藏红花素抑制铁死亡改善糖尿病肾病的机制研究

[目的] 研究藏红花素（CRO）治疗糖尿病肾病（DN）的效果并从脂质过氧化与铁死亡角度探究其作用机制。[方法] 60只C57BL/6J小鼠适应性喂养1周,HFD继续喂养8周,之后链脲霉素（STZ）造模并随机平均分为正常组、模型组、铁死亡抑制剂组（铁死亡抑制剂Fer-1,10 mg/kg,灌胃）、低剂量CRO组（CRO 5 mg/kg,灌胃）、中剂量CRO组（CRO 10 mg/kg,灌胃）、高剂量CRO组（CRO 20 mg/kg,灌胃）。治疗8周后,收集小鼠24 h尿液样本、血液样本、肾脏进行分析测定。采用试剂盒测定小鼠24 h尿蛋白定量（24 h-UPQ）,血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）,肾组织丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）、4-羟基壬烯醛（4-HNE）水平,评估其肾功能与脂质过氧化水平。对肾脏同一部位进行苏木精-伊红（HE）、Masson以及TUNEL染色,观察其病理学变化以及细胞死亡情况。测定肾组织Fe水平并采用实时荧光定量反转录聚合酶连锁反应（RT-qPCR）以及蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测前列腺六跨膜上皮抗原3（STEAP3）、转铁蛋白（TF）、重链铁蛋白（FTH1）、轻链铁蛋白（FTL）以及谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）表达情况,以评估CRO对铁死亡的影响。[结果] 与模型组相比,CRO治疗后,DN小鼠Cr、BUN、24 h-UPQ有不同程度降低,肾组织病理损伤有不同程度的好转,MDA、ROS、4-HNE水平显著降低,肾组织中TUNEL荧光阳性反应明显减弱,肾组织Fe水平出现不同程度降低,STEAP3与TF表达下调,FTH1、FTL以及GPX4蛋白表达上调。[结论] CRO可以通过抑制脂质过氧化并减轻细胞铁死亡发挥对DN小鼠肾脏的保护作用。     

三黄益肾胶囊调控NF-κB信号通路减轻糖尿病肾病大鼠炎症反应的机制研究

目的：旨在探究三黄益肾胶囊治疗糖尿病肾病（DN）可能的炎症反应机制。方法：按照随机数字表法将60只大鼠分为正常组、模型组、厄贝沙坦组及三黄益肾低、中、高剂量组,每组10只。除正常组外,其余各组大鼠用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素（STZ）注射建立DN模型。正常组和模型组给予生理盐水2 mL灌胃;厄贝沙坦组给予厄贝沙坦11.51 mg/kg灌胃;三黄益肾低、中、高剂量组分别给予三黄益肾胶囊0.41、0.81、1.62 g/kg灌胃。各组大鼠均1次/d,连续给药4周。比较各组大鼠空腹血糖（FBG）、体质量、24 h尿白蛋白、肾功能指标、肾组织病理学变化、肾组织抗氧化相关指标（SOD、GSH-Px活性及MDA水平）、肾组织炎症介质［白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）］、肾组织诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、肾组织CD68、CC趋化因子受体2(CCR2)表达、肾组织CC趋化因子配体2(CCL2)、NF-κB P65、p-NF-κB P65、IκB、p-IκB表达。结果：与模型组比较,各三黄益肾胶囊组大鼠体质量高,FBG、血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）及24 h尿蛋白水平低,肾脏组织病理变化减轻,三肾组织中SOD、GSH-Px活性高,MDA水平低,IL-6、IL-1β、TNF-α水平低,肾组织中iNOS水平低,肾组织CCR2与CD68共定位水平低,CCL2、p-NF-κB P65、p-IκB蛋白表达低。结论：三黄益肾胶囊治疗DN的机制可能与抑制肾组织中NF-κB信号通路激活,减轻肾脏氧化应激及炎症反应有关。     

白虎加人参汤对2型糖尿病大鼠脂代谢的影响

目的：研究白虎加人参汤对2型糖尿病（T2DM）模型大鼠腺苷一磷酸活化蛋白激酶（AMPK)/固醇反应元件结合蛋白-1(SREBP1)信号通路的影响。方法：通过高脂饲料联合链脲佐菌素（STZ）注射建立T2DM模型大鼠,并用不同剂量的白虎加人参汤灌胃。通过检测各组大鼠造模给药后血清中相关生化指标和肝组织病理学变化,评估白虎加人参汤对T2DM模型大鼠的治疗作用;然后,运用定量聚合酶链反应（qPCR）和蛋白质免疫分析法检测白虎加人参汤干预后,各组大鼠肝组织中AMPK/SREBP1信号通路关键因子腺苷一磷酸活化蛋白激酶（AMPK）、乙酰辅酶A羧化酶1（ACC1）、脂肪酸合成酶(FASN)、ATP柠檬酸裂解酶(ACLY)基因及蛋白水平,初步探究白虎加人参汤治疗T2DM模型大鼠的作用机制。结果：白虎加人参汤可明显降低T2DM模型大鼠血清中空腹血糖（FBG）、口服葡萄糖耐量试验（OGTT）、谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）以及低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平,升高高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平,同时改善T2DM模型大鼠肝组织病理学变化。qPCR及蛋白质免疫分析结果显示,白虎加人参汤可显著降低T2DM模型大鼠肝组织中AMPK基因与蛋白水平,上调SREBP1、ACC1、ACLY、FASN基因与蛋白水平。结论：白虎加人参汤对T2DM模型大鼠具有治疗作用,其作用机制可能与调节肝组织中AMPK/SREBP1信号通路,改善脂代谢有关。     

