竹节参皂苷及其组合物的降脂活性比较研究

目的:比较竹节参中4种主要皂苷成分竹节参皂苷Ⅴ、伪人参皂苷RT1、竹节参皂苷Ⅳ、竹节参皂苷Ⅳa及其组合物的降脂活性。方法:采用油酸诱导的HepG2细胞脂肪堆积模型,以辛伐他汀和血脂康为阳性对照,以三酰甘油(TG)清除率为指标,考察竹节参皂苷Ⅴ、伪人参皂苷RT1、竹节参皂苷Ⅳ、竹节参皂苷Ⅳa及其不同比例组合物的体外降脂活性差异。构建蛋黄乳诱导的小鼠急性高脂血症模型,以辛伐他汀和血脂康为阳性对照,以血清TG、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)为指标,比较4种皂苷成分组合物与竹节参总皂苷的体内降脂作用。结果:体外实验结果显示,在相同剂量下,4种皂苷成分组合物的降脂活性优于各竹节参皂苷单体化合物和竹节参总皂苷,TG清除率显著升高(P0.05,P0.01);其中竹节参皂苷Ⅴ、伪人参皂苷RT1、竹节参皂苷Ⅳ、竹节参皂苷Ⅳa按2∶1∶1∶1比例组合物的降脂作用最为显著。体内实验结果显示,上述配比的竹节参皂苷组合物可显著降低急性高脂血症小鼠血清TC、TG、LDL-C水平(P0.05,P0.01),升高HDL-C水平(P0.05,P0.01),且其降脂作用优于竹节参总皂苷。结论:竹节参皂苷Ⅴ、伪人参皂苷RT1、竹节参皂苷Ⅳ、竹节参皂苷Ⅳa按2∶1∶1∶1组合可发挥协同降脂作用。     

肝毒清滴丸的保肝、镇痛和抗炎作用

目的:研究肝毒清滴丸的保肝、镇痛和抗炎作用,并与健肝乐颗粒的药理作用进行比较。方法:通过小鼠急性肝损伤实验,观察对比肝毒清滴丸和健肝乐颗粒的保肝作用;通过小鼠耳肿胀、毛细血管通透性试验,观察对比肝毒清滴丸和健肝乐颗粒对急性炎症的作用;通过小鼠扭体和热板试验,观察对比肝毒清滴丸和健肝乐颗粒的镇痛作用。结果:肝毒清滴丸能显著降低小鼠血清中GPT和GOT的含量(P<0.01),与健肝乐颗粒比较,低、中剂量组差异有显著性(P<0.01);能显著降低MDA和升高SOD,差异有显著性(P<0.01或P<0.05),与健肝乐颗粒比较,升高SOD差异有显著性(P<0.01),降低MDA差异有显著性(P<0.01或P<0.05);肝毒清滴丸能较强抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀,且可剂量依赖性缓解小鼠腹腔渗出性炎性作用,与健肝乐颗粒比较,差异有显著性(P<0.05);对小鼠热刺激引起的疼痛具有良好的镇痛作用,且能减少醋酸致痛小鼠的扭体次数,与健肝乐颗粒比较,差异有显著性(P<0.01)。结论:肝毒清滴丸具有保肝、镇痛和抗炎作用,效果优于健肝乐颗粒。     

竹节参鲨烯环氧酶基因的克隆及生物信息学分析

目的 克隆竹节参Panax japonicus鲨烯环氧酶基因（squalene epoxidase,PjSE）的全长cDNA序列,进行生物信息学分析和原核表达。方法 设计特异性引物,从竹节参中克隆得到PjSE序列;以PjSE基因序列作为输入数据,利用多序列同源比对等生物信息学分析工具进行序列分析;构建重组原核表达载体pCold-PjSE,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白诱导表达;采用实时荧光定量PCR技术分析该基因在竹节参不同组织中的相对表达量。结果 PjSE基因开放阅读框长度为1884 bp,编码627个氨基酸,PjSE蛋白相对分子质量为68 639.49,初步预测其具有跨膜结构域,可能定位在叶绿体上;聚丙烯凝胶电泳结果显示诱导表达蛋白的相对分子质量大小与预期结果一致;该基因在竹节参叶中表达量最高,须根次之,根中表达量最低。结论 PjSE基因的克隆、生信分析及原核表达研究,不仅有助于丰富竹节参中该类功能蛋白的种类和数量,完善竹节参皂苷类成分的生物合成途径,也为后期开展竹节参皂苷的异源合成提供了可供选择的关键基因元件。     

