清胰汤和姜黄素调整肠道微生态对重症急性胰腺炎的治疗机制

摘要： 目的 探讨清胰汤和姜黄素调整肠道微生态治疗重症急性胰腺炎 （SAP） 的机制。方法 40只SPF级健康 Wistar大鼠, 按照随机数字法分为4组, 对照组、 模型组、 清胰汤组、 姜黄素组, 每组10只。通过注射牛磺胆酸钠 （Na- Fc）, 诱发大鼠形成SAP模型, 建模前清胰汤组、 姜黄素组分别用相应中药汤剂灌胃1周。采用苏木素-伊红 （HE） 染色法观察结肠和胰腺组织病理变化, 收集大鼠盲肠段粪便, 16S rDNA测序技术分析4组大鼠肠道微生物菌群的变化。结果 病理结果显示, 模型组肠组织表现为肠壁水肿, 肠黏膜上皮缺损、 脱落等, 上皮下间质空隙变宽, 大量的中性粒细胞 （PMN） 等炎性细胞浸润等; 胰腺组织表现为胰腺腺泡水肿、 坏死, 叶间隔增宽, 大量的PMN等炎性细胞浸润等, 而中药清胰汤和姜黄素组可减轻模型组中的胰腺损伤和肠黏膜受损程度 （P＜0.05）。肠道菌群微生态结果显示清胰汤或 （和） 姜黄素组可有效降低SAP大鼠厚壁菌门 （包括梭菌纲、 芽孢杆菌纲）、 毛螺菌属数量菌群含量, 升高拟杆菌门 （包括拟杆菌纲、 拟杆菌属） 和乳酸杆菌属含量。结论 中药清胰汤和姜黄素可增加SAP大鼠的肠道菌群的多样性和丰富性, 调控微生物生态平衡, 增加益生菌群的含量, 降低有害菌群的定植能力, 从而达到对肠道的保护作用。     

柴胡桂枝汤减轻慢性胰腺炎神经性腹痛机制的探讨

目的：探讨柴胡桂枝汤(CHGZT)减轻三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠慢性胰腺炎(CP)神经性腹痛的初步机制。方法：50只雄性SD大鼠随机均分为5组,分别为假手术组、模型组、CHGZT低、中、高剂量组(4、8、16 g·kg^-1)。假手术组轻轻翻动胰腺后即关腹,模型组采用向胰管内逆行注射2%TNBS-10%乙醇。CHGZT在造模后4周开始灌胃给药,连续2周。5组大鼠分别于术后6周进行Von Frey疼痛阈值检测;苏木素-伊红(HE)染色评估胰腺组织慢性炎症及纤维化病变;免疫组化法(IHC)检测PGP9.5蛋白表达,同时观察神经周围炎性改变;IHC及免疫荧光(IF)染色观察胰腺相关胸段脊髓后角离子钙结合蛋白-1(Iba-1)、嘌呤能受体P2X7(P2RX7)的定位及P2RX7和小胶质细胞的共表达。结果：与假手术组比较,模型大鼠胰腺组织腺泡萎缩评分、炎性浸润评分、纤维化评分显著增高(P<0.01),大鼠在不同力值疼痛反应值均明显升高(P<0.05,P<0.01),PGP9.5周围炎性浸润评分显著升高(P<0.01),模型组大鼠脊髓后角Iba-...     

甘珀酸抑制eATP-P2X7R-NLRP3信号通路减轻慢性胰腺炎纤维化的实验研究

摘要：目的　探讨细胞外ATP（eATP）-P2X7R-NLRP3信号通路在慢性胰腺炎（CP）胰腺纤维化中的作用以及ATP抑制剂甘珀酸（CBX）对CP的治疗作用。方法　将6周龄雄性C57BL/6小鼠随机均分为5组：正常组,模型组,CBX低、中、高剂量组（分别为25、50、100 mg/kg）。造模结束后,CBX各剂量组小鼠分别腹腔注射相应剂量的药物。末次给药24 h后将小鼠脱颈处死。HE染色评估胰腺组织病理学改变;ATP化学发光法测定小鼠胰腺组织eATP水平;免疫荧光染色检测P2X7R、NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）蛋白表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qPCR）检测P2X7R、NLRP3、Caspase-1、缝隙连接蛋白（PAN-1）mRNA的表达。结果　HE染色,光镜下可见正常组小鼠胰腺细胞分布紧密,排列规则,无纤维化及炎症细胞浸润。模型组细胞间隙增宽、腺泡萎缩、炎症细胞浸润且有大量胶原纤维生成,组织学评分较正常组显著升高（P＜0.01）;与模型组相比,CBX中、高剂量组炎症细胞浸润及胶原纤维生成均减少,组织学评分降低。模型组小鼠造模后eATP水平较正常组显著升高（P＜0.01）,CBX中、高剂量组给药2周后,胰腺组织eATP水平均低于模型组。免疫荧光染色法和qPCR检测均显示,与正常组相比,模型组P2X7R、NLRP3、Caspase-1蛋白和mRNA表达升高（P＜0.01）;与模型组相比,CBX中、高剂量组表达均下调（P＜0.05）。此外,qPCR检测结果还显示,模型组小鼠PAN-1 mRNA表达较正常组显著上调;与模型组相比,CBX中、高剂量组表达均下调（P＜0.01）。结论　CP病程中eATP水平显著增加并激活P2X7R,促进NLRP3炎性体组装,加重胰腺纤维化,CBX可下调P2X7R、NLRP3、Caspase-1,减轻胰腺炎症损伤及纤维化,从而发挥治疗作用。     

