心阳片通过抑制心肌细胞自噬改善心力衰竭小鼠心功能的作用研究

目的探讨心阳片调节心肌细胞自噬改善心力衰竭(Heart failure,HF)小鼠心功能的作用机制。方法将48只雄性C57BL/6J小鼠随机分为假手术组,模型组,心阳片低、中、高剂量组(455、910、1820 mg·kg^-1)及3-甲基腺嘌呤组(15 mg·kg^-1,腹腔注射给药),每组8只;采用主动脉弓缩窄术复制HF小鼠模型;按上述剂量灌胃给药,灌胃体积为8 mL·kg^-1,每天给药1次,连续4周。采用心脏彩超检测各组小鼠心功能:小鼠左心室射血分数(LVEF)及左室短轴缩短率(LVFS);采用q PCR法检测小鼠心脏组织HF生物标记物B型钠尿肽(BNP)mRNA的表达;采用Western Blot法检测小鼠心肌细胞自噬相关蛋白Beclin-1及LC3BⅡ/Ⅰ的表达。结果与假手术组比较,模型组小鼠的LVEF、LVFS显著降低(P<0.05),BNP mRNA及Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达明显上调(P<0.05)。与模型组比较,心阳片低、中、高剂量组及3-甲基腺嘌呤组小鼠的LVEF、LVFS显著升高(P<0.05),BNP mRNA及Beclin-1、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论心阳片可能通过抑制心肌细胞过度自噬改善HF小鼠的心功能。     

人多发性骨髓瘤裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的:探索人多发性骨髓瘤裸鼠皮下移植瘤模型建立的方法。方法:Balb/c裸鼠进行3GyX线照射预处理后24h,于其皮下接种2×107人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226,每2~3d观察裸鼠体重的变化、肿瘤生长的情况、裸鼠的生存时间等,待裸鼠濒死或死亡,或者超过观察时间仍未死亡时,处死裸鼠,取其皮下结节及器官进行病理检测,同时摘眼球取血行血清免疫固定电泳检测。结果:荷瘤裸鼠出现皮下结节的高峰为荷瘤后第2~3周,结节体积基本达到高峰为荷瘤后第5~6周;裸鼠死亡高峰出现在荷瘤后第7周,荷瘤小鼠中位生存时间为荷瘤后52d;裸鼠处死后血清中未检测到人源单克隆免疫球蛋白;皮下结节HE染色证实瘤组织为浆细胞来源,器官HE染色显示肝脏部分炎性损伤。结论:采用RPMI8226人骨髓瘤细胞于Balb/c裸鼠皮下接种(接种细胞数为2×107个细胞)造模的方法,具有操作过程较简单、技术要求低,观察肿瘤生长较为直观等优点;同时采用X线照射预处理的方法可降低裸鼠免疫力,明显提高模型的成瘤率;人多发性骨髓瘤细胞RPMI8226皮下接种于裸鼠,肿瘤生长过程中很难有人源单克隆免疫球蛋白分泌入血;荷瘤裸鼠出现肝脏的损伤,也许可作为今后抗肿瘤药物疗效研究的指标之一。     

暖心康抑制内皮间充质转化减轻阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征合并动脉粥样硬化小鼠斑块形成

目的 探讨暖心康（毛冬青、红参）通过抑制内皮间充质转化 （EndMT） 减轻阻塞性睡眠呼吸暂停低通气 综合征 （OSAHS） 合并动脉粥样硬化 （AS） 小鼠斑块形成的作用及机制。方法 将雄性 ApoE-/- 小鼠随机分为 6 组： 对照组、模型组、阿托伐他汀组 （2.6 mg·kg-1 ） 以及暖心康低、中、高剂量组 （生药量 3.5、7.0、14.0 g·kg-1 ） ,每 组 8 只。采用将小鼠长期在睡眠期间暴露于慢性间歇性缺氧 （CIH） 环境,联合高脂饲料喂养,复制 OSAHS 合 并 AS 小鼠模型。采用油红 O 染色法观察小鼠主动脉内壁斑块形成情况;Masson 三色染色法评估小鼠主动脉根 部粥样斑块的胶原含量;免疫荧光法检测主动脉斑块中内皮细胞标志物 CD31 及 EndMT 标志物 Vimentin 的表 达情况;ELISA 法测定血脂水平;qPCR 法检测主动脉组织中 EndMT 标志物 α-SMA、Cdh2 mRNA 表达水平。 结果 与对照组比较,模型组小鼠的主动脉粥样斑块面积显著增加 （P＜0.01） ,主动脉根部斑块胶原沉积面积 显著增加 （P＜0.01） ;斑块处 CD31 阳性表达细胞数量显著减少 （P＜0.01） ,Vimentin 阳性表达细胞数量显著增 多 （P＜0.01） ;血清甘油三酯 （TG） 、总胆固醇 （T-CHO） 、低密度脂蛋白胆固醇 （LDL-C） 水平显著升高 （P＜ 0.01） ,高密度脂蛋白胆固醇 （HDL-C） 水平显著降低 （P＜0.01） ;主动脉组织中 α-SMA、Cdh2 mRNA 表达水平 显著升高 （P＜0.01） 。与模型组比较,暖心康各给药组的主动脉粥样斑块面积均显著减少 （P＜0.05,P＜0.01） , 主动脉根部粥样斑块的胶原沉积面积均明显缩小 （P＜0.05,P＜0.01） ;暖心康高剂量组小鼠斑块处 CD31 阳性 表达细胞数量明显增加 （P＜0.05） ,暖心康中、高剂量组小鼠斑块处 Vimentin 阳性表达细胞数量明显减少 （P＜ 0.05,P＜0.01） ;暖心康高剂量组小鼠的血清 TG 水平显著降低 （P＜0.01） ,暖心康各给药组小鼠的血清 T-CHO、 LDL-C 水平显著降低 （P＜0.05,P＜0.01） ,暖心康中、高剂量组小鼠的血清 HDL-C 水平显著升高 （P＜0.01） ; 暖心康各给药组小鼠主动脉组织中 α-SMA、Cdh2 mRNA 表达水平显著降低 （P＜0.01） 。结论 暖心康可以有效 减轻 OSAHS 合并动脉粥样硬化小鼠的斑块形成,可能与其抑制 EndMT,减少胶原纤维形成有关。     

