铜胁迫对茅苍术3种药效成分积累及其生物合成2种关键酶基因表达的影响

目的研究铜胁迫对茅苍术药效成分β-桉叶醇、苍术酮和苍术素积累及其生物合成关键酶3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR)、法呢基焦磷酸合酶(FPPS)基因表达的影响。方法在铜胁迫下,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定茅苍术HMGR、FPPS的表达量;采用高效液相色谱法测定茅苍术3种药效成分的含量;采用SPSS软件对两者进行相关性分析,DPS软件进行灰色关联度分析。结果当铜胁迫在100 mg/kg以内时,茅苍术根茎内FPPS表达量与苍术酮含量略有增加;但铜浓度继续增加时,HMGR、FPPS表达量与3种药效成分含量呈不同程度的下降趋势。铜胁迫下HMGR、FPPS的表达量与β-桉叶醇、苍术酮和苍术素的含量呈显著正相关(P0.05)。灰色关联度分析发现铜胁迫下茅苍术根茎中β-桉叶醇、苍术酮的含量与HMGR、FPPS的表达量关联较大,FPPS基因的表达对β-桉叶醇和苍术酮合成贡献较大,但苍术素含量与这2种关键酶基因的表达关联度较小。结论阐明了铜胁迫下茅苍术2种关键酶基因表达量与3种药效成分含量的变化规律,揭示了铜胁迫下茅苍术药效成分β-桉叶醇、苍术酮与萜类生物合成关键酶HMGR、FPPS的关系,有助于进一步深入研究铜胁迫下茅苍术药效成分合成的分子调控机制,为提高茅苍术药材的品质提供理论基础。     

建泽泻鲨烯合酶原核表达、功能验证及其免疫检测研究

泽泻鲨烯合酶(Ao SS)催化法呢基焦磷酸[(farnesyl diphosphate,FPP)]合成鲨烯,是碳源流向原萜烷型三萜生物合成的关键调节酶。为深入研究Ao SS基因的功能及表达,课题组将前期克隆获得的建泽泻鲨烯合酶基因(accession No.JX866770)的开放阅读框(ORF)构建到原核表达载体p Czn1上,并在大肠杆菌BL21(Roseta)中进行诱导表达,诱导表达出的融合蛋白主要以包涵体的形式存在,经纯化获得高纯度的目的蛋白;以此目的蛋白进行体外酶促反应验证其功能,其结果显示该目的蛋白具有催化法呢基焦磷酸生成鲨烯的活性;为进一步研究其表达规律,在此基础上,利用该蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体并纯化,ELISA检测抗体效价大于1∶51 200,Western blotting检测表明其具有较好的特异性;用制备得到的抗体免疫检测建泽泻Ao SS在不同组织中的表达情况,结果显示建泽泻块茎中Ao SS表达最高,其次为叶,根中表达甚微。原核表达载体的成功构建、基因功能的进一步验证及快速免疫检测方法的建立,为进一步开展Ao SS基因功能及其调控的研究奠定基础,为泽泻资源性成分原萜烷型三萜的合成生物学应用提供科学依据。     

常见易混淆根及根茎类中药饮片的鉴别

2015版《中国药典》共记录植物类中药529种,其中根及根茎类中药152种(28.7％).多数基层医院对中药饮片的鉴别基本依靠传统的经验鉴别方法,给中药饮片的鉴定工作带来一定的困难.中药饮片小包装调配已成为必然趋势,中药师对已进行单独包装的中药饮片调配时,无法利用传统的中药饮片鉴别方法及工作经验(触摸、鼻嗅、口尝等),...     

不同产地金银花及其掺杂叶中活性成分比较研究

目的?比较研究三大产地5个品种金银花及其掺杂叶活性成分含量及指纹图谱相似度,为其优质优价采购以及资源综合利用提供参考。方法?采集山东大毛花、鸡爪花和四季花、河南豫封一号和河北巨花一号不同茬次的金银花,分离其掺杂叶,测定并比较92份样品中活性成分的含量和HPLC指纹图谱相似度。结果?5个品种金银花活性成分含量均随采收时间呈先降后升趋势,头茬花含量最高,二茬花含量最低;绿原酸含量头茬花大毛花最高,四茬花巨花一号最高,木犀草苷含量不同品种间未体现差异;不同品种金银花HPLC指纹图谱相似度在0.9以上,豫封一号与其它品种相似度相对较低;掺杂叶的绿原酸和木犀草苷含量均高于金银花,HPLC指纹图谱与金银花相似度为0.815~0.892。结论?头茬花和四茬花品质较高,头茬花以大毛花质量为优,四茬花以巨花一号质量较佳;掺杂叶不能与金银花混用,但其活性成分含量高于金银花。本研究为金银花品质评价和掺杂叶的开发利用提供了科学依据。      

以思维导图为主导的医院中药教学模式探索

为探讨医院中药教学中以思维导图为主导结合多元化教学模式的应用价值,本研究选取2022年8月至2023年8月在嘉兴市中医医院中药房轮转学习的63名中医类规培生作为研究对象。按授课方式的差异将学生分为对照组（n=32）和观察组（n=31）。对照组实施常规教学法,观察组实施思维导图为主导的多元化教学模式。学习结束后分别对两组学生进行理论知识考核和实践综合能力评价,对比两种教学方法的效果。结果发现观察组学生的平均出科理论成绩为（90.32±5.40）分,实践成绩为（87.06±9.26）分,显著高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。本研究显示基于思维导图为主导的多元化教学模式可提高中药临床教学效果,可更好地提升医学生的理论知识与实践技能,为中医药学相关课程的学习提供借鉴。     

濒危药用植物茅苍术法呢基焦磷酸合酶基因克隆及其表达分析

目的克隆茅苍术Atractylodes lancea倍半萜类成分生物合成关键酶法呢基焦磷酸合酶(FPPS)基因全长并分析其表达规律。方法以茅苍术总RNA为模板,运用同源克隆法和RACE技术克隆茅苍术FPPS基因(Al FPPS)的c DNA全长,并进行生物信息学分析;用q RT-PCR和GC-MS分析不同生长阶段FPPS在茅苍术根茎中的表达及倍半萜类成分量变化,并分析二者的相关性。结果获得Al FPPS基因全长c DNA为1 320 bp(Gen Bank accession no.KX443242),含一个长1 029 bp的开放阅读框,编码342个氨基酸,包含5个保守功能域,其中2个富含天冬氨酸(DXXDD)。q RT-PCR及GC-MS结果显示不同时期茅苍术Al FPPS基因表达量与倍半萜类成分量呈显著正相关。结论首次克隆获得Al FPPS基因的全长c DNA,初步证明Al FPPS基因是茅苍术倍半萜类成分生物合成途径中的重要调控位点,为茅苍术倍半萜类成分生物合成途径阐明与生物工程应用提供科学依据。