蜈蚣酶解工艺优化及抗肿瘤活性研究

目的:优化蜈蚣酶解工艺并探究酶解液产物体外抗肿瘤活性。方法:采用胰蛋白酶进行酶解,以水解度为指标,在单因素实验基础上,通过响应面法优化酶解工艺。结果:蜈蚣的最佳酶解条件为酶解温度49. 6℃,酶解p H为7. 62,酶解时间7小时,加酶量3000U。在最优条件下,平均水解度为17. 77%。体外抗肿瘤试验表明蜈蚣酶解液产物具有较优增殖抑制效果,对肺腺癌A549细胞株、乳腺癌MCF-7细胞株及喉癌Hep-2细胞株的IC50值分别为1. 822mg/ml、1. 142mg/ml和1. 404mg/ml。结论:此工艺稳定可行,可应用于蜈蚣酶解工艺的优化;其抗肿瘤效果优良。     

美洲大蠊粉酶解工艺最佳用酶初步筛选

目的:分别用4种蛋白酶对美洲大蠊粉超声提取液基于半仿生环境进行酶解,制备不同类型多肽,并采用MTT法筛选出抑制乳腺癌MCF-7细胞的最佳用酶。方法:分别用胃蛋白酶、弹性蛋白酶、胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶对美洲大蠊粉进行酶解,采用苯并戊三酮显色法和半微量凯氏定氮法测定不同酶解液的水解度;使用MTT法进行体外抗肿瘤实验。以乳腺癌MCF-7细胞的抑制率为指标,水解度为参考,评价4种蛋白酶对美洲大蠊粉的酶解效果并筛选出最佳用酶。结果:胃蛋白酶、弹性蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶对美洲大蠊粉的水解度分别为3.35%、13.30%、12.89%、7.74%。无酶对照组、胰蛋白酶组、胰凝乳蛋白酶组IC_(50)依次为1.396、0.724、0.402 mg/mL;胃蛋白酶和弹性蛋白酶组因抑制效果不稳定而舍去。结论:在综合酶解能力和抑瘤能力方面,胰蛋白酶为美洲大蠊粉酶解工艺的最佳用酶,胰凝乳蛋白酶次之。     

正交试验优选蜘蛛水溶性蛋白的超声提取工艺

目的:研究蜘蛛中蛋白的最佳超声提取工艺条件。方法:以蜘蛛粉为原料,探究超声处理方法提取蜘蛛水溶蛋白的提取条件,以水提液中蛋白的含量为考察指标,分别对超声处理过程中的提取时间、料液比、PH进行单因素实验,并通过正交试验法优化蛋白超声提取工艺。结果:液料比、提取时间、提取液p H均对蜘蛛的蛋白质提取具有极显著的作用。蜘蛛蛋白的最佳超声提取工艺为料液比1:40 (g:ml),提取时间50分钟,提取液p H10,最佳工艺下,蜘蛛水溶性总蛋白提取率11. 02%。结论:超声波提取蜘蛛水溶性总蛋白具有操作方便,经济高效的特点,在中药成分提取具有很好的应用前景。