银杏外种皮提取物有效部位GBEE-2对胃癌SGC-7901细胞凋亡及其通路的影响

目的 研究银杏外种皮提取物有效部位GBEE-2体外对人胃癌细胞凋亡及其凋亡通路的影响.方法 体外培养人胃癌SGC-7901细胞,应用MTT法检测细胞增殖;应用流式细胞术检测凋亡率和细胞周期;应用ELISA法检测培养上清中基因蛋白Caspase-9、Fas及Survivin的含量.结果 GBEE-2(5～160μg·mL-1)对SGC-7901细胞的体外增殖具有抑制作用,并具有浓度依耐性,IC50为83 μg·mL-1;在10～160 μg·mL-1浓度下体外培养,GBEE-2可提高SGC-7901细胞的凋亡率,可使Caspase-9、Fas蛋白表达量增加(P<0.05或0.01),而Survivin蛋白的表达则减少(P<0.05或0.01).结论 GBEE-2抑制人胃癌SGC-7901细胞的作用机制与诱导细胞凋亡有关,其凋亡通路涉及Caspase途径.     

虎杖苷在小鼠冠状动脉缺血再灌注损伤中的保护作用及其机制研究

【立论依据】 心脏冠状动脉阻塞,再灌注疗法,极易造成大量自由基产生、钙超载和心肌细胞凋亡等损害。减少心肌细胞再灌注后凋亡仍是治疗冠心病的首要任务。研究表明虎杖苷在缺血再灌注损伤中有增加NO含量,减少自由基损害、提高心功能的保护作用,但其具体机制不明。 RhoA/ROCK通路的激活是缺血再灌注损伤中参与细胞凋亡的机制之一。新近研究表明,生理状态下,血管紧张素受体Ⅱ2型(AT2R)可通过激活RhoA-Pser188抑制ROCK下游通路,达到保护细胞正常生理状态的作用。因此,我们提出,病理状态下,AT2R对ROCK通路的影响是什么?虎杖苷对心肌缺血再灌注(I/R)是否通过该通路起到保护作用?因此,该项目的研究为虎杖苷改善冠脉血流、提高心功能提供实验依据和理论基础。 【设计思路】 实验分为正常对照组,I/R组,单纯虎杖组和虎杖治疗组。通过观察不同时间节点:术后1 h、24 h和7 d,通过心动超声及各种生化检测,研究缺血再灌注机制,并在此基础之上,研究虎杖对缺血再灌注的保护机制。 【实验内容】 (1) 建立小鼠缺血再灌注(I/R)模型。(2) TTC和evans blue染色,并检测凋亡。(3) 留取血清检测cTnT。(4) 留取蛋白检测ROCK激酶活性、RhoA-Pser188、AT2R。(5) 检测血清和组织中NOS、iNOS 活性及 NO 含量。 【材料】 C57小鼠24只,小动物超声仪,小动物心电图测量仪和各种生化检测仪器。 【可行性】 深圳大学机能平台具备所有小动物心功能检测和生化指标检测仪器。 【创新性】 本项目首次提出虎杖苷通过AT2R磷酸化RhoA-Pser188位点,从而抑制ROCK-心肌细胞凋亡通路,深入阐明虎杖苷保护缺血再灌注损伤机制。本项目首次在整体动物模型基础上,研究中药单体虎杖苷对心脏缺血-再灌注的治疗作用,摸索治疗的最佳浓度和作用的时间窗,具有很好的新药开发和临床应用前景。其次,本项目围绕虎杖苷改善冠脉血流,从分子、细胞、组织及整体水平等多个层次对其作用机制展开深入的研究,有较大的基础理论价值。     

荧光共振能量转移技术对肺腺癌活细胞中消癌平诱导半胱氨酸天冬氨酸酶3活化过程的实时监测

背景：将生物学技术和光学技术结合起来研究细胞增殖和凋亡的分子机制已成为生物工程学领域的研究热点。 目的：应用共聚焦荧光显微成像技术和荧光共振能量转移技术在活细胞中观察消癌平诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制。设计：观察对比实验。 单位：华南师范大学激光生命科学教育部重点实验室暨激光生命科学研究所。 材料：实验于2006-10/2007-03在华南师范大学激光生命科学重点实验室暨激光生命科学研究所进行。人类肺腺癌细胞为本实验室培养。消癌平注射液为通化神源药业有限公司生产（国药准字Z20025869）,G418购自华美生物公司。质粒SCAT3由Miura教授提供,酶标仪（infinite M200,Tecan,Austria）,线粒体定位荧光探针购于Molecular Probe公司。 方法：①利用细胞计数试剂盒技术检测不同剂量的消癌平对人类肺腺癌细胞活性的抑制作用。②利用共聚焦荧光显微成像技术和荧光共振能量转移技术在大半个活细胞中实时检测消癌平诱导半胱氨酸天冬氨酸酶3活化的动态过程。③利用荧光检测技术在活细胞中检测消癌平作用后不同时间点的SCAT3的荧光发射谱。主要观察指标：①消癌平作用细胞后检测细胞的活性。②消癌平作用后实时检测SCAT3荧光共振能量转移效率的动态变化。③消癌平作用后线粒体形态的动态变化。 结果：①消癌平剂量依赖性抑制肿瘤细胞的活性。②消癌平诱导细胞内半胱氨酸天冬氨酸酶3的活化。③消癌平诱导细胞中线粒体变圆和破裂。结论：消癌平可以诱导人类肺腺癌细胞的凋亡,半胱氨酸天冬氨酸酶3参与了其调控过程。     

细胞重编程及表观遗传信息调控的研究进展

利用外源性转录因子可以诱导已分化成熟的细胞重编程为多能干细胞,即诱导性多能干细胞（induced pluripotent stem cell,iPS细胞）。iPS 细胞具有与胚胎干细胞相似的生物学特性,包括强大的增殖能力和向机体各组织细胞分化的能力。