孟河医派特色炮制猪心血拌丹参及其他炮制品活性成分与抗脑缺血氧化损伤相关性分析

目的 分析猪心血拌丹参及其他丹参炮制品中11个小分子活性成分及1个蛋白成分与抗脑缺血氧化损伤的相关性,明确猪心血拌丹参抗脑缺血氧化损伤的关键成分标志物。方法 采用高效液相色谱法（HPLC）同时测定丹参、猪心血拌丹参、猪血拌丹参、酒拌丹参、猪血清转铁蛋白（Tf）拌丹参5种饮片中11种活性成分含量;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测丹参不同炮制品中Tf的含量。构建斑马鱼缺血性脑卒中模型,考察丹参不同炮制品对脑缺血斑马鱼行为轨迹、转基因斑马鱼Tg（elavl3：eGFP）脑神经元损伤及脑组织中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平的影响;构建糖氧剥夺/复氧（OGD/R）诱导的小鼠海马神经细胞缺血缺氧模型,以乳酸脱氢酶（LDH）、活性氧（ROS）、MDA和SOD为评价指标,考察丹参不同炮制品对神经细胞氧化损伤的影响;通过主成分分析（PCA）、偏最小二乘判别法-判别分析（PLS-DA）及Spearman相关性分析对11个小分子活性成分及1个蛋白成分与药效指标进行分析,筛选猪心血拌丹参抗脑缺血氧化损伤的关键成分标志物。结果 与丹参比较,丹参各炮制品中水溶性、脂溶性成分含量均呈不同程度的升高,而丹酚酸A成分含量降低;与酒拌丹参比较,猪心血拌丹参、猪血拌丹参及Tf拌丹参中丹酚酸B、丹参素、迷迭香酸等成分含量均升高,而丹酚酸A含量降低。ELISA结果显示,猪心血拌丹参、猪血拌丹参及Tf拌丹参中均含有Tf蛋白,且三者含量差异无统计学意义。药效结果显示,丹参不同炮制品均能改善斑马鱼缺血性脑卒中后出现的行为缺陷、脑神经元损伤及氧化应激,且猪心血拌丹参组作用最明显。PCA结果显示,丹酚酸B、丹酚酸A、迷迭香酸、紫草酸、丹参素、咖啡酸、丹参酮Ⅱ_A、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ为丹参及其炮制品中的主要贡献成分。相关性分析结果显示,隐丹参酮、迷迭香酸、咖啡酸、二氢丹参酮Ⅰ、丹酚酸B、丹参酮Ⅱ_A、丹参酮Ⅰ与斑马鱼脑组织中MDA水平呈负相关,紫草酸、原儿茶醛、迷迭香酸、二氢丹参酮Ⅰ、丹酚酸B、Tf与SOD水平呈正相关,迷迭香酸、咖啡酸、二氢丹参酮Ⅰ、丹酚酸B、丹参酮Ⅱ_A、丹参酮Ⅰ、丹参素、Tf与斑马鱼脑神经元荧光强度呈正相关;紫草酸、原儿茶醛、迷迭香酸、二氢丹参酮Ⅰ、丹酚酸B、丹参素、Tf与HT22细胞中LDH、ROS、MDA水平呈负相关,与SOD水平呈正相关。结论 丹参及其不同炮制品抗脑缺血氧化损伤作用存在差异,其中以猪心血拌丹参改善氧化损伤作用最强,这可能与丹酚酸B、丹参素、迷迭香酸等成分的含量变化有关,可为明确该孟河医派特色炮制品抗脑缺血质量标志物及阐明其炮制机制提供依据。     

羌活水提液通过TRPV1调节神经病理性疼痛镇痛机制研究

目的 探索羌活水提液(Water extract of notopterygium incisum,WN)对神经病理性疼痛的作用及分子生物学机制.方法 疼痛行为实验检测WN灌胃对急性疼痛模型小鼠和慢性缩窄性损伤(Chronic constriction inj ury,CCI)引起的神经病理性疼痛模型小鼠热痛觉过敏和机...     

G蛋白偶联受体MrgprD研究进展及对中医药研究的启示

中医药在止痒、镇痛方面具有副作用小、疗效明确的优势，但是其作用的分子生物学机制并不清楚。MrgprD（Mas-related gene D）是G蛋白偶联受体Mrg（Mas-related genes）家族的一个成员，特异表达于外周初级感觉神经元上。综述了MrgprD近20年的研究现状，为认识MrgprD的新功能并为相关疾病治疗提供参考。鉴于MrgprD在痛觉和痒觉产生中的作用，可能成为中医药镇痛、止痒的作用靶点，为中医药的研究提供思考。      

孟河医派特色炮制辅料猪心血和猪血的蛋白质组学分析及其对丹参抗小胶质细胞炎症损伤的影响

目的 采用蛋白质组学考察猪心血（PCB）和猪血（PB）的蛋白差异,并比较二者对丹参（DS）抗小胶质细胞炎症损伤的影响。方法 采用纳升液相色谱-四极杆轨道阱质谱法（nLC-MS/MS）联合生物信息学比较PCB和PB模拟胃肠道消化的蛋白质组学差异,应用蛋白质免疫印迹法（Western blot）验证二者部分共有蛋白和差异蛋白含量;应用皮质酮（CORT）联合脂多糖（LPS）构建BV2神经炎症模型,考察PCB和PB对DS抗炎症细胞中肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）水平的影响。结果 蛋白质组学结果显示,PCB和PB中共有蛋白69种、差异蛋白68种,其中共有蛋白中包括具有脑靶向作用的转铁蛋白（Tf）,二者差异蛋白分别为41、27种。Western blot验证结果显示,二者共有Tf含量差异无统计学意义,差异蛋白肌酸激酶M及心脏型脂肪酸结合蛋白（H-FABP）含量差异则具有统计学意义（P<0.05）。进一步体外实验研究发现,与同浓度DS组比较,除100 mg·L^-1 PB拌DS（PB-DS）组外,PCB拌DS（PCB-DS）组和PB-DS组均能明显抑制BV2炎症细胞的TNF-α和IL-6水平（P<0.05,P<0.01）;与同浓度PB-DS组比较,PCB-DS组均能明显抑制BV2炎症细胞TNF-α和IL-6水平（P<0.05,P<0.01）。结论 孟河医派临方特色炮制辅料PCB和PB均能促进DS抑制神经炎症作用,且PCB促进DS抑制作用更显著,这可能是由于二者存在参与能量代谢相关差异蛋白所致,可为揭示PCB-DS及PB-DS的炮制科学内涵奠定基础。