噬菌体抗体库固相筛选条件的初步研究

目的:探讨噬菌体抗体库的固相筛选条件,为筛选方案的设计提供实验依据。方法:利用多种针对HEVNE2蛋白的特异性噬菌体人源抗体和非特异性噬菌体人源抗体,对噬菌体抗体与抗原的结合时间、抗原包被的浓度、洗涤强度和洗脱方式等多种筛选的条件进行初步探索。结果:阳性噬菌体抗体与抗原反应1min,就可较好结合,洗涤次数为20～30次、洗涤液的pH为5时,筛选得到的阳性率最高。包被抗原的浓度对筛选的阳性率没有明显影响,用10mg/L抗原竞争洗脱60min,可得到较高的阳性率。结论:噬菌体抗体库的筛选是一个非常复杂的过程,其中的各个条件之间有着密切的联系,应该根据具体情况进行调整。     

多样性人源天然噬菌体抗体库的构建及初步应用

目的:构建多样性良好的人源天然噬菌体抗体库。方法:从正常人外周血中分离淋巴细胞,以RT-PCR和半巢式PCR扩增重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因,以重叠延伸PCR将VH、VL组装成scFv基因,并将其克隆入噬菌粒载体pCANTAB-5E中。以pCANTAB-5E电转化大肠杆菌TG1,构建人源天然噬菌体抗体库,测序分析抗体基因的家族信息和多样性,并用多种抗原对其进行筛选。结果:获得了库容为2×108的人源天然噬菌体抗体库。分别用5种抗原对其进行筛选,均可获得特异性噬菌体抗体的富集。结论:成功地构建了一个多样性良好的人源天然噬菌体抗体库,可用于制备具有应用前景的人源抗体。     

癌症的生物学控制

肿瘤是不受任何稳定内环境因素控制的组织,这个定义已持续多年。1986年,美国外科学院癌症研究会在有关癌症治疗课程的绪言中,把快速生长的异常肿瘤细胞描述为稳定、不可逆、不易控制、不受限制的细胞。1940年,James认识到早期的定义不确切,指出:“无限制地生长并不是所有恶性肿瘤都具备的特征。”临床和实验越来越清楚地表明,必须把宿主作为一个能动的参与者,因为它具有征服新生物、影响疾病进程的能力。     

抗HEV中和抗体13D8的单链抗体的构建及表达

目的 :降低HEV中和性单抗 (mAb) 13D8的鼠源性 ,表达其单链抗体 (scFv)。方法 :从分泌 13D8鼠mAb的杂交瘤细胞中 ,通过RT PCR克隆mAb的VL、VH 基因 ,并进一步组装成VH linker VL 型的scFv片段。将scFv片段克隆到pTO T7载体中 ,在大肠杆菌中进行表达。用ELISA、Westernblot检测scFv的活性。结果 :SDS PAGE表明 ,13D8的scFv在E .coli中得到高效表达 ,表达量达菌体总蛋白的 2 6 .8%左右 ,表达产物主要以包涵体的形式存在。间接ELISA和Westernblot检测表明 ,表达的 13D8的scFv能与HEVOFR2区中一段重组蛋白(NE2 )特异结合。竞争ELISA表明 ,scFv与原鼠mAb识别的为同一表位。结论 :成功地表达出具有免疫学活性的 13D8的scFv。     

抗HBV preS1嵌合抗体的真核表达及活性分析

目的通过真核系统表达抗HBV preS1嵌合抗体4D11并分析其活性。方法通过RT-PCR方法从分泌抗乙型肝炎病毒preS1的鼠源单克隆抗体4D11的杂交瘤细胞中克隆出抗体基因的重链可变区(VH)、轻链可变区(Vκ)序列,并分别克隆到含有Υ1重链和κ轻链恒定区序列的pcDNA3.1-AH和pcDNA3.1-Ak质粒中,共转染人胚肾细胞变种(293 FT)细胞。通过Western blot、竞争ELISA、阳性血清阻断及血清中preS1的检测实验来分析其活性。结果轻重链基因在细胞内正确组装成嵌合抗体分子并分泌至细胞外,具有结合活性。嵌合抗体可以很好的与病毒preS1结合,对阳性血清的检测效果与鼠单抗一致。结论成功的利用293 FT细胞表达了4D11嵌合抗体,抗体保留了原鼠单抗的特异性和活性,为探讨乙肝抗体的治疗提供了试验资料。     

