基于Nrf2/ARE信号通路探讨当归-川芎含药血清对H2O2致PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的 研究当归-川芎含药血清（Angelicae Sinensis Radix-Chuanxiong Rhizoma medicated serum,ASRCRS）对过氧化氢（H₂O₂）诱导高分化大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞（PC12细胞）氧化损伤的保护作用及其分子机制。方法 采用H₂O₂体外诱导PC12细胞氧化损伤,并以终体积分数为15%的ASRCRS低、中、高剂量组进行干预。采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率;荧光倒置显微镜观察细胞形态;试剂盒检测细胞上清液乳酸脱氢酶（LDH）,丙二醛（MDA）含量和细胞内超氧化物歧化酶（SOD）活力及活性氧（ROS）分布水平;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核转录因子E₂相关因子2（Nrf2）,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（Keap1）,血红素加氧酶-1（HO-1）,SOD1蛋白的表达水平。结果 选择300 μmol·L^-1 H₂O₂刺激24 h作为氧化损伤造模的条件。与正常组比较,H₂O₂模型组细胞形态异常,细胞存活率显著降低（P<0.01）;LDH,MDA含量升高（P<0.01）,SOD活力降低,ROS在细胞内分布增加;Nrf2,HO-1,SOD1蛋白表达水平均明显下调（P<0.05,P<0.01）,Keap1蛋白表达水平明显上调（P<0.01）。与模型组比较,ASRCRS不同剂量组均能改善细胞形态,提高细胞存活率,抑制细胞凋亡;显著提高SOD酶活力（P<0.01）,抑制LDH的释放（P<0.01）和ROS的生成,降低MDA含量（P<0.01）;明显上调Nrf2,HO-1,SOD1蛋白表达水平（P<0.05,P<0.01）,显著下调Keap1蛋白表达水平（P<0.01）。结论 当归-川芎含药血清可能是通过上调Nrf2的蛋白表达,激活Nrf2/抗氧化反应元件（ARE）信号通路,增强细胞抗氧化损伤能力,抑制细胞凋亡,从而发挥保护H₂O₂损伤的PC12细胞的作用。