地高辛标记DNA探针快速筛选肿瘤细胞株基因表达差异

目的建立寡核苷酸探针正向斑点杂交技术,快速筛选不同细胞株同一基因HIF-1a表达差异,探讨斑点杂交筛选基因表达的可行性。方法将多种培养肿瘤细胞株提取总RNA后,点样于尼龙膜上,与地高辛标记的HIF-1a基因探针杂交,结果与半定量RT-PCR结果比较。结果斑点杂交实验结果与RT-PCR结果一致,无统计学差异(P>0.05)。结论用随机引物地高辛标记DNA探针可以快速筛查不同细胞株同一基因表达差异,可以作为研究肿瘤基因表达差异的工具。     

骨科工勤人员MRSA定值与mecA基因携带的危险因素研究

目的了解骨科工勤人员鼻腔耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)定值及耐药mec A基因携带情况,分析相关危险因素。方法选取本科护工、清洁人员及护送患者工人共60例,采集鼻试子,核酸扩增PCR(Polymerase Chain Reaction)技术进行NUC与mec A基因检测,对携带mec A基因的人员先进行单因素分析,然后逐步进行Logistic回归分析。结果工勤人员鼻腔MRSA定值2例(护工1例,患者运送1例),占3.3%;mec A基因检出8例,占13.3%,其中护工人员检出5例,检出率为12.2%;清洁人员1例,检出率为20.0%,患者运送人员2例,检出率为14.3%。Logistic回归分析筛选出mec A基因定值的独立危险因素为院感知晓率低、未严格手卫生、未严格个人防护。结论骨科工勤人员鼻腔存在MRSA定值,鼻腔mec A耐药基因检出率高,且存在独立危险因素,应加强工勤人员院感知识培训与管理。     

PCT、hs-CRP及TBA联合检测在慢性病毒性肝炎及肝肿瘤疾病中的临床意义

目的探讨血清降钙素原(PCT)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)及总胆汁酸(TBA)在慢性肝炎及肝肿瘤诊治中的意义。方法对100例慢性病毒性肝炎和92例肝肿瘤组患者及60例健康人(对照组)行血清PCT、hs-CRP、TBA检测。结果慢性病毒性肝炎组PCT、hs-CRP、TBA水平分别为(0.86±1.45)ng/mL、(8.25±8.32)mg/L、(51.56±64.34)μmol/L,肝肿瘤组PCT、hs-CRP、TBA水平分别为(1.01±2.17)ng/mL、(25.56±26.58)mg/L、(22.21±33.23)μmol/L,明显高于对照组(0.25±0.24)ng/mL、(3.17±2.42)mg/L、(3.17±2.42)μmol/L,差异具有统计学意义(P0.05)。结论血清PCT、hs-CRP及TBA联合检测对慢性病毒性肝炎及肝肿瘤的诊断及治疗具有一定的临床意义。     

反向斑点杂交-基因芯片检测人类乳头瘤病毒及分型

目的 检测人类乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)及其分型,了解其在女性宫颈中的感染情况与宫颈癌防治方面的意义.方法 采用反向斑点杂交-基因芯片检测220例不同年龄患者宫颈中HPV感染情况与分型情况,对比分析低危型与高危型HPV亚型感染率以及其与年龄的关系.结果 220例标本中HPV感染阳性...     

肺结核患者外周血miR-23a-3p的表达及其对患者诊断及预后评估的价值分析

目的:探究miR-23a-3p在肺结核(PTB)患者中的表达及其对PTB患者的诊断和预后的价值。方法:将2020年6月至2021年6月本院传染病科收治的98例PTB患者设为PTB组,同期另选取92例健康志愿者作为健康组。采用qRT-PCR法检测受试者外周血miR-23a-3p、核转录因子SP1(SP1)和干扰素调节因子1(IRF1)的表达;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-23a-3p对PTB的诊断价值和预后价值;采用Pearson相关系数分析PTB患者外周血miR-23a-3p与SP1、IPF1之间的相关性;对PTB患者完成6个月随访,采用Kaplan-Meier法分析miR-23a-3p与PTB患者预后关系;Cox回归分析影响PTB患者预后的危险因素。结果:与健康组相比,PTB组患者miR-23a-3p水平显著降低,SP1和IPF1表达显著升高(P<0.05);ROC曲线显示,外周血miR-23a-3p诊断PTB的曲线下面积(AUC)为0.861(95%CI:0.809～0.913),灵敏度和特异度分别为85.70%和70.70%;Pearson相关系数分析显示,P...     

