人PD-L1真核表达载体的构建及结肠癌细胞稳定表达单克隆株的筛选和鉴定

目的:构建人程序性死亡配体1（PD-L1）重组质粒载体,筛选稳定高表达人PD-L1的结肠癌单克隆细胞株。方法:提取HCT116细胞总RNA,RT-PCR克隆PD-L1基因片段,将其重组至含有HA标签和Neo真核细胞筛选抗性的pcDNA3质粒载体上,转染HCT116细胞,倍比稀释8个细胞浓度至96孔板,G418筛选两周,挑取单细胞克隆,通过免疫印迹鉴定外源性PD-L1的表达;通过MTS、Transwell和软琼脂细胞克隆形成实验比较PD-L1低表达和高表达单克隆细胞株生长增殖、迁移和细胞克隆形成能力的差别;最后通过在两组细胞中过表达帽依赖性荧光素酶报告基因阐述造成上述表型的可能机制。结果:成功构建人PD-L1的真核表达载体,并筛选获得稳定高表达PD-L1的HCT116单克隆细胞株。功能研究初步证明PD-L1可促进细胞克隆形成能力、迁移和生长增殖。过表达PD-L1可使帽依赖性荧光素酶报告基因的表达上调约3~4倍,表明其机制部分为PD-L1可上调帽依赖性蛋白质翻译。结论:获得了PD-L1重组质粒载体及可用于后续功能研究的稳定高表达人PD-L1的HCT116单克隆细胞株。     

全自动免疫组化与手工染色标记胸腺瘤TdT表达的对比观察

目的:对比观察胸腺瘤TdT在全自动免疫组织化学染色技术(automatic immunohistochemical staining techniques,AIST)和手工染色方法（manual staining method,MSM）中表达的差异性。方法:收集2015年-2016年大坪医院胸腺瘤手术标本21例,经石蜡包埋、切片、染色,显微镜下观察胸腺瘤TdT在AIST和MSM表达的差异。AIST采用Ventana公司生产的BenchMark XT,二抗检测系统分别采用UltraView Universal DAB Detection kit (简称UV)和Optiview DAB IHC Detection kit (简称OV)。结果:手工染色TdT阳性表达定位准确,染色强度强,背景清晰;AIST中采用UV二抗检测系统TdT染色虽然阳性定位准确,但TdT染色强度偏弱,背景不清晰,两者比较具有显著性差异（P＜0.01）。优化染色方案后,改用OV二抗检测系统,TdT染色各项指标优于UV二抗检测系统,染色效果和手工相比,染色强度和阳性率一致。结论:任何抗体指标在行免疫组化前均需进行最适条件的摸索与优化,从而获得该抗体指标最佳的染色方案。     

Src蛋白在肝癌HepG2细胞增殖凋亡中作用的初步研究

目的研究Src蛋白在人肝癌细胞株HepG2细胞增殖凋亡过程中的作用。方法应用Src蛋白酪氨酸激酶抑制剂PP2不同浓度处理HepG2细胞前后,使用免疫组化、流式细胞术、MTT法检测Src蛋白的表达以及HepG2细胞增殖和凋亡情况。结果Src蛋白在HepG2细胞中高表达,用不同浓度PP2处理HepG2细胞后,能够显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖,增加凋亡。结论Src蛋白在人肝癌细胞株HepG2细胞的增殖凋亡过程中起着重要作用。     

细胞DNA定量分析检测在甲状腺癌冷冻组织中的应用研究

目的研究细胞DNA定量分析技术在甲状腺术中冷冻组织印片病理诊断中的准确性。方法收集术中快速冷冻诊断的甲状腺新鲜标本做细胞印片,采用Fealgon染色,用细胞DNA自动分析系统扫描并分析1284例甲状腺及甲状旁腺疾病标本,比较分析术中快速冷冻HE染色、DNA定量分析以及术后常规石蜡诊断3种方法。结果304例确诊为恶性或可疑恶性(即阳性)病例中,73例可见大量异倍体细胞,226例为可见中等量异倍体细胞,4例可见少量异倍体细胞,1例未见异倍体细胞。阴性或未见明显恶性病例中,878例DNA定量分析结果为未见异倍体细胞,61例可见中等量异倍体细胞,41例可见少量异倍体细胞。甲状腺冷冻诊断阳性率23.7%(304/1284),DNA定量分析诊断的阳性检出率28%(360/1284);术后常规石蜡诊断为恶性的315例,阳性率24.5%(315/1284)。DNA定量诊断和冷冻诊断与常规石蜡的一致率分别为95.3%、97.7%。结论甲状腺细胞DNA定量分析的诊断结果准确率高,三者结合,可提高甲状腺疾病的诊断准确率。     

