六君子汤干预4NQO诱导食管癌模型小鼠的血清代谢组学研究

基于血清代谢组学探讨六君子汤治疗4-硝基喹啉-N-氧化物(4-nitroquinoline-N-oxide, 4NQO)诱导食管癌模型小鼠的作用机制。选取35～45日龄小鼠100只,随机分为空白组、模型组、六君子汤低浓度组、六君子汤中浓度组、六君子汤高浓度组。除空白组外,其余小鼠自由饮用100μg·mL^-1的4NQO溶液16周,构建食管癌小鼠模型。六君子汤低、中、高浓度组分别用药物质量分数为18.2、36.4、54.6 g·kg^-1的定制饲料喂养,称量各组小鼠体质量和脏器质量计算脏器指数;采用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察各组小鼠食管组织病理改变;超高效液相色谱-串联质谱(ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry, UPLC-MS/MS)进行小鼠血清样本的代谢物采集,筛选潜在生物标志物及分析相关代谢通路。结果显示,模型组小鼠脾脏、胃脏器指数明显降低,肺、食管、肾的脏器指数明显升高,与模型组相比,六君子汤各浓度脏器指数无明显变化;HE结...     

启膈散乙酸乙酯部位提取物通过抑制TGF-β1信号通路干预食管癌细胞的迁移和侵袭

目的：探讨启膈散(QGS)对食管癌细胞TE-1迁移和侵袭能力的影响机制。方法：利用基因芯片技术筛选正常组和启膈散组差异表达基因,分析差异基因的本体功能和信号通路。噻唑蓝(MTT)比色法检测QGS对TE-1细胞活性的影响。后续验证实验分为空白组、转化生长因子-β₁(TGF-β₁)组、TGF-β₁+QGS组、TGF-β₁+SB431542组。显微镜观察各实验组细胞形态,细胞划痕实验检测各组细胞的迁移和侵袭能力,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组细胞E-钙黏蛋白(E-Cadherin)、波形纤维蛋白(Vimentin)、果蝇母本抗生存因子2(Smad2)和果蝇母本抗生存因子7(Smad7) m RNA的表达水平。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组细胞E-Cadherin、Vimentin、p-Smad2/3、Smad2/3和Smad7蛋白的表达。结果：QGS组与空白组之间有1 487个差异基因,其中1 080个下调,407个上调,下调基因占差异基因的72.63...     

基于AKT/mTOR通路探讨六君子汤抑制EC9706生长的作用机制

目的：探讨六君子汤对食管癌细胞EC9706的生长抑制作用机制。方法：噻唑蓝(MTT)法检测六君子汤对EC9706细胞的活性抑制作用,流式细胞术检测各组细胞凋亡和周期分布,Seahorse能量代谢分析系统检测细胞糖酵解速率和线粒体压力,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和蛋白激酶B1(AKT1)mRNA相对表达,Western Blot检测各组细胞磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、mTOR和AKT1/2/3蛋白相对表达。结果：六君子汤浓度为200、300、400μg/mL时可显著抑制EC9706细胞活性(P<0.01)。选定六君子汤150、200μg/mL用于后续实验。流式细胞术结果表明,六君子汤可显著促进EC9706细胞凋亡(P<0.01),六君子汤200μg/mL可显著延长细胞S期,缩短G₂/M期(P<0.05);糖酵解速率检测结果显示,六君子汤200μg/mL可显著抑制EC9706细胞的基础糖酵解、补偿糖酵解和糖酵解潜能(P<0.05);线粒体压力测试结果显示,六君子汤150μ...     

常山水提醇沉物对EC9706细胞周期、凋亡、能量代谢的影响

目的从细胞增殖、凋亡、细胞周期、能量代谢角度,研究常山水提醇沉物抗食管癌细胞EC9706的作用及机制。方法用MTT法检测EC9706细胞活性,流式细胞术检测药物对食管癌EC9706细胞凋亡、周期的影响,能量代谢检测系统检测药物对EC9706细胞能量代谢的影响。结果不同浓度常山水提醇沉物作用48 h后能有效抑制EC9706细胞增殖,呈剂量依赖性(P<0.01),可以有效促进细胞凋亡(P<0.05),将EC9706细胞阻滞于S期和G2/M期(P<0.05),并且明显抑制细胞糖酵解及线粒体代谢能力(P<0.01)。结论以上结果表明,常山水提醇沉物可能通过干预细胞周期、凋亡及能量代谢抑制食管癌EC9706细胞增殖。     

