使用C6／36细胞培养结合RT-PCR方法来提高IgM阳性血清样本中DEN-1病毒的检测效率[英]／DePaula SO，Lima DM，Clotteau M，et al／／Intervirology

巴西圣保罗大学DePaula等用登革热感染恢复期血清样本接种C6／36细胞，比较了逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和间接免疫荧光(IFA)测定1型登革(DEN-1)病毒的效率。     

使用C6/36细胞培养结合RT-PCR方法来提高IgM阳性血清样本中DEN-1病毒的检测效率

巴西圣保罗大学DePaula等用登革热感染恢复期血清样本接种C6/36细胞,比较了逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和间接免疫荧光(IFA)测定1型登革(DEN-1)病毒的效率。将1∶10稀释的血清样本200μl接种到成片的C6/36细胞单层,培养7天,分别用IFA或RT-PCR测定。模拟感染C6/36细胞作阴性对照并用PBS代替血样。进行时程试验时,用1×104感染单位/ml的DEN-1病毒(NauraIsland株)接种C6/36细胞。感染24h后用IFA检测细胞的登革热病毒感染,用PCR检测细胞上清的病毒基因组,然后逐日检测1周。结果表明,用1×104感染单位/ml病毒接种C6/36细胞后,在…     

浅谈四君子汤加草药爵床治疗小儿疳积100例比较

四君子汤为中医常用方剂，具有补氟健脾功用，多用于脾胃氟虚，运化无力，食少便溏，消化不良，胃肠机能紊乱……等。用四君子汤加味如异功散、六君子汤、香砂六君子汤。其作用大同小异。现仅就异功散与四君子汤加草药爵床（为便于缩写以下简称4＋1）治疗小儿疳积100例疗效作一比较。     

无毒性大肠杆菌志贺毒素衍生物对黏膜免疫的佐剂活性[英]

大肠杆菌志贺毒素1(Stx1)B亚单位(Stx1-B)及A亚单位发生双重氨基酸替代的无毒性双突变Stx1(mStx1)具有潜在的黏膜佐剂活性,日本东京大学医学研究所Ohmura-Hoshino等对mStx1和Stx1-B与卵白蛋白(OVA)混合后鼻腔免疫小鼠所产生的黏膜佐剂活性进行研究。分别于0,7和14天用含100μg     

靶向PV株核蛋白基因的小分子干扰RNA对不同狂犬病病毒毒株复制的交叉抑制作用

目的研究小分子干扰RNA（siRNA）对狂犬病病毒（RV）不同毒株复制的交叉抑制效果。方法采用体外转录和RNA酶Ⅲ消化长片段双链RNA的方法制备8条以RV的PV株核蛋白（N）基因为靶基因的21nt siRNA，用以转染已经感染了不同滴度PV、CTN或CVS株RV的BSR细胞，采用直接免疫荧光法观察转染的siRNA对已感染BSR细胞的不同毒株RV复制的抑制效果，并分析这种抑制效果与靶基因序列的相关性。结果不同21nt siRNA均对PV株的复制产生了较强的抑制作用：对CTN株和CVS株的交叉抑制作用观察结果表明，21nt siRNA与靶基因在碱基错配高达5个的情况下仍对病毒复制保持抑制效应。然而，siRNA与靶基因碱基错配的位置与抑制作用的丧失高度相关。3’端第2个碱基的错配将使抑制作用表失，随后的碱基错配对抑制作用的影响依次降低；中部碱基错配影响较小；而5’端碱基错配对抑制作用几乎没有影响。结论siRNA对靶基因的抑制作用的丧失与其同靶基因序列碱基错配的位置相关，3’端碱基错配可降低其抑制作用的特异性，产生偏靶效应的范围和概率可能增大，这为设计独特的siRNA序列提供了新的思路。     

以聚合物微球为载体的破伤风类毒素蛋白疫苗免疫效果观察

目的 探索载破伤风类毒素（TT）蛋白的聚合物微球作为疫苗在动物体内的免疫效果。方法 采用溶剂蒸发技术制备包裹TT的聚乳酸及聚乳酸／聚乙醇酸共聚微球（PLGTTMS）,并以ELISA法和小鼠中和法测定免疫小鼠小鼠和豚鼠的血清中和抗体。结果 用这些载TT聚合物微球免疫豚鼠和小鼠后,所诱发的抗体反应大大高于未加佐剂的TT疫苗,且由大粒径和小粒径微球混和组成的PLATTMS所诱发的抗体反应呈现现明显的加强效应。用20LD50的破伤风毒素攻击后,氢氧化吸附的TT和包裹TT的不同聚合物微球免疫的小鼠均获得100％的保护率。结论 以聚乳酸及其与聚乙醇酸共聚微球为载体的破伤风类毒素蛋白疫苗在动物体内诱生的免疫反应显高于无佐剂疫苗,这为疫苗的开发提供了一条新途径。     