新型三唑二氧戊环类化合物的合成、晶体结构及抗真菌活性

目的合成(E)1-[4-(2,4-二氟苯基)-2-[2-(4-氟苯基)-乙烯基]-[1,3]二氧戊环-4-甲基]-1H-[1,2,4]三氮唑化合物的几何异构体,测定其晶体结构,并考察其体外抗真菌活性。方法以间二氟苯为起始原料,经Friedel-Crafts反应、与三氮唑缩合、环氧化,得到中间体1-[2-(2,4-二氟苯基)-2,3-环氧丙基]-1H-1,2,4-三唑甲磺酸盐,将环氧化物甲烷磺酸盐水解,然后与对氟肉桂醛缩合脱水制得目标化合物6 Ka和6 Kb,经1H NMR、MS和X-射线单晶衍射测定结构,并测试其体外抗真菌活性。结果 6 Ka属单斜晶系,空间群P2(1)/c,为顺式构型。6Kb属单斜晶系,空间群P2(1)/n,为反式构型。目标化合物对5种致病真菌在体外均有很强的抑菌活性。化合物6 Kb的抑菌活性优于化合物6Ka。结论该类型反式构型化合物的体外抗真菌活性优于其顺式构型。     

竹节参多糖对高血脂模型小鼠的影响作用

目的:研究竹节参多糖(D1)降血脂的药理活性。方法:腹腔注射75%蛋黄生理盐水溶液0.02mL.g-1建立小鼠高血脂动物模型。随机分为空白对照组、高脂模型组、2个阳性对照组(血脂康组及辛伐他汀组)和2个试验组(D1高剂量组及D1低剂量组)。空白对照组给予生理盐水,高脂模型组给予蛋黄乳溶液和生理盐水,阳性对照组和试验组以羧甲基纤维素钠混悬,配成混悬药液样品。测定给药后动物血浆中TG、TC、LDL-C、HDL-C的浓度。结果:阳性对照组和试验组各项指标与模型组比较,差异均有显著性。结论:竹节参多糖具有一定的降血脂的作用,并存在量效关系。     

三七皂苷类成分及对心血管作用的研究进展

三七为五加科植物三七Panax notoginseng的根及根茎,为常用中药,具有止血、散瘀、消肿、止痛等功能。此外,其茎叶、花、果实在民间也做药用。三七的主要药效成分为达玛烷型皂苷,具有较强的生物活性,引起医药界的广泛关注。现已从三七及其地上部分分离得到近百种皂苷类成分。根据苷元结构的不同,分为4类,分别为PPD型,PPT型,C17侧链变化型以及其他类型。该研究对三七的不同部位中的皂苷类化学成分进行了系统归纳,同时对三七皂苷在心血管方面的药理活性进行综述。     

UDP-糖基供体在中药苷类成分生物合成中的应用及研究进展

尿苷二磷酸（UDP）-糖基供体是三萜、黄酮和蒽醌等中药活性成分糖基化修饰的重要组成前体。近年来，通过代谢工程策略合成苷类化合物已取得一定进展，但UDP-糖基供体在不同类型的底盘细胞中产量普遍偏低，极大地限制了中药苷类化合物的高效生物合成。作者从UDP-糖基供体的生物合成、循环再生以及代谢合成途径中关键基因调控、代谢模块优化等方面，重点综述了UDP-糖基供体在苷类成分合成中供应的研究进展，并展望了UDP-糖基供体在生物合成中的挑战和发展方向，以期为今后苷类成分的生物合成相关研究提供借鉴。     