基于AMPK/mTOR信号通路研究异常山碱对EC9706细胞能量代谢的调控机制

目的通过观察异常山碱对食管癌EC9706细胞的增殖、凋亡、周期、能量代谢及能量代谢通路相关蛋白表达的影响,探讨其治疗食管癌的分子机制。方法常规培养ECC9706细胞,用MTT法检测细胞活性,筛选药物浓度,选择1、2μg/mL 2个质量浓度;流式细胞术检测异常山碱对EC9706细胞凋亡、周期的影响,能量代谢检测系统检测异常山碱对EC9706细胞能量代谢的影响,Westernblotting检测细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(p-ACC)、腺苷磷酸激活蛋白激酶(AMPK)蛋白表达。结果不同质量浓度异常山碱作用48h后能有效抑制EC9706细胞增殖,呈剂量依赖性(P0.01),可以将EC9706细胞阻滞于S期和G_2/M期(P0.05),有效促进细胞凋亡(P0.05),且明显抑制细胞糖酵解及线粒体代谢能力(P0.01),与对照组比较,异常山碱组细胞AMPK蛋白表达水平上升,mTOR、p-mTOR、p-ACC蛋白表达水平降低(P0.05)。结论异常山碱可能通过能量代谢调节EC9706细胞周期、凋亡,抑制EC9706细胞增殖。     

心包-三焦-膜系统初探

通过对三焦、心包理论的再梳理,发现三焦作为六腑之一,具有一定的形质结构和特定的生理功能,认为三焦应当是位于体腔内部由膜围成的独立存在的潜在腔隙。对心包-三焦-膜系统进行理论梳理,提出心包主膜,心包与三焦的表里关系通过膜和经络系统来实现功能上的互相联通,病理上的相互影响,由此指导临床实践。并阐述心包-三焦-膜系统相关疾病的治法与方药。     

基于本草类文献整理探讨调理三焦中药的功能属性特点

目的：通过对本草类文献整理归纳分析,探讨调理三焦中药的性味、归经及功能属性特点,为临床治疗三焦疾病遣方用药提供理论参考。方法：以“三焦”为关键词,检索中华医典数据库本草类中关于三焦的中药,筛选明确记载具有调节三焦功效的中药,采用Excel表格对纳入文献数据进行频数分析,统计各味中药出现的频数,并对其调节三焦功能、记载年代、功效、性味、归经进行频数分析,初步归纳出具有调节三焦功能中药的特点。结果：共筛选出91味中药。其中,通行三焦之气的中药材共31味;通调三焦水道功能的中药共10味;清三焦之火的中药有28味;具有补三焦功效的中药共19味,包括补气药、补阴药、补阳药、安神药、固精缩尿药以及清热药;治疗三焦血病的中药3味,为硇砂、凌霄花、忍冬藤。记载调理三焦中药的文献以明清时期居多。从四气来看,治疗三焦病的中药药性以温性、寒性药为主。从五味来看,药味频次较高的分别是甘、苦、辛。从归经角度看,治疗三焦中药以肺、脾、肾、胃、肝、心经居多。调节三焦功能主要包括畅达三焦之气、清三焦火(热)、补三焦、通利三焦水道、治疗三焦血病。结论：以三焦为依据治疗疾病的文献以明清为主,调理三焦的中药在四气、五味、归...     

三焦形质评议※

“三焦”一词最早见于《黄帝内经》《难经》,但其中对三焦的描述较模糊,定位、功能也说法各异。本文就近年来各个医家对三焦的理解和描述进行梳理总结,包括三焦的有形无形、三焦实质、结合西方医学对三焦的解读等。在总结的基础上,对三焦的形质进行评议,从中国古代哲学角度、文字角度、中医学角度到中西医结合、西医学角度等提出了新的见解,以期为三焦理论的临床应用提供新的思路和方法。     

基于PPARγ信号通路探讨淫羊藿苷改善香烟烟雾提取物干预下肺泡巨噬细胞胞葬功能障碍的作用机制

目的：探讨淫羊藿苷基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)信号通路改善香烟烟雾提取物(CSE)诱导下肺泡巨噬细胞胞葬功能障碍及炎症反应的作用机制。方法：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383分为空白组、10%香烟烟雾提取物干预后分为模型组、淫羊藿苷低、中、高浓度组(10、20、40μmol·L^-1)、PPARγ抑制剂组、PPARγ抑制剂联合淫羊藿苷低、中、高浓度组。Alamar Blue法检测淫羊藿苷对NR8383细胞增殖及抑制作用；流式细胞术检测NR8383细胞胞葬功能；酶联免疫吸附测定法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、乳脂球表皮生长因子8(MFG-E8)含量；蛋白免疫印迹法检测PPARγ、CD36、Ras相关C3肉毒菌毒素底物1(Rac1)蛋白的表达；实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测PPARγ、CD36、Rac1 mRNA的表达。结果：香烟烟雾提取物建立NR8383细胞胞葬功能障碍模型，与空白组比较，模型组胞葬率降低(P<0.05),TNF-α表达明显升高(P<0.05),TGF-β1...