分子生物学实验教学初探与体会

21世纪是生物研究快速发展的时代 ,社会对人才质量的要求也不断提高 ,为适应下世纪科学发展的需要 ,医学生必须掌握分子生物学基本知识和基本技能 ,为此 ,本院对 1 999年硕士研究生开设分子生物学实验教学。初步尝试 ,现谈谈教学体会。1　开设分子生物学实验教学的目的及意义　　众所周知 ,硕士研究生的培养将为我国科研和创新工程提供后备人才 ,而培养研究生创新思维和实际科学研究能力将关系到所培养的人才是否能胜任毕业后既富有挑战性又具有时代所需的创新研究工作。 2 1世纪是生物研究快速发展的时代 ,分子生物学的一系列新技术的问世 …     

隐白穴对崩漏治疗的意义浅析

崩漏是指妇女经血非时暴下或淋漓不尽，为多种妇科疾患所表现的共有症状，如现代医学的功能性子宫出血、女性生殖器炎症、肿瘤等所出现的阴道出血，皆属此疾的范畴。其临床表现以经期出血时间延长、月经周期紊乱、出血量的变化等为主。崩漏多发于女性围绝经期，多由血热、血瘀、脾虚、肾虚引起冲任损伤，不能制约经血所致。病变涉及冲任二脉及肝、脾、肾三脏。肾主精，肝藏血，脾统血，     

免疫法建立特发性血小板减少性紫癜动物模型过程的改进及其体会

特发性血小板减少性紫癜(ITP)是临床常见的免疫疾病,主要是由于自身抗体同血小板结合,引起血小板的破坏增多.鉴于与其自身免疫相关的发病特点,本病的研究必须建立在与疾病本质相似的动物模型上.目前国内对ITP的实验研究主要采用免疫法造模[1,2],或者免疫法结合其它方法造模[3,4].笔者在实验中从经济有效的角度对该法进行了进一步摸索并稍加改进.     

电针足三里穴对胃黏膜损伤大鼠NO及血流量影响的研究

目的：探讨电针足三里对胃黏膜损伤大鼠保护作用的机制。方法：采用乙醇灌胃造成胃黏膜损伤大鼠模型，观察电针足三里对损伤指数(LI)、胃黏膜血流量(GMBF)、一氧化氮(NO)的影响。结果：电针模型组NO回升，GMBF亦明显增加，LI下降。结论：电针足三里对胃黏膜损伤起保护作用。其机制可能与调节血浆NO水平有关。     

黄芪有效部位对糖尿病大鼠白介素-1β、白介素-4的影响

目的:探讨黄芪有效部位(黄芪黄酮、黄芪多糖、黄芪皂苷)对糖尿病大鼠的干预作用机制。方法:采用腹腔注射STZ(52mg/kg)诱导糖尿病模型,造模同日给予黄芪及其有效部位(黄酮组、多糖组、皂苷组、酮糖组、酮苷组、糖苷组、酮糖苷组)干预。第30d检测血糖,血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-4(IL-4)(ELISA法)水平。结果:糖尿病模型大鼠血糖显著升高,血清IL-1β水平上升,IL-4下降(P0.05);黄酮组、酮糖组、酮苷组血糖降低,血清IL-1β水平下降,血清IL-4水平升高;黄芪组、酮糖苷组可降低血糖,升高血清IL-4水平(P0.05)。结论:黄芪黄酮具有降低糖尿病模型大鼠的血糖作用,推测其可能与其下调血清IL-1β、上调IL-4水平有关。     

“肾藏精”与干细胞及其微环境及NEI网络动态平衡关系

国家重点基础研究发展计划项目"基于‘肾藏精’脏象理论的基础研究"提出科学假说:"肾藏精"主要或部分体现为干细胞及微环境的调和状态,体现为干细胞、微环境和NEI网络的动态平衡。综合文献及实验研究成果表明,在整体层次,"肾藏精"主要体现为NEI网络的调控作用;在细胞及分子层次,"肾藏精"主要或部分体现为干细胞及微环境的调和状态。"肾藏精"与在NEI网络整体调控下的内源性干细胞"沉默"休眠、"唤醒"激活、增殖分化以及多种内在机制和微环境因素密切相关。干细胞既可以定向分化为神经细胞、胰岛β细胞、免疫细胞等,又具有神经-内分泌-免疫网络作用的分子基础。"从肾论治"的作用机制之一是动员"肾藏精"的生理功能而激活内源性干细胞和发挥微环境作用,同时调控NEI网络动态平衡。继续深化相关研究,可能在肾藏象理论基础研究方面取得重大突破,并在临床"从肾论治"相关疾病辨证论治规律方面具有指导作用和应用价值。     

