PPARγ促进miR-16表达抑制脓毒症炎症反应的作用研究

目的 探讨PPARγ上调miR-16的机制及其抑制脓毒症炎症反应的作用.方法 经Real time RT-PCR检测脓毒症患者和健康者的外周血单核细胞PPARγ和miR-16的表达,分析其相关性;分别用PPARγ激动剂RGZ、PPAR γsiRNA或miR-16抑制剂(antagomir-16)处理THP-1和RAW246.7,经real time RT-PCR和Western blot检测miR-16及其靶基因IKKα的表达;细胞转染含miR-16启动子的报告基因质粒,经PPARγ激动剂RGZ或拮抗剂GW9662处理后,检测细胞报告基因活性;细胞经PPAR γ激动剂RGZ处理,再经LPS处理,ELISA检测炎症因子TNFα和IL-6的表达;LPS诱导的脓毒症小鼠经PPAR γ激动剂RGZ,或经antagomir-16预处理后,再经PPARγ激动剂RGZ处理小鼠,real time RT-PCR检测小鼠外周血单核细胞中miR-16的表达,ELISA检测血清炎症因子TNFα和IL-6的表达.结果 脓毒症患者外周血单核细胞中PPARγ与miR-16的表达均降低且二者的表达呈显著负相关(P＜0.05);PPARγ通过促进miR-16的启动子活性上调miR-16的表达,进而抑制miR-16靶分子IKKα的表达(P＜0.05);PPAR γ上调miR-16后显著抑制炎症细胞产生TNFα和IL-6(P＜0.05);PPARγ上调miR-16抑制脓毒症小鼠血清TNFα和IL-6的表达(P＜0.05).结论 激动剂活化的PPARγ上调miR-16进而抑制细胞炎症因子表达及脓毒症小鼠炎症反应.     

盐酸氨溴索联合布地奈德对致敏大鼠气道炎症及肺部氧化应激的影响

目的研究盐酸氨溴索与布地奈德对致敏大鼠气道炎性反应及肺部氧化应激水平的影响。方法将40只健康清洁级SD雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组和实验组,每组各10只。除空白对照组外,其余各组大鼠均以卵白蛋白致敏,构建大鼠哮喘模型。模型组分别于第1,8天腹腔注射10%卵白蛋白1 mL,第15天后雾化吸入1%卵白蛋白,每天1次,每次0.5 h,至大鼠出现腹肌收缩、点头等;阳性对照组每次雾化前1 h雾化吸入0.02%布地奈德30 min;实验组在阳性对照组的基础上,吸入布地奈德前25 min腹腔注射盐酸氨溴索60 mg·kg^-1。各组均干预10周。用细胞计数法检测各组大鼠肺泡灌洗液中淋巴细胞及嗜酸性粒细胞比例;用苏木精-伊红(HE)染色法观察各组大鼠气道组织病理学变化;用比色法检测各组肺组织中氧化应激指标水平。结果空白对照组、模型组、阳性对照组及实验组的嗜酸性粒细胞比例分别为(1.29±0.41)%,(81.44±5.15)%,(37.51±5.38)%,(20.14±4.65)%,淋巴细胞比例分别为(4.01±0.87)%,(17.38±2.99)%,(11.59±2.01)%,(7.96±1.43)%,实验组与模型组及阳性对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。HE染色显示,模型组病理变化最为明显,阳性对照组次之。空白对照组、模型组、阳性对照组及实验组大鼠肺组织中谷胱甘肽(GSH)水平分别为(1.54±0.15),(0.53±0.18),(0.79±0.09),(1.15±0.11)μmol·L^-1;活性氧(ROS)水平分别为(1643±163),(4986±195),(3619±184),(2348±171)U·mg^-1pro。实验组GSH、ROS与阳性对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论盐酸氨溴索与布地奈德联合可有效减轻致敏大鼠气道炎性反应及肺组织氧化应激损伤,可有效治疗哮喘急性发作。     

白细胞介素6通过抑制自噬促进人脐静脉内皮细胞凋亡

目的：探讨IL-6对血管内皮细胞自噬和凋亡的影响以及自噬与凋亡的相互作用关系。方法：采用不同浓度IL-6诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs),Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖与活性,流式细胞术检测细胞凋亡变化,单丹(磺)酰戊二胺(MDC)染色观察细胞嗜酸性自噬泡情况,透射电镜观察细胞超微结构的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白激活型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase3)以及自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)和(sequestosome 1, SQSTM1)/P62表达水平。进一步采用IL-6分别联合自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamycin,RP)诱导自噬或3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)抑制自噬,观察自噬对IL-6诱导血管内皮细胞凋亡的影响。结果：1. 与对照组相比,IL-6可以呈浓度依赖性降低血管内皮细胞的活性(P＜0.05),增加血管内皮细胞的凋亡(P＜0.05)和Cleaved-caspase3的表达(P＜0.05);2. IL-6浓度依赖性降低血管内皮细胞内LC3-II/LC3-I的表达(P＜0.05)而增加P62的表达(P＜0.05),在IL-6刺激下,MDC 染色观察可见血管内皮细胞内自噬泡逐渐减少(P＜0.05),荧光强度明显减弱,透射电镜下表现为自噬小体明显减少;3. 采用自噬抑制剂3-MA刺激血管内皮细胞,发现3-MA可以进一步抑制IL-6刺激下的血管内皮细胞的自噬水平而增加凋亡水平,表现为LC3-II/LC3-I的表达进一步下降(P＜0.05)和P62的表达进一步增加(P＜0.05),血管内皮细胞内的自噬泡和自噬小体数量明显减少(P＜0.05),并且3-MA可以进一步增加IL-6刺激下血管内皮细胞的凋亡(P＜0.05)和Cleaved-caspase3的表达(P＜0.05);4. 进一步采用自噬促进剂RP刺激血管内皮细胞,发现RP可以改善IL-6刺激下的血管内皮细胞的自噬水平而降低凋亡水平,表现为LC3-II/LC3-I的表达升高(P＜0.05)和P62的表达下降(P＜0.05),血管内皮细胞内的自噬泡和自噬小体数量的增多(P＜0.05),并且RP可以明显减少IL-6刺激下血管内皮细胞的凋亡(P＜0.05)和Cleaved-caspase3的表达(P＜0.05)。结论：白介素-6可通过抑制自噬而增加血管内皮细胞凋亡。     

重症多重耐药菌感染中西医诊疗专家共识

<正>抗菌药物自问世以来，对人类战胜感染性疾病作出了重大贡献，但随着抗菌药物在临床广泛的不合理的使用、免疫抑制剂的应用以及各种侵入性操作的开展，多重耐药菌(MDRO)感染已成为抗感染治疗的主要难题之一，严重威胁人类健康^[1-2]。且由于MDRO感染缺乏有效的抗菌药物，严重影响了患者的生存率，