基于PI3K/AKT信号通路探讨琥珀散对子宫内膜异位症小鼠的影响及作用机制研究

目的 探讨琥珀散干预磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidy linositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)信号通路对子宫内膜异位症发生发展的影响及机制。方法 选用BALB/c小鼠,随机分为正常组、疾病模型组、琥珀散组、西药组,每组10只。造模后琥珀散组按成人临床用药量等效量的2倍给予14.3 g/kg灌胃,连续给药4周;西药组将LY294002溶于二甲基亚砜后腹腔注射,以0.04 g/kg进行计算,每周腹腔注射一次,给药4周;正常组、疾病模型组给予相同体积的生理盐水灌胃,连续给药4周。给药结束后,采用ELISA法检测各组小鼠血清内TP53、丝氨酸苏氨酸蛋白激酶B1(serine/threonine protein kinase 1,AKT1)、血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A)和丝裂原激活蛋白激酶3(mitogen-activated protein kinase 3,MAPK3)的含量,采用免疫组化法检测各组小鼠内膜组织中PI3K、AKT的表达。结果 ...     

基于网络药理学研究琥珀散治疗子宫内膜异位症的作用机制

摘要：目的:应用网络药理学研究琥珀散治疗子宫内膜异位症的作用靶点、活性成分、信号通路等,从而探讨琥珀散治疗子宫内膜异位症的作用机制。方法:应用中药系统药理学分析平台（TCMSP）数据库及文献检索对琥珀散中10味中药主要化学成分进行筛选。采用Pubchem、HIT、SwissTargetPrediction、SEA数据库,对筛选出的化合物进行靶点预测。用DisGeNET、Drugbank、TTD、GSE6364、GSE7305数据库,对子宫内膜异位症进行靶点预测。将药物靶点与疾病靶点进行交集,筛选得到疾病-药物成分共同靶蛋白。运用STRING平台构建蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络模型;用Cytoscape 3.7.2软件分别绘制中药-成分网络、成分-靶点网络,进一步筛选核心网络,进行拓扑分析;利用生物信息注释数据库（DAVID）进行基因本体（GO）功能注释富集分析与京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析;利用Cytoscape软件构建琥珀散"有效成分-药物靶点-疾病靶点-信号通路"拓扑网络,确认可能的关键靶点和主要通路。结果:从琥珀散中筛选出190个化合物成分,与子宫内膜异位症关联最强的11个核心靶点;同时筛选出与琥珀散关键成分相关的主要信号通路7条;在此基础上构建了琥珀散的成分-靶点、成分-子宫内膜异位症靶点及相关信号通路的共同表达网络,发现琥珀散可能通过抗黏附、侵袭、种植等多靶点、多途径发挥对子宫内膜异位症的治疗作用。结论:从多角度探索了琥珀散治疗子宫内膜异位症的作用机制,揭示了琥珀散的药理作用,为其后续的实验研究及临床疗效指标的筛选提供了方向。     

琥珀散对人MenSCs植入式子宫内膜异位症裸鼠异位病灶及Beclin1、ZEB1表达的影响

目的 探究琥珀散对人经血源间充质干细胞(MenSCs)植入式子宫内膜异位症(EMT)裸鼠的异位病灶及 Bcl-2 同源结构域蛋白抗体(Beclin1)、锌指E盒同源结合蛋白1(ZEB1)表达的影响。方法 将裸鼠随机分为对照组、模型组、地诺孕素(0.001 g·kg^-1)组和琥珀散(29 g·kg^-1)组,每组 10 只。从 EMT 患者及健康女性的月经血中提取 MenSCs,并借助成脂、成骨诱导分化鉴定其干细胞属性。将EMT MenSCs注射至裸鼠腹部皮下,制备EMT裸鼠模型,对照组植入正常人MenSCs。至第7天每组随机抽取1只裸鼠,开腹观察异位病灶生长情况,并借助HE染色和人类白细胞抗原A(HLAA)免疫荧光法评价模型。自造模成功连续给药21 d,末次给药后第2日取材,观测EMT异位病灶体积及血管分布;切取异位病灶组织,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blotting、免疫组织化学及免疫荧光技术分别测定组织中Beclin1与ZEB1在mRNA及蛋白水平的表达。结果 EMT源及正常MenSCs为长梭形,呈辐射状向周边集落扩散,且经成脂、成骨诱导分化后均有脂滴、钙结节形成。造模7 d后,对照组未见异位病灶形成,其余各组均有囊泡样病灶形成,且周围血管形成丰富,病理切片均可见子宫内膜腺体和间质,HLAA 均阳性表达。与模型组比较,琥珀散能显著缩小EMT裸鼠异位病灶体积(P<0.001),改善周围血管分布。在 mRNA水平, 与模型组比较,地诺孕素组和琥珀散组ZEB1表达显著降低(P<0.001),Beclin1 表达显著升高(P<0.001)。在蛋白水平,与模型组比较,Western blotting结果显示,地诺孕素组和琥珀散组ZEB1 表达显著降低 (P<0.05),Beclin1表达显著升高(P<0.01、0.001);免疫组化结果显示,琥珀散组 Beclin1 大量分布在异位内膜、腺腔以及腺上皮细胞与间质细胞的胞核及胞浆中,Beclin1 表达显著增加(P<0.01);免疫荧光结果显示,琥珀散组 ZEB1 蛋白在异位内膜、腺腔、腺上皮细胞及周围间质细胞的胞核与胞浆中的分布均明显减少,地诺孕素组、琥珀散组 ZEB1 蛋白表达阳性率显著降低(P<0.001)。结论 琥珀散可能通过上调 Beclin1、下调 ZEB1 表达,缩小 EMT 裸鼠异位病灶,改善周围血管分布。     

