一氧化氮和水杨酸依次介导内生真菌诱导子促进苍术细胞中苍术素生物合成的信号转导

目的 研究介导内生真菌诱导子促进苍术悬浮细胞中苍术素生物合成的信号分子及信号转导途径,并探讨诱导子对苍术素合成途径关键酶活性的影响。方法 采用植物细胞悬浮培养法,考察内生真菌诱导子处理下苍术细胞中一氧化氮（NO）、水杨酸（SA）及苍术素量的变化。结果 内生真菌诱导子通过诱导苍术细胞中一氧化氮合酶（NOS）、苯丙氨酸解氨酶（PAL）以及乙酰辅酶A羧化酶（ACC）的活性,显著促进苍术细胞的NO迸发、SA和苍术素的合成。NOS抑制剂PBITU可以阻断诱导子对NO、SA和苍术素合成的促进作用,外源NO供体SNP及外源SA单独处理也能促进苍术素的合成,说明NO和SA是参与苍术素合成的信号分子,且NOS是参与诱导子诱发苍术细胞NO迸发的主要途径。NO猝灭剂cPITO可以有效清除诱导子诱发苍术细胞的NO迸发,显著阻断诱导子对苍术细胞中SA和苍术素合成的促进作用,外源SNP可以逆转cPITO对PAL、ACC活性以及SA、苍术素合成的抑制作用,表明NO是介导内生真菌诱导子诱发苍术细胞中苍术素和SA生物合成所必需的上游信号分子。结论 NO主要通过SA信号途径介导内生真菌诱导子激活ACC,显著促进苍术细胞中苍术素的生物合成。     

内生真菌诱导子对茅苍术细胞生长及苍术素积累的影响

目的:研究内生真菌诱导子对茅苍术细胞生长以及苍术素积累的影响.方法:采用细胞悬浮培养方法研究内生真菌诱导子不同浓度、不同加入时间对茅苍术细胞生长、苍术素合成以及相关酶活性的影响.结果:低浓度诱导子对细胞生长没有明显的影响,但高浓度诱导子显著抑制细胞生长,当诱导子质量浓度达到100 mg·L-1时,细胞生长抑制率达到46.7%;此外,从茅苍术内生真菌中筛选获得6株具有较强诱导作用的内生真菌,其中Rhizoctonia SP1诱导子的作用较强,20～60 mg·L-1 Rhizoctonia SP1诱导子显著促进苍术素的生物合成.在细胞培养至12 d时,添加40 mg·L-1 Rhizoctonia SP1诱导子,苍术素的含量在第21天达到最大值28.06μg·L-1,比对照提高了48.3%;且细胞多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)的活性出现了显著提高.结论:内生真菌诱导子能有效提高茅苍术细胞悬浮培养体系中苍术素的产量.     

通塞脉微丸血清药物化学的初步研究(Ⅰ)

目的 研究通塞脉微丸复方大鼠给药后血清中移行成分的归属.方法 建立通塞脉微丸及大鼠ig通塞脉微丸后血清的HPLC色谱分析方法;比较全方制剂、金银花、当归、甘草、玄参、黄芪和石斛各单方制剂分别给药后所得的血清样品,分析口服通塞脉微丸后大鼠血中移行成分、来源生药及其代谢产物.结果 大鼠ig通塞脉微丸后从血清中发现了15种入血成分,其中10种成分为复方所含成分的原型,其中绿原酸、阿魏酸、甘草素和肉桂酸为已知确定结构的化合物,另外5种成分分别来源于金银花、当归、甘草、玄参和石斛,其具体结构还有待进一步检测分析;1种为复方给药后新产生的代谢物质;3种为给药后产生的未知化合物.结论 血中移行成分及其代谢产物是通塞脉微丸的体内直接作用物质,对其深入研究将有助于阐明复方效应的物质基础.     

通塞脉微丸血清药物化学的初步研究（I）

目的 研究通塞脉微丸复方大鼠给药后血清中移行成分的归属。方法 建立通塞脉微丸及大鼠ig通塞脉微丸后血清的HPLC色谱分析方法;比较全方制剂、金银花、当归、甘草、玄参、黄芪和石斛各单方制剂分别给药后所得的血清样品,分析口服通塞脉微丸后大鼠血中移行成分、来源生药及其代谢产物。结果 大鼠ig通塞脉微丸后从血清中发现了15种入血成分,其中10种成分为复方所含成分的原型,其中绿原酸、阿魏酸、甘草素和肉桂酸为已知确定结构的化合物,另外5种成分分别来源于金银花、当归、甘草、玄参和石斛,其具体结构还有待进一步检测分析;1种为复方给药后新产生的代谢物质;3种为给药后产生的未知化合物。结论 血中移行成分及其代谢产物是通塞脉微丸的体内直接作用物质,对其深入研究将有助于阐明复方效应的物质基础。     

H2O2介导内生真菌诱导子促进茅苍术细胞HMGR的活化和β-桉叶醇的生物合成

目的 研究内生真菌诱导子对茅苍术悬浮细胞次生代谢途径关键酶活性的影响,探讨茅苍术次生代谢产物的诱导途径和诱导机制。方法 将内生真菌诱导子添加到茅苍术悬浮细胞中,测定NADPH氧化酶和HMGR酶活性以及H₂O₂和β-桉叶醇的量。结果 内生真菌Fusarium sp 5诱导子可提高NADPH氧化酶的活性,诱导氧化迸发,显著促进H₂O₂的积累,激活倍半萜类代谢途径中关键酶HMGR的活性,促进β-桉叶醇的生物合成,处理组的产量达到66.59 μg/g,比对照组提高了257.6%。H₂O₂淬灭剂CAT和NADPH氧化酶抑制剂DPI可以阻断Fusarium sp 5诱导子对茅苍术悬浮细胞中HMGR的活化和β-桉叶醇合成的促进作用。外源H₂O₂溶液单独处理也能够触发茅苍术细胞中HMGR活化和β-桉叶醇的合成加强。结论 H₂O₂是参与内生真菌诱导子诱发茅苍术细胞中β-桉叶醇合成所必需的信号分子,通过激活HMGR,从而触发β-桉叶醇的生物合成。