中药肝毒性研究方法技术的新进展及其应用

中药肝毒性问题受到了日益广泛的重视。目前,肝细胞系、亚细胞、三维培养、模式动物等体内体外模型在中药肝毒性的筛选中发挥着重要作用。随着现代系统观和整体论的引入,基因组学、蛋白质组学、代谢组学以及网络毒理学等新方法开始逐步应用于中药肝毒性标志物挖掘和肝毒性预警等方面。该文通过总结近年来中药肝毒性研究领域的成果,分析和探讨其中存在的主要问题,提出具有中医药特色的"结合病/证模型和网络毒理学的中药量-效-毒关系研究"的新思路,同时也对该课题组开展的淫羊藿潜在肝毒性的初步研究进行了概述,希望能为中药肝毒性的评价方法和技术指导原则提供理论基础,推动中药肝毒性研究体系的发展与完善。     

基于斑马鱼模型的补骨脂毒性相关成分群的高效辨识研究

目的 基于斑马鱼模型结合相关分析高效辨识补骨脂毒性成分群.方法 采用高效液相色谱法测定7个产地18个批次补骨脂中4个香豆素类、4个黄酮类和补骨脂酚的含量.以斑马鱼(6dpf)死亡率、脏器中毒形态、半数致死浓度(lethal concentration 50,LCso)值为指标,采用斑马鱼模型评价18个批次补骨脂水煎液的...     

大孔吸附树脂结合斑马鱼评价富集纯化补骨脂总黄酮的工艺研究

目的 研究大孔吸附树脂法结合斑马鱼评价富集纯化补骨脂总黄酮的制备工艺。方法 以补骨脂的黄酮类代表成分（新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂二氢黄酮甲醚和corylifol A）为指标,考察不同类型大孔吸附树脂的静态、动态吸附和解吸附能力,优选大孔吸附树脂类型;综合斑马鱼形态变化和存活率,评价大孔吸附树脂有机溶剂残留的安全性,优选不同厂家大孔吸附树脂;进一步考察上样药液质量浓度、体积流量、上样量、吸附时间、洗脱剂乙醇体积分数和用量等因素对黄酮纯化工艺的影响,并对优选纯化工艺进行验证,比较大孔吸附树脂纯化前后新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂二氢黄酮甲醚、corylifol A、补骨脂宁、补骨脂定、补骨脂乙素、4''-O-甲基补骨脂查耳酮、补骨脂素和异补骨脂素（黄酮类和香豆素类）,以及补骨脂酚的含量。结果 优选出D101大孔吸附树脂对补骨脂黄酮成分同时具有较好的吸附能力和解吸附能力;10个厂家D101大孔吸附树脂醇浸液对斑马鱼形态和致死率的影响差别较大,其中D2和D5的大孔吸附树脂安全性较好。优化的D101大孔吸附树脂纯化总黄酮制备工艺为补骨脂药液上样质量浓度为0.5 g/mL生药,上样量为1倍柱体积（BV）,上样体积流量为1 mL/min,吸附时间为1.5 h,用1 BV 30%乙醇洗去未被吸附的成分,再用4 BV 90%乙醇洗脱黄酮成分,所得补骨脂总黄酮提取物中8种黄酮成分含量约是纯化前的1.3～5.1倍,黄酮成分总量约占上述所测11种成分总量的93.6%,提取物中总黄酮质量分数约为54%。结论 斑马鱼评价可快速辨别大孔吸附树脂的安全性差异,D101大孔吸附树脂可有效富集纯化补骨脂黄酮类成分,优选的工艺简单、稳定、重复性好。     

基于斑马鱼M-Act/Tox一体化评价的抗骨质疏松中药高效筛选思路与方法

日益显现的壮骨中药肝损伤问题为临床应用带来挑战,抗骨质疏松中药筛选有必要兼顾有效性与安全性,而代谢转化至关效应与毒性,故全面考虑代谢-效/毒一体的筛选具有意义。评价模型和化合物(含代谢物)数量严重制约早期在体、高效筛选。参考课题组前期相关研究及国内外文献,提出斑马鱼代谢模型、骨质疏松模型及毒性评价法有机整合可建立M-Act/Tox(metabolism-action/toxicity)一体化的抗骨质疏松中药高效筛选法。突破量微成分无法在体、高效及一体化评价的难点和盲点,实现基于体内过程且兼顾有效性与安全性的全方位抗骨质疏松中药高效筛选,对加速发现安全有效的抗骨质疏松创新中药具有意义。     

基于斑马鱼整合评价补骨脂粗多糖对补骨脂中香豆素组分的代谢及毒效关系的影响

目的 用斑马鱼整合评价探讨补骨脂粗多糖(psoraleae crude polysaccharide,PPS)对补骨脂中香豆素组分(coumarin components of Psoraleae Fructus,CCPF)的代谢及毒效关系影响。方法 用受精后天数(days post fertilization,dpf)1～6 dpf的斑马鱼评价CCPF、PPS及二者组合物的安全性,观察斑马鱼脏器形态,记录死亡数并计算斑马鱼半数死亡浓度(LC50);用1～6 dpf斑马鱼暴露于CCPF及其与PPS组合物,分析补骨脂苷和异补骨脂苷及其代谢物补骨脂素和异补骨脂素的动态变化;用25μmol·L^–1泼尼松龙诱导斑马鱼骨质疏松模型,采用茜素红对培养至8 dpf的各给药组斑马鱼幼鱼骨骼染色,进行显微观察、数码成像,并用图像软件定量分析骨骼染色区域来评价上述样品的抗骨质疏松活性。结果 CCPF与PPS组合物对斑马鱼的毒性大于二者单独给药,且组合物PPS的比例增加,毒性增大：PPS能够降低斑马鱼中毒浓度,致斑马鱼脏器形态畸变严重,缩短斑马鱼死亡时间,增加斑马鱼死亡率;PPS能明显...     

基于斑马鱼多模态评价杜仲配伍补骨脂对其香豆素成分的代谢及毒/效影响

目的 用斑马鱼多模态评价杜仲配伍补骨脂对其香豆素糖苷的代谢及毒/效影响。方法 用受精后1～6 d(day after fertilization,dpf)的斑马鱼评价杜仲提取物(lignan extract of Eucommiae Cortex,LEEC)配伍补骨脂香豆素提取物(coumarin extract of Psoraleae Fructus,CEPF)以及代表成分松脂醇二葡萄糖苷(pinoresinol diglucoside,PDG)配伍补骨脂苷(psoralenoside,PSS)和异补骨脂苷(isopsoralenoside,IPSS)的安全性,观察斑马鱼胚胎发育情况,包括胚胎致畸、致死情况,并计算斑马鱼半数死亡浓度(half lethal concentration,LC₅₀);用1～6 dpf斑马鱼暴露于上述配伍组合物,分析PSS和/或IPSS及其代谢物补骨脂素(psoralen,PS)和/或异补骨脂素(isopsoralen,IPS)的动态变化;用25μmol/L泼尼松龙诱导斑马鱼骨质疏松模型,采用茜素红对培养至8 dpf的各给药组斑马鱼...