中药汤剂联合米非司酮治疗子宫内膜异位症疗效及安全性的网状Meta分析

摘要：目的:采用贝叶斯网状Meta分析方法评价不同中药汤剂联合米非司酮治疗子宫内膜异位症（EMT）的疗效及安全性。方法:计算机检索CNKI、WanFang Data、VIP、SinoMed、PubMed、EMbase数据库，搜集不同中药汤剂联合米非司酮治疗EMT的随机对照试验（RCT）,检索时限均从建库至2021年6月30日。由两名研究者独立筛选文献、提取资料并评价纳入研究的偏倚风险后，采用RevMan 5.3软件进行传统Meta分析，通过R 3.6.1软件进行网状Meta分析。结果:共纳入52个RCT,涉及6种干预措施，包括4 833例患者。传统Meta分析结果显示，中药汤剂联合米非司酮组在疗效及安全性上均优于单用米非司酮组；网状Meta分析结果显示，5种中药治疗方式联合米非司酮的临床总有效率均优于单用米非司酮，且排序概率以益气活血法联合米非司酮为最优，妊娠率的排序概率以补肾活血法联合米非司酮为最优，减小异位囊肿、降低血清CA125水平及复发率的排序概率以活血化瘀法联合米非司酮为最优，减少不良反应的排序概率以理气活血法联合米非司酮为最优。结论:对于EMT患者，米非司酮联合中药汤剂的治疗效果明显优于单用米非司酮；在疗效及安全性方面，治疗EMT以理气活血法联合米非司酮为最优。但受纳入文献的质量及数量限制，该结论仍需大量的高质量文献进一步验证。     

子宫内膜异位症患者与健康女性的经血源间充质干细胞自噬功能比较研究

目的 比较子宫内膜异位症（EMT）患者与健康女性的经血源间充质干细胞（MenSCs）的自噬功能。方法 分别从EMT患者及健康女性的月经血中提取EMT MenSCs（E-MenSCs）和正常MenSCs（H-MenSCs）,并借助成脂、成骨诱导分化鉴定其干细胞属性。通过CCK-8法比较E-MenSCs和H-MenSCs在12、24、48、72、96、120 h时刻于波长450 nm的吸光度（A）值,并绘制细胞增殖曲线,比较2组细胞的细胞活力;运用透射电镜观察E-MenSCs与H-MenSCs的细胞形态,检测比较其中自噬体和自噬溶酶体的数量;采用Western blotting法检测E-MenSCs和H-MenSCs中自噬标志物微管相关蛋白轻链3-II（LC3-II）和Beclin1的蛋白表达。结果 E-MenSCs和H-MenSCs均为长梭形,呈辐射状扩散,且经成脂、成骨诱导分化后均有脂滴、钙结节形成。与H-MenSCs比较,E-MenSCs在72、96、120 h的细胞活力均显著升高（P<0.01、0.001）,自噬体和自噬溶酶体数量显著减少（P<0.05、0.01）,且LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达量也显著降低（P<0.05）。结论 与H-MenSCs比较,E-MenSCs的自噬功能减弱,这可能是EMT发病进展的潜在机制。     

基于“凡血证总以祛瘀为要”探讨琥珀散治疗子宫内膜异位症痛经的临床应用思路

子宫内膜异位症(EMT)是好发于育龄期妇女的常见激素依赖性疾病。痛经是EMT的典型临床表现之一,归属于“血证”范畴。基于“凡血证总以祛瘀为要”理论,结合EMT痛经的病因病机,指出EMT痛经的治疗当以活血化瘀、温阳止痛为主。琥珀散有活血化瘀、温阳止痛之效,治疗寒瘀导致的妇科疾病有明显疗效,结合临床医案加以阐析。     

