携带肠道病毒71型中和线性表位重组流感病毒的构建

目的 获得能够携带肠道病毒71型(EV71)中和线性表位的重组流感病毒.方法 通过PCR方法,在流感病毒HA基因中插入EV71中和线性表位序列,获得重组质粒;进行反向遗传学操作,构建重组流感病毒.结果 获得了2个重组质粒pPolⅠ/Ⅱ/WSN-HA-SP55和pPolⅠ/Ⅱ/WSN- HA-SP70,并构建了能够分别携带EV71中和线性表位SP55和SP70的2株重组流感病毒,重组病毒3次传代血凝效价都保持在27和25HAU,具有较好的稳定性.结论 通过反向遗传学操作,构建出携带EV71中和线性表位的重组流感病毒,为研制预防手足口病重组流感病毒载体疫苗奠定基础.     

鸡贫血病毒vp3基因的克隆和分子特征

目的 获得来源于浙江地区鸡组织中的鸡贫血病毒(CA)vp3基因并分析其变异情况.方法 根据GenBank登录的vp3序列设计特异引物,利用PCR方法从鸡组织中获得7个CAV的vp3基因克隆,将其克隆到载体进行测序.结果 40份鸡血清中共检出CAV阳性16份,阳性率40.0％.序列测定结果表明,vp3基因长366 bp,...     

甲型流感病毒NS1蛋白应用研究进展

流感病毒是引起急性流感的病原体,具有传染性强、变异快和宿主范围广的特点.随着对流感病毒研究的深入,人们对流感病毒的认知度不断提高,对其的开发利用也随之启动,其中对最短的NS基因及其编码蛋白(NS1和NS2)的研究开发更令人注目.NS1蛋白虽在病毒出芽时未被包装,但在感染细胞中发挥了多种生物功能,如对宿主细胞IFN的调节...     

大蒜提取物抑制流感病毒在MDCK细胞上的增殖作用

目的 探讨大蒜提取物G、G1、G2抑制流感病毒在MDCK细胞上的增殖作用.方法 以利巴韦林为阳性对照药物,用不同方法获得的不同浓度大蒜提取物作用于流感病毒感染的MDCK细胞,以MTT法检测细胞存活率,判断大蒜抗流感病毒的效果.结果 G1对MDCK细胞的半数毒性浓度(CC50)为(60.39±7.00)mg/mL,抑制流感病毒增殖的半数有效浓度(EC50)为(15.00±4.36)mg/mL,选择性指数(S1=CC50/EC50)为4.03;G2的CC50为(50.93±10.17)mg/mL,但其抑制流感病毒的效果未超过50%;G无抑制效果.结论 G1在MDCK细胞上对流感病毒有明显的抑制作用,G2抑制作用并不明显,而G无抑制作用.结果 证明,不同提取方法其抑制作用有所差别.

Abstract：

Objective To study the effects of garlic extracts G,G1,G2 against influenza virus in MDCK cell.Methods By using ribavirin as a positive control drug,the different concentration garlic extracts collected by different methods acted on MDCK cell which infected influenza virus before,and by MTT method to detect cell viability to assess the effects of garlic.Results The median cytotoxic concentration(CC50) of G1 was(60.39±7.00 ) mg/mL,the median effective concentration(EC50) against influenza virus in MDCK cell was(15.00 ± 4.36) mg/mL and the selectivity index was 4.03.The CC50 of G2 was(50.93±10.17) mg/mL,the effects of inhibiting influenza virus did not exceed 50%.There was no inhibiting effects in CC5o of G.Conclusions The study suggests that the G1 has obviously inhibited effects on influenza virus in MDCK cell,while the G2 is not obvious,and the G has no inhibited effects.This result shows that the inhibitory effects of garlic in the different extraction methods are different.     

克感复方对流感病毒抑制作用的实验研究

目的:探讨克感复方在MDCK细胞上抗流感病毒的作用并对其机制进行初步研究。方法:以利巴韦林为阳性对照药物,运用抑制试验、预防试验、中和试验3种方法,以MTT法检测细胞存活率,研究克感复方抗流感病毒的作用并判断其作用原理。同时,通过药物血凝抑制实验分析其抗流感病毒作用是否与病毒血凝素相关。结果:克感复方对MDCK细胞的半数毒性浓度(CC50)为(2.84±0.65)mg/mL,抑制流感病毒增殖的半数有效浓度(EC50)为(0.18±0.12)mg/mL,选择性指数(SI)为15.78。有细胞外杀流感病毒作用,但作用较弱,最高抑制率未超过50%。无阻断流感病毒吸附的作用。无药物血凝抑制作用。结论:克感复方在MDCK细胞上具有抗流感病毒的作用,其中抑制流感病毒增殖的能力最强。     