基于网络药理学和分子对接探寻升降散抗新型冠状病毒潜在作用机制研究

目的探究升降散抑制新型冠状病毒(SARS-Co V-2)的潜在作用。方法采用ETCM、中药系统药理学分析平台(TCMSP)、BATMAN-TCM和CMAUP数据库获得到升降散复方的靶蛋白基因;采用GeneCards数据库获取抗病毒相关靶基因;采用交集法进而获得升降散复方与抗病毒作用相关的靶基因;运用Cytoscape 3.7.2构建"复方-中药-靶点"网络;运用R语言进行KEGG通路富集分析和GO功能富集分析,预测升降散抗病毒的潜在作用。采用TCMSP、中国知网和Pub Chem数据库检索升降散中的化学成分,将各化学成分与3CL水解酶和血管紧张素转化酶Ⅱ(ACE2)进行分子对接。结果升降散复方可能通过663个基因发挥抗病毒作用。KEGG富集筛选得到10条与抗病毒最相关的通路(P0.01),涉及甲型流感等通路。升降散中与SARS-CoV-2 3CL水解酶和ACE2进行分子对接的结合能数值小于-29.3 kJ/mol的化合物分别有133个和145个。结论升降散可能通过多通路发挥抗病毒作用,对SARS-CoV-2具有潜在的抑制作用。     

基于全细胞催化的蟾蜍二烯内酯前体化合物生物合成研究

目的：将胆固醇生物转化成7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮。方法：PCR扩增中华大蟾蜍来源的3β羟基类固醇脱氢酶基因（Bg-HSD3B7）、细胞色素P450还原酶基因（Bg-CPR）、大鼠来源的细胞色素P450酶基因（Rn-CYP7A1）,生物信息学网站ExPASy、TMHMM预测理化性质,采用不同的构建组合方式构建工程菌;以胆固醇为底物进行全细胞催化,高效液相色谱检测是否产生7-α羟基胆固醇中间产物和7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮终产物。结果：克隆并以单顺反子方式构建到pETM6载体,获得带有3个基因Rn-CYP7A1、Bg-CPR、Bg-HSD3B7的大肠杆菌工程菌BL21(DE3),该工程菌可以全细胞催化方式将胆固醇转化生成7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮,且没有中间产物。结论：克隆得到中华大蟾蜍来源的Bg-HSD3B7基因、Bg-CPR基因、大鼠来源的Rn-CYP7A1基因,构建了具有全细胞催化功能的工程大肠杆菌,可以催化胆固醇转化生成7α-羟基-4-胆甾烯-3-酮。     

竹节参药材不同部位皂苷成分的分析研究

目的建立HPLC法同时测定竹节参药材中皂苷Ⅴ、Ⅰb、Ⅳ和Ⅳa的方法;并对鄂产竹节参植物不同部位中竹节参总皂苷、竹节参皂苷Ⅴ、Ⅰb、Ⅳ和Ⅳa的含量进行检测分析,评价其药用价值。方法采用超声法提取竹节参不同部位中的总皂苷成分;紫外-可见分光光度法测定其的含量;HPLC法同时测定不同部位竹节参中皂苷Ⅴ、Ⅰb、Ⅳ和Ⅳa含量,色谱柱为Apollo C18(4.6 mm×200 mm,5μm),流动相35%乙腈-0.05%磷酸水溶液,流速1.0 ml.min-1,波长203 nm,柱温25℃,进样量20μl。结果竹节参根茎干中总皂苷、皂苷Ⅴ、Ⅰb、Ⅳ和Ⅳa含量分别为14.49%,4.97%,0.47%,4.90%和2.49%;芦头结节部分分别为11.91%,2.57%,1.18%,3.46%和1.62%;地上茎叶部分分别为0.56%,0.05%,0.01%,0.07%和0.03%。结论建立的方法灵敏性高,重复性好,操作简便;鄂产竹节参地下根茎部分中根茎干和芦头结节的有效成分总皂苷含量较高,地上茎叶部分皂苷含量较低,有效成分含量与其传统的药用部位相符;竹节参药用部位中皂苷Ⅴ、Ⅰb、Ⅳ和Ⅳa成分分布均匀,且含量占总皂苷的2/3以上,可以作为竹节参药材质量评价指标。