黄连解毒汤干预热病证候的代谢组学研究

目的:研究黄连解毒汤对热病证候整体代谢的影响,探讨其干预热病证候的作用机制。方法:应用代谢组学技术,利用超高液相-四极杆-飞行时间/质谱(UPLC-Q-TOF/MS)检测分析系统,采用主成分分析(PCA)和偏最小二乘-判别分析(PLS-DA)统计分析方法,研究黄连解毒汤对2,4-二硝基苯酚和干酵母诱导的热病证候的干预作用。结果:两个模型在同一得分图中呈现明显的聚类分组,说明两个模型所致机体代谢的改变不同;分别给予黄连解毒汤干预后,两个模型的各实验组代谢物组在得分图中聚类于模型恢复的路线上,表明黄连解毒汤能加快热病证候的恢复并使其向着健康的方向发展。结论:基于代谢组学整体表征了黄连解毒汤对不同原因诱导的热病证候具有良好的治疗作用。     

基于生物标志物变化的黄芩干预肺热证候研究

目的:通过黄芩干预肺热证候的代谢组学研究,确定表征肺热证候的特异性生物标志物群,并基于这些生物标志物的变化探讨黄芩清肺热的作用机制.方法:基于代谢组学理论,以UPLC-Q-TOF/MS为核心技术,运用主成分分析法(PCA)为数据解析手段,研究空白大鼠、肺炎链球菌诱导肺热证候大鼠和黄芩干预大鼠尿液中代谢物组时量的轨迹变化和对应关系.结果:确定6个能够表征肺热证候的特异性生物标志物,且黄芩对6个特异性生物标志物具有明显的回调作用,初步鉴定了2个生物标志物:D-12-前列腺素J2和吲哚酚硫酸盐.结论:从生物体内代谢层面阐明黄芩具有较好的清肺热作用,并且清肺热作用机制与6个生物标志物的代谢相关联.     

黄连-黄芩及黄连-黄芩-黄柏干预2,4-二硝基苯酚诱导热病证候模型的代谢物组学研究

目的:基于代谢物组学理论,探讨黄连解毒汤的拆方黄连-黄芩及黄连-黄芩-黄柏干预2,4-二硝基苯酚诱导热病证候模型在代谢物组学层面上的关联性。方法:运用UPLC/MS技术手段,采用PCA和PLS-DA数据解析方法,研究黄连-黄芩及黄连-黄芩-黄柏对于热病证候模型大鼠尿液中生物标记物的影响。结果:初步确定2,4-二硝基苯酚诱导热病证候模型51个生物标志物,黄连-黄芩对于其中8个生物标志物具有明显干预作用,黄连-黄芩-黄柏对于其中15个生物标志物有明显干预作用。结论:黄连-黄芩-黄柏对于热病证候模型生物标志物的干预数量和程度均好于黄连-黄芩,佐药黄柏的加入有效加强了对热病的治疗作用,从代谢物组学的角度阐明了传统复方理论中"君臣佐使"组方原则的科学性。     

配伍前后黄连解毒汤中4种有效成分含量的对比研究

目的:建立同时测定黄连解毒汤中栀子苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和黄芩苷4种有效成分含量的方法,探讨配伍对4种成分含量的影响。方法:采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Diamonsil C1(8250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%冰乙酸(线性梯度洗脱),流速为1.0mL.min-1,柱温为40℃,检测波长为260nm。结果:栀子苷、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和黄芩苷进样量分别在0.1250～0.6250、0.0500～0.2500、0.0375～0.1875、0.0450～0.2250μg范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r分别为0.9993、0.9992、0.9994、0.9994);平均加样回收率分别为97.54%、96.07%、104.00%、96.79%,RSD分别为0.78%、0.78%、0.74%、0.83%(n=6)。黄连解毒汤合煎液中4种成分的含量均低于相同处方量的单煎液。结论:方剂配伍后化学成分的含量并不是组方药味的简单叠加,而有其内在的配伍规律。本研究结果可为黄连解毒汤配伍规律的研究提供参考。     

黄连解毒汤及其不同配伍组方成分溶出变化研究

目的利用高效液相色谱法建立了黄连解毒汤(黄连、黄芩、黄柏、栀子)水提物的指纹图谱分析方法,结合黄连解毒汤16个全排列,评价不同配伍组方对黄连解毒汤成分溶出的影响。方法 HPLC法,反相C18柱,体积流量为1.0 mL/min,UV检测器(λ=254 nm),流动相为甲醇-水(含0.1%醋酸),梯度洗脱。结果分析、比较黄连解毒汤及其不同配伍组方的高效液相图谱,黄芩与黄连、黄柏配伍产生沉淀使生物碱溶出降低;黄芩与栀子配伍使环烯醚萜类成分溶出降低,但四药配伍溶出增加为112.6%;不同配伍组合黄酮类成分溶出增加降低不尽相同,但四药配伍增加为480.7%。结论 方法全面准确可靠,可作为黄连解毒汤体外成分分析研究的依据。     

