、迁移、黏附、侵袭及管腔形成能力,这一作用可能与其抑制VEGFR2的磷酸化、蛋白和mRNA表达水平有关。     

风湿祛痛胶囊对类风湿关节炎滑膜Akt和MAPK信号通路的影响

目的:观察风湿祛痛胶囊(FSQTC)对蛋白激酶B(Akt)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响,以探讨其抑制类风湿关节炎(RA)滑膜血管新生的机制。方法:采用SD大鼠诱导建立胶原诱导性关节炎(CIA)模型,灌胃给予FSQTC低、中、高剂量(0. 25,0. 5,1 g·kg~(-1)) 19 d后,取膝关节滑膜组织备用;血管内皮细胞生长因子(VEGF,20μg·L~(-1))诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC),肿瘤坏死因子-α(TNF-α,20μg·L~(-1))体外诱导人RA成纤维样滑膜细胞系MH7A,分别加入不同质量浓度FSQTC(0. 02,0. 1,0. 5μg·L~(-1))作用后,取细胞备用。分别提取滑膜组织以及MH7A和HUVEC两种细胞中的蛋白,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化Akt(p-Akt),p-p38 MAPK,p-细胞外信号调节激酶(ERK),p-氨基末端激酶(JNK)的蛋白表达水平。结果:CIA模型组大鼠关节滑膜中p-Akt,p-p38 MAPK,p-ERK和p-JNK的表达水平均较正常组显著升高(P 0. 01),经0. 25,0. 5,1 g·kg~(-1)·d~(-1)的FSQTC治疗后降低(P 0. 05,P 0. 01);与空白组比较,VEGF或TNF-α能分别诱导p-Akt,p-p38 MAPK,p-ERK和p-JNK在MH7A或HUVEC细胞中的异常升高(P 0. 01),0. 02,0. 1,0. 5μg·L~(-1)的FSQTC能明显降低p-Akt,p-p38 MAPK,p-ERK,p-JNK的表达水平(P 0. 05,P 0. 01)。结论:FSQTC能负调节Akt和MAPK信号通路在CIA大鼠滑膜组织、体外培养的血管内皮细胞和成纤维滑膜细胞中的异常活化,这可能与其对RA滑膜血管新生的抑制作用有关。     

风湿祛痛胶囊对TNF-α诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞功能的影响

目的：研究风湿祛痛胶囊（FSQTC）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导的人类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞增殖、迁移、黏附、侵袭和分泌功能的影响。方法：TNF-α（20 μg·L^-1）体外诱导RA患者成纤维样滑膜细胞（MH7A）,加入不同浓度FSQTC（0.02,0.1,0.5 μg·L^-1）作用后,分别采用噻唑蓝（MTT）比色法,转移小室（transwell）迁移、黏附及侵袭实验检测MH7A细胞的增殖活性、迁移、黏附及侵袭能力,酶联免疫吸附测定（ELISA）检测细胞上清中白细胞介素（IL）-1β及血管内皮细胞生长因子（VEGF）的含量。结果：与空白组比较,TNF-α（20 μg·L^-1）能显著增加MH7A细胞的增殖、迁移、黏附、侵袭能力及分泌IL-1β和VEGF的含量（P<0.01）;与TNF-α组比较,FSQTC（0.02,0.1,0.5 μg·L^-1）作用24 h对TNF-α诱导的MH7A细胞增殖活性没有明显影响,作用48 h能浓度依赖地降低TNF-α诱导增加的MH7A细胞增殖活性（P<0.05,P<0.01）,作用24 h还能显著降低TNF-α诱导升高的MH7A细胞迁移、黏附、侵袭能力及分泌IL-1β和VEGF的含量（P<0.05,P<0.01）。结论：FSQTC可降低MH7A细胞增殖、迁移、黏附、侵袭及分泌IL-1β和VEGF的能力。     

风湿祛痛胶囊对大鼠胶原诱导性关节炎的影响

目的:观察风湿祛痛胶囊对大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)的干预作用。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、风湿祛痛胶囊低、中、高剂量组(0. 25,0. 5,1 g·kg~(-1)·d~(-1)),对照药甲氨蝶呤组(0. 2 mg·kg~(-1)·d~(-1)),除正常组外,其他各组以Ⅱ型胶原和不完全弗氏佐剂免疫大鼠建立CIA模型,首次免疫后第1天给药组开始灌胃给药,每天1次,共给药19 d;首次免疫第8天开始观察大鼠关节红肿和畸形症状、评价关节炎临床积分和发病率,第19天取材后,炎症关节进行微计算机断层扫描技术检测和骨计量学分析,同时进行炎症关节组织病理学检查并从滑膜炎症、血管翳、软骨侵蚀和骨破坏等方面进行半定量评分,酶联免疫吸附测定法检测血清白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),血管内皮生长因子(VEGF),基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和核转录因子-κB受体活化因子配基(RANKL)含量。结果:风湿祛痛胶囊能剂量依赖地改善CIA大鼠炎症关节红、肿和畸形症状;与正常组比较,模型组大鼠炎症关节红、肿和畸形明显临床积分和发病率、关节滑膜炎症、血管翳、软骨侵蚀和骨破坏的病理评分显著升高(P 0. 01),炎症关节骨密度(BMD),骨体积分数(BV/TV),骨小梁厚度(Tb. Th),骨小梁数量(Tb. N)显著降低(P 0. 01),骨表面积体积比(BS/BV)和骨小梁分离度(Tb. Sp)显著升高(P 0. 01),血清IL-1β,TNF-α,VEGF,MMP3和RANKL的含量显著升高(P 0. 01);与模型组相比,各风湿祛痛胶囊组红肿、畸形症状明显改善,临床积分和发病率、关节滑膜炎症、血管翳、软骨侵蚀和骨破坏的病理评分均明显降低(P 0. 05,P 0. 01),BMD,BV/TV,Tb.Th,Tb. N明显升高(P 0. 05,P 0. 01),BS/BV和Tb. Sp明显降低(P 0. 05,P 0. 01),血清IL-1β,TNF-α,VEGF,MMP-3和RANKL的含量明显降低(P 0. 05,P 0. 01),且甲氨蝶呤组与高剂量组的作用相近。结论:风湿祛痛胶囊能有效缓解CIA的临床症状和病情,降低发病率,减轻关节的组织病理学和影像学严重度,同时抑制血清中的促炎细胞因子含量。