幽门螺杆菌VacA基因型与耐药性分析

目的 探讨幽门螺杆菌(H.pylori)VacA基因型在各种胃肠疾病中的分布及其对常用抗生素的敏感性.方法 从胃十二指肠疾病患者胃黏膜标本中分离培养H.pylori,用PCR测定VacA基因型,并采用琼脂稀释法进行对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑3种抗生素的药物敏感性试验.结果 108株H.pylori菌株,VacA s1a阳性85株(78.7%),VacA s1b阳性22株(20.4%),VacA m1阳性29株(26.9%),VacA m2阳性77株(71.3%),VacA s1a/m2阳性66株(61.1%),未发现s2型菌株.其中,慢性胃炎患者VacA s1a阳性率为65.4%(34/52),消化性溃疡患者VacA s1a阳性率为90.0%(36/40),胃癌患者VacA s1a阳性率为93.8%(15/16).对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑的耐药率分别为18.5%、5.6%、65.7%,对阿莫西林耐药的20株菌株中,19株为VacA s1a型.结论 H.pylori菌株VacA基因型绝大多数为s1a/m2型,该型菌株存在于各种胃肠疾病中.本地区幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药率较低,对甲硝唑的耐药率较高,而对阿莫西林耐药的菌株多数为VacA s1a型.     

抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体保护剂的探讨

目的比较硫糖铝和多种糖类对抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导DH5-αvacA-pQE30大量表达VacA蛋白,制备纯化的VacA IgY。在不同酸性的IgY液中加入同浓度各种保护剂,在相同酸性的IgY液中加入不同浓度的各种保护剂,然后加入不同浓度硫糖铝和正常胃内浓度或高浓度的胃蛋白酶,以ELISA法测定试验组IgY的剩余抗体活性（AR）。结果在pH2.0和3.0条件下,各保护剂均能提高IgY抗体活性,且硫糖铝对IgY抗体活性的保护作用优于糖类,在此条件下50%和40%硫糖铝均可完全保持IgY抗体活性。在pH2.0-3.0及正常或高胃蛋白酶浓度下,30%以上硫糖铝均可有效保护IgY的活性。结论低pH下硫糖铝对IgY抗体活性的保护作用优于糖类,且30%以上硫糖铝可增强VacA IgY对胃蛋白酶的耐受能力,是较理想的IgY保护剂。     

应用PBL教学法进行医学微生物学教学的体会

PBL即以问题为基础的学习,是一种有别于传统教学的新的教学模式,是由美国神经病学教授Barrows于1969年在加拿大麦克玛斯特大学医学院首先试行的一种教学方法[1],目前全世界很多医学院校采用了PBL教学,我们在医学微生物学教学中也部分采用了PBL教学模式,实践证明,PBL是一种高效率的教学模式,可以增强学生学习的主动性并提高其分析问题和解决问题的能力.     

人类乳头瘤病毒与疾病

人类乳头瘤病毒(Human Papillomaviruses,HPVs)是人类最早认识的肿瘤病毒,HPV不但可引起良性肿瘤,还可导致人体不同部位皮肤和粘膜口皮的恶性病变,部分将导致恶性肿瘤,如宫颈癌、喉癌和皮肤鳞癌等,因而HPV成为目前研究最活跃     

鼻咽癌和肾综合征出血热患者外周血T淋巴细胞亚群的研究

目的：探讨鼻咽癌和肾综合征出血热患者外周血T细胞水平的变化。方法：用流式细胞仪直接免疫荧光法检测健康成人、鼻咽癌（放疗前后）和肾综合征出血热患者外周血T细胞亚群（CD3^3＋、CD4^＋、CD^8＋）的百分率,并进行比较。结果：鼻咽癌患者放疗前后外周血CD8^＋细胞百分率与健康对照组相比明显升高,CD4^＋／CD8^＋比值明显降低,均有显著性差别（P〈0．001）;肾综合征出血热患者与健康对照组相比CD4^＋细胞百分率降低（P〈0．01）、CD8^＋细胞百分率升高、CD4^＋／CD8^＋比值下降（P〈0．001）。结论：鼻咽癌和肾综合征出血热患者体内存在免疫调节功能异常。     