基于IRE1/GPR78信号通路研究三黄益肾胶囊抑制DKD大鼠肾组织细胞凋亡的作用机制

[目的] 探讨三黄益肾胶囊对糖尿病肾病（DKD）模型大鼠的治疗作用,同时研究三黄益肾胶囊对 DKD 模型大鼠肌醇酶 1（IRE1）/G 蛋白偶联受体 78（GPR78）信号通路的影响。[方法] 将 30 只大鼠平均分为正常组、模型组、阳性药组、三黄益肾低剂量及三黄益肾高剂量组,每组 6 只。除正常组外,其余各组运用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素（STZ）注射建立 DKD 模型,造模后正常组与模型组每天灌胃生理盐水,阳性药组每天灌胃厄贝沙坦 11.51 mg/kg,三黄益肾低剂量及三黄益肾高剂量组每天分别灌胃三黄益肾胶囊 0.81、1.62 g/kg,分别干预 8 周。通过观察给药期间各组大鼠血糖、 体质量水平, 检测造模给药后生化指标水平及肾组织病理学染色评估三黄益肾胶囊对 DKD 的治疗作用;其次,运用试剂盒及酶联免疫吸附（ELISA）法研究三黄益肾胶囊对 DKD 大鼠肾组织中氧化应激及炎症因子水平的影响;最后运用免疫荧光、Tunel 染色、蛋白免疫印迹（Western blot）等方法研究三黄益肾胶囊对 DKD 大鼠肾组织细胞凋亡以及 IRE1/GPR78 信号通路的影响。[结果] 经三黄益肾胶囊干预后,DKD 大鼠体质量显著增加, 血糖水平降低,血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）及 24 h 尿蛋白水平下降,同时也可改善 DKD 大鼠肾组织病理学变化,肾组织炎细胞浸润及纤维化减轻。此外,三黄益肾胶囊可显著升高 DKD 模型大鼠肾组织中超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）活性、降低丙二醛（MDA）水平,并降低 DKD 大鼠血清中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。Western blot 结果显示,三黄益肾胶囊显著降低了 DKD 模型大鼠肾组织中内质网应激标志性因子 GRP78、IRE1 蛋白表达水平, 同时有效降低了模型大鼠肾组织中促凋亡蛋白 BcL2 关联 X 蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶-9（Caspase-9）的表达,提高了抑制凋亡蛋白 BcL2 的表达。[结论] 三黄益肾胶囊对 DKD 模型大鼠具有显著治疗作用, 其作用机制可能与抑制肾组织中 IRE1/GPR78 信号通路激活,改善内质网应激有关。     

健脾固肾化瘀汤对糖尿病肾脏病大鼠肾脏保护及IGF-1 mRNA、MCp-1 mRNA和Nephrin mRNA表达的影响

目的：研究健脾固肾化瘀汤对糖尿病肾脏病(DKD)大鼠肾脏病理变化的改善及肾病蛋白(Nephrin)、单核细胞趋化因子1(MCp-1)和类胰岛素1号生长因子(IGF-1)的影响。方法：采用雄性Sprague-Dawley大鼠腹腔注射链脲霉素(STZ)来复制糖尿病肾病大鼠模型。根据随机数表随机选择6组,即正常组、模型组、雷米普利组、健脾固肾化瘀汤低、中、高剂量组(1.9、3.8、7.6 g/kg),各10只。用药8周后,测定各组血清肌酐、尿素氮、甘油三酯、总胆固醇和24 h尿白蛋白的指标。在光学显微镜下观察肾脏的形态学变化。用免疫组化法观察Nephrin、MCp-1和IGF-1的表达,用RT-PCR方法观察Nephrin、MCp-1、IGF-1 mRNA的表达。结果：与正常组相比,模型组的甘油三酯、总胆固醇、肌酐、尿素氮、24 h尿微量白蛋白、MCp-1和IGF-1 mRNA的水平明显升高(P<0.05),Nephrin mRNA的表达明显降低(P<0.05);与模型组相比,健脾固肾化瘀汤各组的甘油三酯、总胆固醇、肌酐、尿素氮、24 h尿微量白蛋白、MCp-1、IGF-1 mR...     

中医药调控TGF-β1/Smad信号通路治疗糖尿病肾病的研究进展

糖尿病肾病（DN）是糖尿病的严重微血管并发症之一，是终末期肾脏的主要病因。糖尿病肾病的发生发展与肾脏纤维化进展息息相关，研究表明肾脏纤维化是各种慢性肾脏疾病的重要病理特征和最终病理结果。因此，针对肾脏纤维化的治疗有利于延缓DN的疾病进展。转化生长因子-β₁（TGF-β₁）/Smad信号通路是肾脏纤维化的关键信号通路之一，TGF-β₁是介导肾脏纤维化的关键因子，在与纤维化有关的肾脏疾病中呈现出高表达状态，Smads蛋白是TGF-β₁信号转导通路中下游主要效应分子，TGF-β₁通过激活Smads蛋白将信号从胞质异位到细胞核中，并调节与纤维化相关靶基因的转录，从而发挥生物学效应促进肾脏纤维化进程。近年来中医药在DN的防治中起到越来越重要的作用，探索中医药通过调控TGF-β₁/Smad信号通路预防和治疗DN的研究也日益增多。基于中医药研究现状，该文查阅相关文献，通过综述TGF-β₁/Smad信号通路的基本结构及其与DN的关系，中药单体及提取物、中成药及中药复方基于TGF-β₁/Smad信号通路改善和延缓肾脏纤维化的研究现状及其通过调节TGF-β₁/Smad信号通路起到缓解炎症反应及氧化应激、减少细胞外基质的累积和抑制上皮间质转化等作用，旨在为DN的防治提供新思路和方向。