12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯对K562细胞增殖的抑制作用

目的：观察12-去氧佛波醇13-棕榈酸酯（12-Deoxyphorbol-13-Palmitate,12D-13P）对慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）细胞株K562细胞增殖的抑制作用.方法：不同浓度的12D-13P处理的K562细胞,光镜下观察细胞形态学变化,MTT法检测药物对K562细胞增殖的抑制作用,甲基纤维素克隆形成实验分析细胞克隆能力.结果：MTT法和甲基纤维素克隆形成实验均显示12D-13P对K562细胞增殖具有较明显的抑制作用.结论：12D-13P能抑制体外培养的K562细胞的增殖,且呈一定的量效和时效关系.     

稳定过表达TOX3的乳腺癌MDA-MB-231细胞系的建立

目的构建人TOX高迁移率蛋白家族成员3(TOX3)基因慢病毒表达载体并建立稳定过表达TOX3的MDA-MB-231人乳腺癌细胞系。方法通过全基因合成法合成TOX3基因序列片段,并进行PCR扩增。将TOX3基因克隆到pLVEF-1a/GFP-Puro载体中,构建pLVEF-1a/GFP-Puro-TOX3慢病毒载体。经酶切和测序鉴定后,将构建好的慢病毒载体进行病毒包装和病毒滴度检测。用获得的慢病毒液转染MDA-MB-231人乳腺癌细胞系,通过嘌呤霉素选择性培养,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测MDA-MB-231细胞中TOX3 mRNA的表达,Western blot法检测MDA-MB-231细胞中TOX3蛋白的表达。结果经酶切和测序鉴定,成功构建了pLVEF-1a/GFP-Puro和pLVEF-1a/GFP-Puro-TOX3慢病毒表达载体,病毒包装后检测病毒滴度分别为2×108TU/mL和1×108TU/mL,转染MDA-MB-231细胞后,GFP表达的细胞达95%以上。与阴性对照组相比,qRT-PCR和Western blot结果显示,MDA-MB-231-TOX3细胞中TOX3的mRNA和蛋白表达水平均明显升高。结论成功构建了TOX3慢病毒表达载体并建立了稳定过表达TOX3的MDA-MB-231细胞系。     

间充质干细胞的临床应用与问题研究

近几年,间充质干细胞疗法作为一种治疗机体无法自然修复的组织细胞和器官损伤的多种难治性疾病的新方法取得了广泛关注。其有能力在体内和体外条件下分化成各种细胞系并进行大量扩增。间充质干细胞疗法在多个国家的基础试验中已证实了其安全性和有效性。随着研究的深入,人们逐渐发现间充质干细胞疗法的负面效应。该文对近年来关于间充质干细胞临床治疗效果调查情况及其在临床应用中存在的问题予以综述,以期为临床提供参考。     

细胞凋亡干预与肿瘤的治疗

细胞凋亡与肿瘤的发生与发展密切相关,本文就细胞凋亡干预与肿瘤的治疗予以综述,为进一步研究提供参考.     

复方阿莫西林缓释干混悬剂的初步稳定性及有关物质测定方法研究

目的：初步考察自制复方阿莫西林缓释干混悬剂的稳定性,建立测定该制剂中有关物质的HPLC方法。方法：利用影响因素试验初步考察高温、高湿对复方阿莫西林缓释干混悬剂稳定性的影响;利用自身对照法,色谱柱ODS-C18柱,流动相为A相-B相（75：25）,其中A相为0.01mol/l磷酸二氢钾（pH6）,B相为0.01mol/l磷酸二氢钾-乙腈（20：80）,流速：1mL/min,检测波长239nm,进样20μL。结果：高温、高湿条件下阿莫西林、对乙酰氨基含量下降,杂质含量增加。结论：自制复方阿莫西林缓释干混悬剂受湿度、温度影响较大,本文建立色谱方法可用于复方阿莫西林缓释干混悬剂有关物质的测定。     

12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的 研究12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯（12-Deoxyphorbol-13-Palmitate,12D-13P）对慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）细胞株K562细胞凋亡的影响.方法 将不同浓度的12D-13P作用于K562细胞,继续培养12 h;采用流式细胞仪检测其诱导的细胞凋亡情况;采用磷脂结合蛋白V（Annexin V）＋碘化丙啶（PI）双染色法在荧光显微镜下观察凋亡细胞的形态学变化.结果 各浓度组的12D-13P对K562细胞凋亡率与对照组比差异有统计学意义（P＜0.05）,且随12D-13P浓度的增加坏死细胞逐渐增多.结论 12D-13P能诱导K562细胞凋亡.     

12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯对人乳腺癌MCF-7细胞VEGF表达的影响及其相关机制

目的:观察狼毒大戟根部提取物12-去氧佛波醇-13-棕榈酸酯(12-deoxyphorbol 13-palmitate,DP)对MCF-7细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,及其是否通过Von Hippel-Lindau蛋白(VHL)/低氧诱导因子(HIF-1α)信号通路进行调节。方法:实验分为常氧空白组、常氧实验组(10,20,40μmol·L-1DP)、乏氧空白组和乏氧实验组(10,20,40μmol·L-1DP),其中乏氧空白组和乏氧实验组用150μmol·L-1Co Cl2预处理细胞。当细胞密度达70%~80%时进行药物处理;MTT法检测DP对MCF-7细胞在6,12,24 h细胞存活率的影响;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测DP对MCF-7细胞分泌VEGF的影响;实时荧光定量PCR法(RT-q PCR)检测DP对VEGF mRNA表达的影响;Western blot检测DP对MCF-7细胞中VEGF,HIF-1α和VHL蛋白表达;细胞免疫荧光法(IF)检测DP对HIF-1α表达及其在细胞中分布的影响。结果:MTT法结果显示,乏氧状态下细胞存活率在12,24 h且DP浓度为20,40μmol·L-1时与对照组相比有显著性差异(P0.05);乏氧条件下,VEGF和HIF-1α的表达较常氧条件下升高,与乏氧组相比,DP能降低VEGF(P0.05)和HIF-1α(P0.05)的表达;乏氧条件下VHL表达较常氧条件下降低,当药物处理后,相较于乏氧组,VHL浓度明显上升(P0.05)。结论:DP可能通过调节VHL/HIF-1α信号通路从而下调MCF-7细胞VEGF表达。     

Fas途径参与没食子酸乙酯诱导结肠癌Lovo细胞凋亡

目的研究死亡受体通路在没食子酸乙酯诱导结肠癌细胞Lovo凋亡过程中的作用。方法以结肠癌细胞Lovo为研究对象,采用AO/EB荧光染色法观察药物作用后凋亡细胞形态学变化;免疫细胞化学法检测用药前后凋亡相关基因Caspase-8,Fas,Survivin蛋白的表达。结果没食子酸乙酯作用后,AO/EB双染后荧光显微镜下观察Lovo细胞呈典型的凋亡形态学改变。免疫细胞化学结果表明,实验组活性Caspase-8蛋白和Fas蛋白阳性表达率增强,而Survivin阳性表达率减弱,与对照组相比具有显著差异。结论没食子酸乙酯可通过上调Fas和活性Caspase-8蛋白的表达,下调Survivin蛋白的表达。死亡受体通路参与没食子酸乙酯诱导Lovo细胞凋亡的过程,这可能是EG发挥抗肿瘤作用机制之一。