不同脱钙液对牙齿牙周联合石蜡切片HE染色的影响

目的探讨不同脱钙液对牙齿牙周联合切片HE染色质量的影响。方法选用10%乙二胺四乙酸钠（EDTA）、复合酸（Plank-Rychlo脱钙液）和5%硝酸3种不同的脱钙液,分成A、B、C3组用于犬和大鼠牙齿牙周组织联合石蜡切片脱钙,通过记录脱钙时间,观察HE染色效果,评价室温下（20℃～28℃）不同脱钙液对切片制作的影响。结果A组脱钙液所制切片染色效果良好,但脱钙速度缓慢,所需时间较长;B组脱钙液脱钙速度快,所制切片染色好;C组脱钙液所制切片的染色强度和对比度均不如前两种脱钙液。结论在制作牙齿牙周联合切片时,EDTA脱钙液和Plank-Rychlo脱钙液所制切片均能取得良好的染色效果,但EDTA脱钙液脱钙周期过长;Plank-Rychlo脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合于临床速检工作;硝酸脱钙液组染色效果较差。     

参附注射液减轻Ⅲ/Ⅳ期非小细胞肺癌化疗的毒副反应及体会

目的:探讨参附注射液对DP(多西他赛+顺铂)化疗方案治疗Ⅲ/Ⅳ期非小细胞肺癌的减毒、生活质量及患者满意度的影响。方法:将78例Ⅲ/Ⅳ期非小细胞肺癌患者根据治疗情况分为实验组(参附注射液联合DP方案)39例和对照组(DP方案)39例。21d为一个周期,治疗2个周期后进行评价及调查。结果:两组毒副反应主要为骨髓抑制(以白细胞减少、血小板减少、贫血为主要表现)和胃肠道反应(以恶心/呕吐、便秘为主要表现)。实验组Ⅲ/Ⅳ度白细胞减少发生率低于对照组(0.00%VS 33.33%),差异有统计学意义(P<0.05);实验组Ⅲ/Ⅳ度血红蛋白减少发生率低于对照组(7.69%VS 15.38%),差异无统计学意义(P>0.05);胃肠道反应、血小板减少、肝肾功能异常等差异均无统计学意义。实验组的生活感受、健康感受、活动能力、日常生活能力、家庭支持评分均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组患者满意度优于对照组(92%VS 66%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:参附注射液联合DP方案对晚期非小细胞肺癌具有减轻毒副反应,可提高患者生活质量及满意度,值得临床推广应用。     

非小细胞肺癌患者血浆外泌体 A E1的表达与铂类化疗敏感性相关

目的 研究血浆外泌体脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(APE1)表达,以及外泌体APE1表达与非小细胞肺癌(NSCLC)铂类化疗敏感性的关系.方法 选取2017年1月至2019年6月于大坪医院就诊的ⅢB或Ⅳ期无驱动基因突变的NSCLC患者136例,对血浆外泌体APE1进行提取和鉴定.采用Western blot和ELISA检测外...     

ATRX在中枢神经细胞瘤中的表达模式及意义

目的探讨中枢神经细胞瘤地中海贫血伴精神发育迟滞综合征基因(ATRX)的表达模式。方法选择中枢神经细胞瘤19例、弥漫性星形细胞瘤IDH突变型(WHO Ⅱ级)20例和间变型弥漫性星形细胞瘤IDH突变型(WHO Ⅲ级)10例,采用免疫组化染色法检测ATRX蛋白表达,观察ATRX在中枢神经细胞瘤的表达模式。结果 ATRX在中枢神经细胞瘤细胞核中呈弥漫阳性,表达率为100%(19/19);ATRX在弥漫性星形细胞瘤IDH突变型和间变型弥漫性星形细胞瘤IDH突变型的病例中阴性,失表达率分别为80%(16/20)和60%(6/10);ATRX失表达率在中枢神经细胞瘤与星形细胞瘤中的差异显著(P0.001)。结论 ATRX在中枢神经细胞瘤中的表达无缺失,在星形细胞瘤与中枢神经细胞瘤鉴别中有一定的意义。     

应用优化的全自动免疫组化染色方案检测错配修复蛋白MLH1、PMS2在结直肠癌组织中的表达

目的:通过优化的全自动免疫组化检测方案提高MLH1和PMS2蛋白免疫组化检测的稳定性。方法:收集2018年至2019年大坪医院结直肠癌手术标本20例,经石蜡包埋、切片、染色,显微镜下观察错配修复蛋白表达的差异。采用Ventana公司生产的BenchMark Ultra,二抗检测系统分别采用UltraView Universal DAB Detection kit(简称UV)、Optiview DAB IHC Detection kit(简称OV)和扩增试剂盒。结果:BenchMark Ultra染色机采用UV二抗检测系统错配修复蛋白的表达强度偏弱,背景不清晰,PMS2的表达可能会出现假阴性。优化染色方案后,改用OV二抗检测系统,MLH1和PMS2（PMS2需用扩增试剂盒）染色各项指标优于UV二抗检测系统,染色效果和手工相比,染色强度和阳性率比手工略好。结论:MLH1、PMS2等抗体指标在应用全自动免疫组化染色机染色前均需进行最适条件的摸索与优化,从而获得该抗体指标最佳的染色方案。     

不同分子分型胶质母细胞瘤中NTSR1的表达及意义

目的 探讨胶质母细胞瘤(glioblastoma,GBM)的分子分型特征、NTSR1的表达及其对预后的影响.方法 收集138例GBM的临床病理资料,采用免疫组化EnVision两步法检测NTSR1、IDH1、ATRX、p53、EGFR、PTEN、CD44、CHI3L1、vimentin表达.根据IDH1、EGFR、PT...