心阳片通过调节RAGE 介导的自噬改善心力衰竭小鼠心功能的作用研究

目的探讨心阳片通过调节晚期糖基化终产物受体（RAGE）介导的自噬改善心力衰竭小鼠心功能的作 用。方法将60 只C57BL/6J 小鼠随机分为6 组,分别为假手术组、模型组、3-甲基腺嘌呤组（自噬抑制剂, 15 mg·kg-1）以及心阳片低、中、高剂量组（455、910、1 820 mg·kg-1）,每组10 只;另将10 只经基因型鉴定确 认为RAGE-/-的小鼠作为RAGE 敲除组。采用主动脉弓缩窄术（TAC）建立压力负荷性心力衰竭小鼠模型。模型 复制成功后,按上述剂量对心阳片各剂量组小鼠进行灌胃给药,3-甲基腺嘌呤组进行腹腔注射给药,其余组 别灌胃等容积生理盐水,每天给药1 次,连续4 周。采用心脏彩超检测各组小鼠心功能,采集小鼠左室射血分 数（LVEF）及左室短轴缩短率（LVFS）;使用Masson 染色观察小鼠心肌组织纤维化程度;采用蛋白免疫印迹法 （Western Blot）检测小鼠心脏左室心肌组织中的RAGE 蛋白及自噬相关蛋白Beclin-1、LC3BII/I 的表达情况。 结果与假手术组比较,模型组小鼠的LVEF 及LVFS 明显降低（P＜0.05）,心肌纤维化面积明显增加（P＜ 0.05）,RAGE 蛋白及自噬相关蛋白Beclin-1、LC3BII/I 的表达明显上调（P＜0.05）;与模型组比较,RAGE 敲除 组、3-甲基腺嘌呤组及心阳片低、中、高剂量组小鼠的LVEF 和LVFS 明显升高（P＜0.05）,心肌纤维化面积 明显减少（P＜0.05）,RAGE、Beclin-1、LC3BII/I 蛋白表达明显下调（P＜0.05）。结论心阳片可能通过调节 RAGE 介导的自噬,从而改善心力衰竭小鼠的心功能。     

尿酸性肾病大鼠模型的建立

目的：考察4种不同的方法,建立稳定的尿酸性肾病（uAN）大鼠模型。方法：50只雄性SD大鼠随机分成5组,正常对照组实验过程中正常饲养;模型I、Ⅱ、Ⅲ组给予10％高酵母饲料喂养,同时分别给予腺嘌呤每日50mg／kg、100mg／kg、200mg／kg灌胃;模型Ⅳ组按腺嘌呤100mg／kg、乙胺丁醇250mg／kg的比例,配置成混悬液每日350mg／kg灌胃,连续给药2ld,制造UAN模型。实验前、实验第10天、第21天大鼠测定血清uA、BUN、CR水平;HE染色观察肾脏组织病理变化;免疫组化法观察。肾脏组织尿酸盐阴离子交换器1（uRAT1）、有机阴离子转运子1（OAT1）、有机阳离子转运体2（OCT2）的表达。结果：模型I组uA、BUN、CR水平较正常组轻微升高（P〉0．05）;模型Ⅱ组UA、BUN、CR水平在第10天、第21天较正常组升高（P〈0．05）;模型Ⅲ、Ⅳ组仅在第10天uA水平较正常组升高（P〈0．05）;BUN、CR水平在第10天、第21天,较正常组升高明显（P〈0．05）。HE染色病理切片结果提示：各模型组肾小管和间质均有不同程度的损伤,模型Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肾组织内可见黄褐色结晶,其中模型Ⅲ、Ⅳ组肾组织存在广泛性损害。免疫组化法观察肾组织蛋白表达情况：模型Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组URAT1蛋白表达较正常组上调（P〈0．05,P〈0．01）;同时,OAT1、OCT2蛋白表达较正常组下调（P〈0．05,P〈0．01）。结论：采用酵母和腺嘌呤适合剂量联合用药,可建立稳定的UAN大鼠模型。