番石榴叶总黄酮对慢性胰腺炎小鼠纤维化的影响

目的:探讨番石榴叶总黄酮(total flavonoids from Psidium guajava leaves,TFPGL)对慢性胰腺炎(chronic pancreatitis,CP)小鼠纤维化的影响及其机制。方法:将50只C57BL/6小鼠随机均分为正常组,CP模型组,oxidized ATP(oxATP)组,TFPGL低、高剂量组。后4组小鼠腹腔注射雨蛙素50μg·kg~(-1)·h-1(溶于200μL生理盐水),每天6次,每周3 d,连续6周,建立慢性胰腺炎小鼠模型。6周后,oxATP组腹腔注射oxATP(15μg·kg~(-1)·d-1,溶于200μL生理盐水)2周,TFPGL低、高剂量组分别予以TFPGL 0.186,0.372 g·kg~(-1)·d-1灌胃2周。同时,正常组小鼠腹腔注射与模型组等体积、等频率的生理盐水。苏木素-伊红(HE)染色评估胰腺损伤程度;天狼星红染色检测胰腺组织胶原含量;免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),核苷酸结合寡聚化结构域样受体3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor 3,NLRP3),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,Caspase-1)的蛋白表达水平;酶联免疫吸附法测定胰腺组织中IL-1β(interleukin-1β),IL-18水平。结果:与正常组比较,雨蛙素注射后胰腺损伤加重(P0.01),Caspase-1,NLRP3,α-SMA,IL-1β,IL-18水平升高(P0.01)。天狼星红染色显示胰腺组织细胞周围胶原Ⅰ(ColⅠ),胶原Ⅲ(ColⅢ)含量较正常组升高(P0.01)。与模型组比较,oxATP组及TFPGL低、高剂量组炎症损伤及纤维化程度均减轻,表现为天狼星红染色程度减轻(P0.05,P0.01),Caspase-1,NLRP3,α-SMA,IL-1β,IL-18水平均降低(P0.05,P0.01)。结论:TFPGL可通过抑制P2X7R介导NLRP3炎性体信号途径活化显著减轻慢性胰腺炎模型小鼠的慢性炎症及纤维化程度。     

6-磷酸果糖 -2-激酶 /果糖 -2,6-二磷酸酶 4对卵巢癌细胞干性的影响及其机制

目的:探讨6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶4(PFKFB4)对卵巢癌细胞干性的影响及其机制。方法:利用慢病毒系统构建PFKFB4过表达的卵巢癌SKOV3和A2780稳定细胞系。Real-time PCR 和Western blot检测干性相关转录因子SOX2、OCT4和NANOG的表达及成球实验检测细胞的成球能力,确定PFKFB4对卵巢癌细胞干性的影响;利用自噬激活剂雷帕霉素处理卵巢癌细胞,检测SOX2、OCT4和NANOG的表达及细胞的成球能力,评估自噬对卵巢癌细胞干性的影响;Western blot检测自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ和p62的表达,确定PFKFB4对卵巢癌细胞自噬的影响;生物信息学分析卵巢癌中PFKFB4与BNIP3表达的相关性;Real-time PCR和Western blot检测PFKFB4对BNIP3表达的影响。结果:过表达PFKFB4促进SOX2、OCT4和NANOG的表达和卵巢癌细胞的成球能力;雷帕霉素刺激增加SOX2、OCT4和NANOG的表达和卵巢癌细胞的成球能力;过表达PFKFB4增加卵巢细胞自噬水平,包括增加LC3B-Ⅱ蛋白表达、降低p62蛋白表达;生物信息学分析显示,卵巢癌组织中PFKFB4与BNIP3表达高度正相关;过表达PFKFB4增加BNIP3的mRNA和蛋白水平。结论:PFKFB4可能通过激活BNIP3介导的细胞自噬增强卵巢癌细胞的干性。