丹酚酸B 调节SIRT1 信号途径抑制H2O2 诱导的NLRP3 炎症 小体激活

目的基于沉默信息调节因子1（SIRT1）/ NOD 样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体途径探讨丹酚酸B（SalB） 抗氧化应激致细胞损伤的作用机制,以期阐明丹酚酸B 抗心肌缺血的作用机制。方法采用体外构建H2O2 诱 导的氧化应激细胞模型,将H9c2 细胞分为6 组,分别为正常组、模型组（600 μmol·L-1 H2O2 刺激）、H2O2+丹酚 酸B（5、10、20 μmol·L-1）组和H2O2 + 丹酚酸B（20 μmol·L-1）+EX527（10 μmol·L-1） 组。采用MTT 法测定细胞 活性;Hoechst 染色法测定细胞凋亡;比色法及ELISA 法分别测定乳酸脱氢酶（LDH）、白细胞介素（IL）-1β 水 平;采用DCFH-DA 荧光探针检测细胞内活性氧（ROS） 水平;采用JC-1 荧光探针测定线粒体膜电位; Western Blot 法测定H9c2 细胞中NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白 （ASC）,以及SIRT1 信号通路相关的SIRT1、磷酸化AMP 蛋白活化激酶α（p-AMPKα）、AMP 蛋白活化激酶α （AMPKα）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（PGC-1α） 蛋白表达。结果与正常组比较,模型 组细胞活力及线粒体膜电位明显降低（P＜0.01）,细胞凋亡程度及细胞内ROS、LDH 和炎症因子IL-1β 水平明 显升高（P＜0.01）;与NLRP3 炎症小体相关的NLRP3、Caspase-1 和ASC 蛋白表达显著上调（P＜0.01）, SIRT1、p-AMPKα/AMPKα 和PGC-1α 蛋白表达明显下调（P＜0.01）。与模型组比较,丹酚酸B 组的细胞活力 以及线粒体膜电位显著升高（P＜0.05,P＜0.01）,细胞凋亡程度及细胞内ROS、LDH 及炎症因子IL-1β 释放水 平明显降低（P＜0.01）。丹酚酸B 能够明显上调SIRT1 信号通路中SIRT1、p-AMPKα/AMPKα、PGC-1α 蛋白表 达（P＜0.05,P＜0.01）,下调NLRP3 炎症小体相关的NLRP3、Caspase-1 和ASC 蛋白表达（P＜0.05,P＜ 0.01）,且呈一定量效关系。在应用SIRT1 特异性抑制剂EX527 干预后,丹酚酸B 抑制H2O2 诱导的NLRP3 炎 症小体激活作用被明显逆转。结论丹酚酸B 可能通过激活SIRT1/AMPK/PGC-1α 信号通路,抑制氧化应激诱 导的NLRP3 炎症小体的激活,继而发挥抗心肌缺血作用。     

丹酚酸B通过抑制NLRP3炎症小体priming阶段减轻缺氧诱导大鼠心肌细胞损伤

目的探究丹酚酸B(Sal B)能否通过调控NLRP3炎症小体priming阶段减轻缺氧诱导大鼠心肌细胞损伤。方法CCK8法检测不同浓度丹酚酸B对大鼠H9C2细胞生长的影响,并挑选出合适的丹酚酸B实验浓度;微孔板、ELISA法检测缺氧造模后实验组,不同浓度给药组,以及抑制剂组LDH/cTn/IL-1β的分泌水平;qPCR以及蛋白质免疫印迹法检测造模后实验组,不同浓度给药组以及抑制剂组TLR4/Myd88/IRAK1/NF-κB/NLRP3基因以及蛋白表达水平。结果经过缺氧处理后,H9C2细胞活性下降,LDH/cTn/IL-1β分泌量升高,TLR4/Myd88/IRAK1/NF-κB/NLRP3在mRNA水平以及蛋白表达上调;与模型组相比,丹酚酸B预处理24h后,H9C2细胞活性增加,LDH/cTn/IL-1β分泌量下降,TLR4/Myd88/IRAK1/NF-κB/NLRP3 mRNA水平以及蛋白表达水平降低。结论丹酚酸B可以通过调控NLRP3炎症小体priming阶段,减轻缺氧诱导的大鼠心肌细胞损伤。