基于阴阳学说探讨巨噬细胞M1/M2稳态失调与子宫内膜异位症的相关性

子宫内膜异位症(endometriosis, EMs)的发生与腹腔微环境稳态失衡有关,而巨噬细胞是腹腔液中最为关键的免疫细胞,对机体稳态的维持和修复发挥着重要作用。巨噬细胞M1/M2稳态失衡可能与EMs发病相关,且当EMs处于不同的阶段,M1型、M2型可相互转化,这与中医阴阳学说高度相似。根据阴阳属性分类,M1型为促炎表型,当它占据主体时,介导炎症反应,属“阳”;M2为抗炎表型,当它占据主体时,发挥抗炎、修复效应,属“阴”。虽然EMs的中医证型繁多,但治病应求其本,临床可利用中医药恢复M1/M2稳态调整阴阳平衡达到治疗本病的目的,即在EMs进程中,当M1型占据主体且效应过强时,以行气止痛为主,方用失笑散等;当M2型为主时,以温阳散寒、活血化瘀为主,方用琥珀散、桂枝茯苓丸等。相关研究亦证实了中医药可以恢复EMs患者M1/M2稳态平衡达到治疗作用。本文基于阴阳学说来探讨巨噬细胞M1/M2稳态失调与EMs的相关性,以期为中医药治疗EMs提供新思路。     

滋水清肝理冲饮治疗围绝经期综合征肝郁肾虚证的临床研究

目的 观察滋水清肝理冲饮对围绝经期综合征(PMS)肝郁肾虚证患者的临床疗效。方法 收集2019年7月—2022年1月就诊于北京中医药大学第三附属医院PMS肝郁肾虚证患者共60例,按照随机数字表法分为滋水清肝理冲饮组30例和对照组30例。滋水清肝理冲饮组给予滋水清肝理冲饮颗粒剂,对照组不加干预,滋水清肝理冲饮组共治疗3个月。3个月后评估比较两组患者的围绝经期症状评分(改良Kupperman评分)、血清性激素水平和世界卫生组织生存质量简表(QOL-BREF)及不良反应。结果 滋水清肝理冲饮组的总有效率为90%,明显高于对照组(P<0.05)。两组均无明显不良反应事件。滋水清肝理冲饮组改良Kupperman评分、卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)较治疗前明显降低,雌二醇(E₂)和QOL-BREF生理、心理、环境及自评分数较治疗前均明显升高(P<0.05);对照组改良Kupperman评分、FSH明显升高,QOL-BREF心理、社会、环境评分均降低(P<0.05)。与对照组比较,滋水清肝理冲饮组治疗后改良Kupperman评分、血清性激素水平和生...     

基于CXCL12/CXCR4轴探讨琥珀散含药血清促进子宫内膜异位症患者经血源间充质干细胞自噬活性的作用机制

目的 基于CXCL12/CXCR4轴探讨琥珀散对子宫内膜异位症（EMT）经血源间充质干细胞（MenSCs）自噬活性的调控作用。方法 从EMT患者和健康女性志愿者的月经血中分离提取EMT MenSCs（E-MenSCs）和正常MenSCs（HMenSCs）。采用12只7周龄雄性SD大鼠制备空白血清和含药血清（ig给予大鼠琥珀散9.9 g·kg^-1,临床等效剂量）。将细胞分为3组：对照组（H-MenSCs）、模型组（E-MenSCs）和琥珀散组（E-MenSCs）,对照组和模型组使用20%空白血清干预,琥珀散组使用20%含药血清干预,均干预48 h。分别采用CCK-8法、透射电镜、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Westernblotting法检测3组细胞的细胞活力、自噬体和自噬溶酶体表达、CXCL12和CXCR4的mRNA水平和CXCL12/CXCR4及自噬标志分子（Beclin1和LC3Ⅱ）的蛋白表达量。结果 与对照组比较,模型组的细胞活力、CXCL12和CXCR4的mRNA和蛋白表达水平均显著提高（P<0.05、0.01、0.001）,自噬体和自噬溶酶体数量、Beclin1和LC3Ⅱ的蛋白表达均显著降低（P<0.05、0.01）;与模型组比较,琥珀散组的细胞活力、CXCL12和CXCR4的mRNA及蛋白表达水平均显著下调（P<0.05、0.01、0.001）,自噬体和自噬溶酶体数量、Beclin1和LC3Ⅱ的蛋白表达均显著上调（P<0.05、0.01、0.001）。结论 琥珀散含药血清能够上调E-MenSCs自噬活性,其作用机制可能与其抑制CXCL12/CXCR4轴有关。