单磷酸脂质A能增强鼻内接种疫苗抗原的粘膜和全身免疫应答

免疫刺激性单磷酸脂质 A( MPL )是从明尼苏达沙门菌 R5 95株的脂多糖脂质 A中分离获得 ,它保留了亲本脂多糖的多数免疫刺激性但却没有其固有的毒性。作者评估了MPL作为粘膜佐剂提高乙型肝炎表面抗原( HBs Ag)、破伤风类毒素 ( TT)和流感病毒三种不同疫苗抗原全身和粘膜免疫应答的能力。　　将 MPL和双棕榈酰磷脂酰胆碱以 4∶ 1的摩尔比配制成含水配方的 MPL- AF;将MPL 分散在 0 .2 %三乙醇胺溶液中制成MPL- TEo A;而 MPL- SE则是将 MPL微流化于鲨烯溶液而制成的一种水包油制剂。　　将 MPL 制剂分别与 3种抗原混合制成疫苗…     

呼吸道合胞病毒单克隆抗体的制备及鉴定

目的：建立能稳定分泌抗呼吸道合胞病毒（RSV-long株,国际标准株）单克隆抗体的杂交瘤细胞株。方法：杂交瘤技术制备单抗,鉴定各项特性。结果：培育出稳定分泌抗RSV蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞5株。杂交瘤细胞株染色体数目在89～104条之间,其分泌的抗体分别属于鼠IgG1、IgG2a、IgG2b亚类,各种腹水单抗的荧光效价在1∶4000～1∶16000之间。一种单抗识别RSV基质蛋白（M）,两种单抗识别RSV融合蛋白（F）,另两种单抗识别RSV核衣壳蛋白（N）。单抗中和效价最高达1∶64。相加指数证实5种单抗识别不相关的抗原表位。用硫氰酸铵洗脱法比较了五种单抗相对亲和力的大小,依次为：1#〉2#〉4#〉3#〉5#。所有杂交瘤细胞株,经连续3个月培养及冻存半年后复苏,细胞生长良好,检测上清,其分泌抗体效价稳定。结论：已获得抗呼吸道合胞病毒的单克隆抗体,为RSV感染的早期诊断及进一步研究奠定了基础。     

狂犬病毒在不同细胞培养中持续感染的特性研究

用在犬病毒ＣＶＳ株鼠脑感染ＢＳＲ,ＢＨＫ和ＭＮＡ细胞,建立了不同的持续感染狂犬病毒的细胞株（ＰＩＲＶＣ）实验表明,不同的ＰＩＲＶＣ均经历了一个急性感染期和一个慢性感染期,在急性感染期,释放到上清的病毒滴度经过了一段高振幅的周期性上下波动后,大量细胞脱落,由少数贴壁细胞生长成片,从而进入一个慢性感染期,这一时期释放到上清病毒滴度的波动幅度急剧下降直至丧失,同时对ＰＩＲＶＣ急性期病毒增殖特性进行了动态     

用免疫细胞化学、RT-PCR等方法定量检测狂犬病毒及其核酸的比较研究

目的比较多种定量检测狂犬病毒(RV)及其核酸的方法。方法采用免疫细胞化学(ICCA)、RT-PCR、间接和直接免疫荧光(FA)以及细胞ELISA(CELISA)等多种方法对感染细胞单层的RV进行定量检测,比较和评价用不同方法检测RV的灵敏度和稳定性。结果采用ICCA法可在3h内对培养24h的RV进行准确和定量检测,可检测到RV的单个病灶(FFU),其灵敏度和稳定性与FA相当而优于CELISA;用RT-PCR的方法检测RV mRNA具有很高的灵敏度,通过测定RT-PCR产物电泳条带的灰度值,并经GAPDH基因校正,在感染细胞RV的量与其RT-PCR产物间建立了量效关系曲线及曲线方程,其决定系数(R2)达0.96。结论建立了多种方法对RV进行定量检测,其中用ICCA检测可在不使用荧光显微镜情况下对RV进行定量检测,经济实用,适于基层推广使用;用RT-PCR的方法亦可高灵敏度地检测RV的核酸,并进行定量分析。