基于网络药理学的当归四逆汤“当归-桂枝”治疗痛经的作用机制研究

目的：通过网络药理学探讨当归四逆汤中“当归-桂枝”药对对治疗痛经的可能作用机制。方法：通过中药系统药理学平台（TCMSP）检索当归四逆汤中当归与桂枝的化学成分和靶点,再通过Drug Bank数据库查询痛经相关靶点,进而构建化合物-疾病靶点网络和蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络,进行基因功能富集分析和通路富集分析,并构建靶点-通路网络。结果：在中药当归中共筛选出潜在活性成分2个,桂枝活性成分7个,二者活性成分的作用靶点分别为69个和74个,其中作用于痛经的相关靶点有6个,涉及PGR、 PTGS1、 PTGS2等。化合物-疾病靶点网络共包含了7个化合物和对应靶点6个,关键化合物涉及β-谷固醇等。PPI网络包含6个节点,关键的作用靶点共涉及PTGS2、 ESR1、PGR等。基因本体（GO）富集分析得到条目4个,其中包括生物过程的相关条目有2个,与分子功能相关的条目共有2个。KEGG通路5条,涉及脂肪细胞中脂肪分解的调节、花生四烯酸的代谢和利什曼病等。结论：基于网络药理学的研究方法初步验证了当归-桂枝药对其治疗痛经的作用机制,并为进一步深入研究其作用机理奠定了良好的基础。     

沙门菌和志贺菌二联实时荧光定量PCR的临床检测应用研究

目的:进行沙门菌和志贺菌二联实时荧光PCR检测的研究,并探讨在CDC体检中临床检测的应用.方法:在沙门菌、志贺菌的fimY基因和缸ipaH基因保守区设计特异性引物和探针,对引物、探针、Mg2 浓度、Taq酶的用量、反应条件等进行优化,并与传统检测方法进行对比.结果:该方法从细菌核酸提取至完成检测仅需3 h左右,对两种菌的检测灵敏度均达到100 cfu/ml,检测自2007年11月以来CDC临床肛拭子样本5896份,实验结果与权威检验机构的结果符合率达100%.结论:二联实时荧光定量PCR可同时定量的检测出沙门菌和志贺菌,灵敏度高,特异性强,检测周期短.适用于CDC体检等同时对沙门菌和志贺菌的快速临床检测.     

基于组效关系的壮药岩黄连抑制HSC-T6细胞增殖活性成分辨识研究

目的建立岩黄连提取物的化学成分与其抑制大鼠肝星状细胞(HSC-T6)作用的组效关系模型,寻找与药效显著相关的活性成分。方法采用正交设计法提取得到9个岩黄连提取物,通过HPLC法对岩黄连提取物进行成分表征,以共有峰的相对峰面积来表征其相对质量分数;MTT法测定岩黄连提取物抑制HSC-T6细胞增殖活性,以抑制率为评价指标;利用SIMCA-P11.5软件的正交投影偏最小二乘法(OPLS)分析,研究共有峰与药效的相关性,根据S-载荷图与变异权重参数(VIP)值辨识显著活性成分;通过MTT法及流式细胞仪验证所筛选成分的活性。采用细胞乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒观察所筛选成分对人正常肝细胞(HL-7702)LDH活性的影响。结果 HPLC法对9个岩黄连提取物进行表征分析结果确定了21个共有峰,其中19、18、13、20、14和16号共有峰(VIP1)与岩黄连抑制HSC-T6细胞增殖活性显著相关,并鉴定18、19和20号共有峰代表的化合物分别为脱氢卡维丁、巴马汀和小檗碱。MTT结果显示不同质量浓度脱氢卡维丁、巴马汀及小檗碱对HSC-T6细胞增殖具有明显抑制作用;流式细胞术检测结果也与MTT结果一致,脱氢卡维丁、巴马汀及小檗碱(0.10 mg/m L)处理HSC-T6细胞后的凋亡率分别为42.12%、42.22%、36.73%,明显高于对照组的1.69%(P0.01)。细胞毒性实验发现当脱氢卡维丁终质量浓度低于0.15 mg/m L,巴马汀与小檗碱终质量浓度低于0.10 mg/m L时,对HL-7702细胞不具有明显的细胞毒作用。结论通过组效关系研究首次发现岩黄连提取物中脱氢卡维丁、巴马汀与小檗碱在体外能显著抑制HSC-T6细胞增殖并诱导其凋亡,且在有效质量浓度下不具有明显的细胞毒作用,表明这3种化学成分极有可能是岩黄连抗肝纤维化作用的潜在活性成分且在应用中具备一定的安全性;同时也提示基于组效关系的研究思路可为天然植物药活性成分的辨识提供行之有效的方法。