黄连解毒汤中君-使药对黄连-栀子 干预2,4-二硝基苯酚热病证候模型的代谢组学

目的:基于代谢组学理论,探讨黄连-栀子药对干预2,4-二硝基苯酚致热病证候模型中生物标记物的变化规律。方法:运用UPLC-MS技术手段,利用主成分分析(PCA)和偏最小二乘-判别分析法(PLS-DA)数据解析方法,确定黄连-栀子药对对2,4-二硝基苯酚致热病证候模型大鼠尿液中生物标记物的影响。结果:初步确定2,4-二硝基苯酚致热病证候模型97个生物标志物,其中药对对31个生物标记物具有明显干预作用。结论:应用代谢组学方法,初步说明黄连-栀子药对对热病证候具有治疗作用。     

配伍对黄连解毒汤及其拆方HPLC-DAD指纹图谱的影响

目的：研究不同配伍对黄连解毒汤及其拆方中主要特征指纹峰的影响。方法：采用HPLC方法分析全方及不同拆方样品,色谱柱为Diamonsil C18柱（250mm×4．6mm,5μm）;以乙腈-0．1％冰乙酸为流动相进行线性梯度洗脱;流速：1．0ml·min^-1;柱温：40℃;UV检测波长：260nm。结果：全方煎剂的特征指纹峰基本为各药味特征峰的加和,不同配伍对黄连解毒汤中主要特征峰有不同影响,但未产生明显的新特征峰。结论：本研究为黄连解毒汤的配伍规律及物质基础研究提供了一定参考。     

黄连解毒汤使药对臣-佐药干预热病证候模型生物标志物的影响

目的：探讨黄连解毒汤在加入使药栀子前后,对臣-佐药黄芩-黄柏干预2,4-二硝基苯酚诱导热病证候模型生物标志物的影响。方法：基于代谢组学技术,采用主成分分析（PCA）和偏最小二乘-判别分析方法（PLS-DA）,研究加入栀子前后,黄芩-黄柏干预热病证候模型大鼠尿液中潜在生物标志物的变化规律。结果：初步确定了热病证候模型尿液代谢物组的整体变化及46个潜在内源性生物标志物,在加入栀子前黄芩-黄柏对其中的21个生物标志物有干预作用,加入栀子后对其中的24个生物标志物有干预作用。结论：使药栀子加强了臣-佐药黄芩-黄柏对热病证候模型的干预作用。     

黄芩药材UPLC-MS特征指纹图谱研究

目的:建立黄芩药材UPLC-MS特征指纹图谱分析方法,为黄芩药材的整体质量控制提供更为有效的评价方法。方法:采用70%甲醇和甲醇两步提取的方法制备黄芩药材供试品溶液,应用UPLC-ESI-TOF/MS联用技术进行检测,采集10个产地黄芩药材的色谱图,根据保留时间和分子离子m/z确定共有峰,创建提取离子色谱图用以计算峰面积,利用相关系数法和夹角余弦法计算相对峰面积的相似度。结果:确定了黄芩药材的23个共有峰,建立了这23个共有峰为特征指纹信息的黄芩药材UPLC-MS指纹图谱,10个产地样品的指纹图谱整体相似度>0.9,各产地黄芩药材之间相似度良好。结论:该方法准确可靠,重复性好,可用于黄芩药材的整体质量评价。     

基于代谢组学技术的肺热证候模型评价方法研究

目的建立一套完善的中医证候动物模型的评价方法。方法以肺炎链球菌诱导的肺热证候模型为切入点,在常规模型评价方法的基础上,进一步借助代谢物组学平台,通过对正常组和模型组大鼠尿液的代谢指纹数据及模型组不同时间段尿液的代谢物组进行分析,探讨动物模型的评价方法。结果大鼠在经鼻给予肺炎链球菌后,模型组体温变化和白细胞计数与正常组比较差异有统计学意义（P〈0．01）,肺病理改变明显;代谢组学结果显示,模型组大鼠尿液的代谢轮廓发生改变并且在得分图中代谢物组发生明显偏移,代谢组学研究结果与肺热证候的宏观体征及病理生化指标结果相符。结论代谢组学可用于中医证候动物模型的评价研究。