芳香开窍类中药含药脑脊液对星形胶质细胞水通道-4表达的影响

目的探讨芳香开窍类中药在治疗中枢神经疾病时的作用机制。方法原代培养小鼠大脑星形胶质细胞表达水通道-4mRNA,观察家兔含药脑脊液对原代培养的小鼠大脑星形胶质细胞水通道基因表达的影响。结果培养液中加入家兔脑脊液对水通道-4 mRNA表达没有影响(P>0.05),含石菖蒲的含药脑脊液使原代培养的小鼠大脑星形胶质细胞水通道-4基因表达降低(P<0.05);而含麝香的含药脑脊液对原代培养的小鼠大脑星形胶质细胞水通道-4基因表达无明显影响(P>0.05)。结论芳香开窍药石菖蒲可能能降低星形胶质细胞水通道-4基因的表达。     

乌头汤对弗氏完全佐剂关节炎大鼠血清肿瘤坏死因子α及一氧化氮水平的影响

目的：探讨中医内治类风湿性关节炎（RA）的疗效.方法：选取Wistar大鼠36只,雌雄各半,按性别体重分层后,随机分4组（乌头汤组、雷公藤组、生理盐水组、正常对照组）,注射弗氏完全佐剂制备佐剂性关节炎模型,模型制备后第8d给药,连续至第28d,1次/d,观察其对RA大鼠血清中一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子α（TNFα）含量及足部肿胀度的影响.结果：乌头汤能抑制佐剂性注射对侧足的肿胀,降低RA大鼠血清中NO、TNFα的含量,有助于恢复免疫稳定状态.其作用优于雷公藤多苷片.（P＜0.05）.结论：乌头汤具有较强的抗炎消肿作用,内治类风湿效果满意.     

加味四逆散对溃疡性结肠炎肝郁大鼠模型细胞因子网络的调节作用

目的：观察加味四逆散对溃疡性结肠炎（UC）肝郁大鼠模型细胞因子（CK）网络的调节作用，揭示加味四逆散治疗肝郁证UC的部分现代生物学基础。方法：采用免疫法及束缚法的复合因素制作UC肝郁大鼠模型，检测加昧四逆散各剂量组与模型组血清IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10的水平，统计学进行分析。结果：加味四逆散各剂量组的IL-1β、IL-6水平较模型组均明显降低，IL-4、IL-10的水平均明显升高。结论：加味四逆散治疗肝郁证UC的途径之一，可能是抑制了UC肝郁时IL-1β、IL-6等炎性CK，上调了IL-4和IL-10等抑炎性CK，从而调节CK网络，纠正异常的免疫功能，降低免疫细胞对炎症的反应性，从而有利于炎症的消除及组织的修复。     

纳米钙补肾中药对骨质疏松症大鼠肠黏膜中CaBP-D_(9K)的mRNA和蛋白表达的影响

目的研究骨质疏松症大鼠肠黏膜中钙结合蛋白CaBP-D9K的mRNA和蛋白表达,揭示骨质疏松症的发病机理,阐述纳米钙补肾中药的调节作用机制。方法用切除大鼠双侧卵巢的方法复制骨质疏松症模型,用纳米钙及具有益肾填精、补钙壮骨作用的纳米钙补肾中药大、中、小剂量对实验大鼠治疗12周,以骨疏康颗粒剂、雌二醇(E2)及钙尔奇D600作为阳性对照组,正常大鼠和模型空白组为空白对照组。用PCR法、Western印迹法检测骨质疏松症大鼠肠黏膜中CaBP-D9K的mRNA和蛋白表达。结果正常大鼠肠黏膜组织可以在基因、蛋白水平表达钙结合蛋白CaBP-D9K,而且在肠钙吸收中可能起到重要作用。大鼠骨质疏松症的发生与肠黏膜组织中钙结合蛋白CaBP-D9KmRNA和蛋白表达的变化有关,从而影响肠钙的吸收。结论纳米钙补肾中药通过调控大鼠肠黏膜钙结合蛋白CaBP-D9KmRNA和蛋白表达,促进肠钙的吸收,对于骨质疏松症有一定的防治作用。