浙江省702株淋病奈瑟菌的耐药性分析

目的检测淋病奈瑟菌临床分离株的耐药性及了解其对常用抗生素的耐药现状,对该地区淋病的临床用药治疗和控制有重要意义。方法收集2008～2016年浙江省人民医院分离的淋病奈瑟菌702株,菌落革兰染色镜检,并采用法国梅里埃VITEK 2-compact全自动细菌检测分析系统及其配套的API-NH细菌鉴定卡进行鉴定。采用VCAT3培养基35℃含5.0%CO_2条件下的K-B法进行药敏检测。采用SPSS13.0统计软件进行数据分析。结果702株淋病奈瑟菌对环丙沙星和四环素的耐药性分别为91.7%和86.2%;其次是青霉素G和氨苄西林,耐药率分别为82.7%和25.3%,对头孢噻肟和头孢曲松暂未出现耐药。结论环丙沙星、四环素、青霉素G和氨苄西林等药物因该地区的淋病奈瑟菌的耐药性太高已不宜作为本地区治疗淋病的一线药物使用,头孢噻肟和头孢曲松等可作为首选药物考虑,同时应进一步加强对淋病奈瑟菌耐药性的监测及根据相关药敏试验合理选用抗菌药物。     

双重实时荧光PCR对流感病毒检测及分型方法的研究

目的:建立双重实时荧光PCR方法用于流感病毒检测,实现对新甲型H1N1流感病毒,H1和H3亚型季节性流感病毒,H5和H9亚型禽流感病毒的亚型区分。方法:根据GenBank公布的基因序列,针对M基因保守区设计引物和探针,用于流感病毒检测和定量;针对HA基因设计引物和探针,用于病毒分型。建立和优化双重实时荧光PCR反应体系,进行敏感度和特异性评价,同时对32份已知亚型的流感病毒样本进行检测,验证所建方法的实用性。结果:基于M基因的实时荧光PCR方法定量范围为5×101到5×108个目的拷贝。经优化的双重实时荧光PCR方法对不同亚型流感病毒的检测灵敏度在50～500拷贝之间,各亚型之间没有交叉反应。建立的方法能够检测出本研究涉及的所有流感病毒标本,分型准确率达到96.9%。结论:建立的双重实时荧光PCR方法具有敏感度高,特异性好等优点,实现对流感病毒样本准确分型,适用于流感的鉴别诊断及病毒载量测定。     

抗流感病毒NS1蛋白抗体的制备及其生物特性研究

目的NSI蛋白在流感病毒复制和传播中起到重要的调节作用,其功能多样,如能调节宿主细胞的蛋白合成、诱导感染细胞的凋亡以及拮抗IFN作用等,此外还有许多功能至今尚未明了。因此,研制一个特异性高的抗NS1抗体,对NS1蛋白功能的进一步研究起到重要作用。方法RT-PCR扩增流感病毒NS1基因,将其克隆进原核表达载体pET-28a（＋）中。然后在大肠埃希菌B121中表达,用切胶纯化方法获取NS1融合蛋白。用该蛋白免疫新西兰大白兔,制备效价较高的多克隆抗体,并测定其效价（间接ELISA法）。用病毒感染细胞实验、Western印迹法和间接免疫荧光实验等方法,观察病毒复制过程中NS1蛋白的表达及细胞定位情况。结果首先构建了能表达NS1蛋白的质粒,并经原核细胞表达获得了NS1蛋白。然后用该蛋白免疫大白兔,获得了效价较高（1：256000）的抗NS1蛋白抗体。实验发现,该抗体可以特异性结合非依赖亚型的甲型流感病毒NS1蛋白。病毒感染后6h即可以检测到NSI蛋白,随着病毒复制时间的延长NS1蛋白表达量变化不明显;24h后NS1蛋白主要分布于细胞核内并能定位于核仁中,也有部分位于细胞质。结论本研究通过原核表达获得了NS1蛋白,并利用常规的免疫方法获得了效价较高的抗NS1多克隆抗体。所制备的多克隆抗体能够有效定位NS1蛋白的表达,并且能和甲型流感病毒各亚型结合,具有较高的特异性。该抗体不仅能用于NS1蛋白功能及其对宿主细胞影响的研究,而且可用于鉴别诊断猪或其他动物中的病毒感染还是接种疫苗后的反应,有较好的开发应用前景。