TT病毒与肝炎关系的临床流行病学研究

目的 对闽南地区各种肝炎患者、健康体检者、义力献血员和肝癌患者共４８０例从临床流行病学角度探讨ＴＴ病毒（ＴＴＶ）的致生及其与各种肝炎的关系。方法 采用巢式ＰＣＲＩｇＧ,用ＥＰＩ ＩＮＦＯ６．０软件进行统计分析。结果 ４８０名研究对象中ＴＴＶＤＮＡ的总检出率为２３．９６％。各种胆炎患者的ＴＴＶ总阳性率为２３．９４％,肝癌患者的ＴＴＶ阳性率为２０．６９％,而健康者的ＴＴＶ阳性率为２４．８４％,义务献血     

脊髓损伤后免疫功能临床观察

本文报告对9例脊髓损伤病人免疫功能的检测结果.表明:整个病程中血清免疫球蛋白水平无明显变化;伤后早期淋巴细胞绝对值增高,伤后3周降至正常;脊髓损伤病人的淋转率明显增高,并持续相当长一段时间;手术和中小剂量激素治疗对淋转率无明显影响;淋转率高的病例功能恢复不好.提示脊髓损伤所引起的“自溶”破坏,可能与中枢系统的变态反应有关。     

持续性胸段硬脊膜外麻醉在治疗颅脑外伤性应激性溃疡中的作用

目的探讨持续性胸段硬脊膜外麻醉(thoracic epidural anesthesia,TEA)在治疗颅脑外伤性应激性溃疡(Cushing溃疡)中的作用。方法选择颅脑外伤后并发应激性溃疡的患者50例,分为两组,每组25例。常规组患者采取常规治疗方案;观察组患者在接受常规治疗方案基础上,增加持续性TEA治疗。比较两组患者治疗第5天的进展及最终治疗结局。结果观察组患者治疗第5天取得的进展明显好于常规组患者,溃疡治愈时间也比常规组患者短,差异有统计学意义(P<0.05)。结论联合持续性TEA治疗,可明显加快Cushing溃疡治疗进展,改善治疗效果。     

藏象肝的人工神经网络及其仿真

目的 仿中医肝的人工神经网络系统.用现代科学理论诠释中医肝的理论.方法 用计算机C++语言,以中医的肝为对象类,建立肝类的结构图,构建肝人工神经网络的结构图.结果 仿真肝具有中医肝的生理功能,具有与人思维过程相似的辨证功能.结论 中医的肝,具有人神经网络功能.肝的生理过程不参与辨证过程.提示中医的肝,不仅具有生理解剖肝、功能肝意义,而且具有网络肝等多重意义.肝的生理过程与辨证无关.     

清胰汤对重症急性胰腺炎营养状况的疗效观察

目的:观察中药清胰汤在重症急性胰腺炎患者的营养代谢中的治疗作用。方法:收集2006年7月～2010年7月收治的急性反应期SAP病人80例,分为清胰汤治疗组(治疗组)42人和常规治疗组(对照组)38人,观察、比较病人入院时、3d、7d、14d后的总蛋白、白蛋白、前白蛋白的血清水平变化。结果:治疗组和对照组的血清总蛋白、白蛋白、前白蛋白水平在住院第7d均上升,治疗组上升更快,两组比较在第7d、14d有显著性差异(P0.05)。结论:SAP患者早期能量消耗剧烈,患者表现为能量失衡状态。中西医结合治疗可以更好的维持早期SAP患者的营养状态。