医学微生物学理论课教学方法探讨

摘要：医学微生物学是一门重要的医学基础学科。针对学科知识量大，内容繁杂，传统教学中学生学习被动、依赖性强、积极性不高的问题，采用多元化教学方法，通过改变教学方式，激发学生的学习兴趣；利用CAI课件组织教学，强化课堂教学效果；注意知识更新，加强与临床学科的联系，为培养适应现代化建设的高素质人才打下良好的基础。     

幽门螺杆菌重组VacA蛋黄抗体的体外活性

目的:制备幽门螺杆菌(Helicobacter pylon)重组VacA的鸡蛋黄抗体IgY(VacA-IgY),了解其理化特性和生物学活性,评价其抗H pylori感染的作用．方法:以纯化的重组VacA免疫产蛋鸡,水稀释法提取蛋黄抗体(VacA-IgY),硫酸铵沉淀法纯化IgY．将一定浓度的VacA-IgY在不同温度的水浴中维持一定时间,评价其耐热性;在不同 pH的Tris-HCI中孵育一定时间,评价其耐酸性;加入胃蛋白酶并作用一定时间后,评价其对酶消化的耐受作用．以上评价均采用ELISA 法测定抗体效价变化．采用Hela细胞体外培养 MTT法分析VacA-IgY对H pylori细胞毒活性的中和作用．结果:本实验制备的VacA-IgY在70℃水浴 15 min后活性保持约50％;在pH≥5时,抗体活性几乎无改变,pH<5时,抗体活性下降较快,pH2．0左右,抗体活性几乎丧失;pH4．0时, 60 kU／L胃蛋白酶作用1 h,抗体活性几乎无变化,2 h后活性仍保持50％以上．VacA-IgY能浓度依赖性地中和H pylori菌体蛋白的Hela细胞毒活性．20 mg／L超声提取物即可降低1／2的 Hela细胞增殖能力,80-320 mg／L的VacA-IgY 能完全中和H pylori菌体蛋白的Hela细胞毒活性(P<0．01)．结论:成功制备了重组VacA的IgY,且具有较好的耐热性、耐胃酶消化和一定的耐酸性; 在其体外具有中和H pylori细胞毒活性的作用．     

两种纯化幽门螺旋杆菌VacA-HpaA融合蛋白包涵体方法的比较

目的比较Ni^2＋-NTA树脂和切胶纯化重组VacA-HpaA融合蛋白的纯化效果,探讨纯化蛋白包涵体的简易方法。方法克隆并表达重组pQE30-vacA-hpaA-DH5α工程菌,获得重组VacA-HpaA融合蛋白的包涵体,分别进行Ni^2＋-NTA树脂和切胶纯化,获得可溶性重组蛋白,Western blot鉴定其抗原性;用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清抗VacA、HpaA和VacA-HpaA的IgG水平,鉴定其免疫原性。结果两种方法均能纯化重组VacA-HpaA融合蛋白包涵体,得到可溶性的重组蛋白,Ni^2＋-NTA树脂纯化法获得的可溶性重组蛋白的纯度为95.8%,得率为63.5%;切胶纯化法获得可溶性重组蛋白的纯度为93.3%,得率为75.2%。Western blot鉴定纯化蛋白均具有良好的抗原性。ELISA法检测显示小鼠血清均能与重组蛋白VacA、HpaA和VacA-HpaA发生反应,两组IgG水平比较,差异无统计学意义（P〉0.05）,均具有良好的免疫原性。结论切胶纯化重组VacA-HpaA融合蛋白包涵体是一种简单、经济的可行方法,有利于重组蛋白包涵体的纯化。