hif-1α基因沉默对宫颈癌HeLa细胞增殖及对顺铂敏感度的影响

目的研究靶向干扰hif-1α基因表达后,对HeLa细胞增殖及其对顺铂敏感度的影响。方法构建针对hif-1α基因的干扰载体并转染HeLa细胞,G418筛选阳性克隆,经RT-PCR与Western blot鉴定抑制效果,用MTT法观察抑制hif 1α基因表达后,HeLa细胞增殖的变化,RT-PCR检测在低氧培养条件下HeLa/shRNA-i细胞葡萄糖转运蛋白1 mRNA的水平,利用MTT法观察抑制hif-1α表达后HeLa细胞对顺铂敏感性的改变。结果HeLa/shRNA-i细胞与对照细胞组相比,hif-1α基因mRNA表达降低了62%,蛋白表达明显降低,MTT显示细胞吸光度值降低,低氧条件下葡萄糖转运蛋白1 mRNA表达降低,对顺铂药物的敏感度增高,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论hif-1α基因的沉默可以抑制HeLa细胞的增殖并且能够增强HeLa细胞对顺铂的敏感度。     

高尔基体蛋白73与甲胎蛋白对肝癌诊断价值的研究

目的：探讨甲胎蛋白（AFP）与高尔基体蛋白73（GP73）对肝癌早期诊断的价值。方法采用酶联免疫法（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）对肝癌患者80例、肝硬化患者30例血清中AFP、GP73进行检测,30例健康体检者作为对照。结果①肝癌组、肝硬化组、正常对照组AFP平均浓度为64.5μg/L、50.1μg/L、21.9μg/L （肝癌组vs对照组P〈0.01,肝硬化组vs对照组P〈0.01,肝硬化组vs肝癌组P〈0.01）,肝癌组、肝硬化组、正常对照组GP73平均浓度为268.4μg/L、192.3μg/L、49.8μg/L （P〈0.01）。②AFP诊断肝癌的ROC曲线下面积为0.729,P=0.000,GP73诊断肝癌的ROC曲线下面积为0.892,P=0.000。AFP联合GP73对肝癌诊断的ROC曲线下面积为0.902。结论 GP73诊断肝癌的价值高于AFP,AFP＋GP73联合检测不能提高诊断效率。     

外周血Th17/CD4+CD25+CD127lowTreg细胞区分活动性肺结核和潜伏期结核合并肺炎

目的 研究外周血Th17/CD4⁺CD25⁺CD127^lowTreg以及特异性TB Ag(早期分泌型抗原靶标6,ESAT-6,培养滤液蛋白10,CEP-10)诱导γ干扰素释放试验(TB-IGRAs)区分活动性肺结核和潜伏期结核(LTBI)合并肺炎的诊断价值。方法 将2018年1月至2020年2月在内江市第二人民医院就诊并诊断为活动性肺结核患者41例为研究对象,48例初诊疑似结核患者(最后因诊断为肺炎,非结核感染肺炎),其中21例肺炎患者按照IGRAs阳性列为LTBI⁺肺炎组(LTBI合并肺炎),27例肺炎患者按照IGRAs阴性列为LTBI-肺炎组(非LTBI肺炎)。所有研究对象均接受IGRAs检查,流式细胞术检测外周血Th17/CD4⁺、Treg/CD4⁺比值,ROC曲线评价活动性肺结核和肺炎以及与LTBI⁺肺炎的诊断价值,并根据约登指数为最佳诊断点计算敏感度、特异度。结果 活动性肺结核外周血Th17/CD4⁺水...     

靶向CGI-100基因shRNA干扰载体的构建与鉴定

目的：构建靶向CGI-100基因的RNAi表达载体并鉴定其抑制效率。方法：设计及化学合成3对靶向CGI-100基因的短发夹结构寡核苷酸,经退火成双链DNA片段,将其与经限制性内切酶BamHI和州ndⅢ双酶切的PGenesil-1质粒连接,构建表达shRNA的重组质粒,用脂质体2000转染到K562细胞中进行表达,经RT-PCR和斑点杂交检测转染前后CGI-100基因表达的变化。结果：经DNA测序证实3对靶向CGI-100基因的RNA干扰表达载体PGenesil-1-CGI-100构建成功,其中第1对PGenesil-1-CGI-100在mRNA水平抑制白血病K562细胞中CGI-100基因表达的效率最高,达54％。结论：成功构建针对CGI-100基因的RNA干扰的表达载体,并筛选出1对抑制效率较高的重组干扰载体,为进一步研究K562细胞中CGI-100基因的功能奠定基础。     

针对IER3IP1基因的shRNA真核表达

目的:构建特异性针对IER3IP1基因的shRNA(Short Hairpin RNA)的真核表达载体,观察对IER3IP1基因表达的沉默作用,筛选出抑制效果较好的干扰片段.方法:针对IER3IP1基因,设计合成2对特异性DNA片段以及1对无关序列的阴性对照DNA片断,将它们插入真核表达载体pGenesil-1中构建重组质粒,质粒转染L02正常肝脏细胞株后,以半定量RT-PCR法检测转染后24、48、72 h IER3IP1基因的抑制效果.结果:成功构建2个特异性针对IER3IP1的shRNA真核表达载体;所构建的载体中有1对能够特异性的降低L02细胞中IER3IP1的mRNA表达水平,且干扰效果显著,抑制率较高,与空载对照组比在转染后24、48、72 h抑制率分别为64%、79%、69%.结论:设计构建的真核表达载体可以特异性干扰IER3IP1基因的表达,为进一步研究IER3IP1基因的功能奠定了基础.