基于差异蛋白组学的活血养血汤干预兔脊髓缺血再灌注损伤模型作用机制研究

目的筛选活血养血汤干预兔脊髓缺血再灌注损伤模型的差异蛋白,对差异蛋白进行系统的生物信息学分析,从而探讨活血养血汤改善脊髓缺血再灌注损伤的作用机制。方法新西兰大白兔12只,随机分为2组,分别为模型组和药物组,模型组灌服生理盐水,药物组灌服活血养血汤。1周后,以阻断兔第3～6腰动脉的方式建立兔脊髓缺血再灌注损伤动物模型,阻断30 min后再灌注1 h,取兔腰段脊髓,提取蛋白,进行TMT标记,液相色谱-质谱联用分析,数据库分析,筛选出差异蛋白后进行蛋白注释、蛋白结构域分析、KEGG通路富集和亚细胞结构定位等生物信息学分析。结果筛选出的定量到的差异蛋白中,上调蛋白26个,下调蛋白18个。差异蛋白生物信息学分析表明,生物进程中较多体现在单一生物进程、代谢过程及生物调节方面,且分布集中于细胞器和细胞膜中,主要体现分子粘附及催化活性表达,亚细胞定位主要在细胞质,细胞通路主要体现为脂肪酸生物合成方面。结论活血养血汤改善脊髓缺血再灌注损伤的作用机制可能与上述生物信息学分析结果有关。     

活血通督汤对脊髓缺血再灌注损伤神经细胞凋亡的影响

目的:通过观察活血通督汤对脊髓缺血再灌注损伤脊髓神经细胞凋亡的影响,探讨活血通督汤改善脊髓缺血再灌注损伤的机制。方法:66只新西兰家兔随机分为假手术组、模型组、活血通督汤组。模型组、活血通督汤组采用夹闭腰动脉法制作脊髓缺血再灌注损伤模型。假手术组不夹闭腰动脉,其它步骤同模型组。采用TUNEL法检测神经细胞凋亡水平。结果:(1)苏木精-伊红染色显示:假手术组脊髓神经细胞形态基本正常;模型组和活血通督汤组各时间点可见脊髓神经细胞核固缩、深染、结构模糊,间质可见出血点;活血通督汤组各时间点脊髓神经细胞形态优于模型组。(2)TUNEL染色显示:假手术组神经细胞凋亡较少;模型组和活血通督汤组各时间点神经细胞凋亡较假手术组明显增高,再灌注24h神经细胞凋亡最多;活血通督汤组各时间点脊髓神经细胞凋亡少于模型组。结论:活血通督汤可通过减少脊髓缺血再灌注损伤中脊髓神经细胞的凋亡,从而减轻脊髓缺血再灌注损伤。     

基于差异蛋白组学的活血养血汤干预兔脊髓缺血再灌注损伤模型作用机制研究

目的筛选活血养血汤干预兔脊髓缺血再灌注损伤模型的差异蛋白,对差异蛋白进行系统的生物信息学分析,从而探讨活血养血汤改善脊髓缺血再灌注损伤的作用机制。方法新西兰大白兔12只,随机分为2组,分别为模型组和药物组,模型组灌服生理盐水,药物组灌服活血养血汤。1周后,以阻断兔第3～6腰动脉的方式建立兔脊髓缺血再灌注损伤动物模型,阻断30 min后再灌注1 h,取兔腰段脊髓,提取蛋白,进行TMT标记,液相色谱-质谱联用分析,数据库分析,筛选出差异蛋白后进行蛋白注释、蛋白结构域分析、KEGG通路富集和亚细胞结构定位等生物信息学分析。结果筛选出的定量到的差异蛋白中,上调蛋白26个,下调蛋白22个。差异蛋白生物信息学分析表明,生物进程中较多体现在单一生物进程、代谢过程及生物调节方面,且分布集中于细胞器和细胞膜中,主要体现分子粘附及催化活性表达,亚细胞定位主要在细胞质,细胞通路主要体现为脂肪酸生物合成方面。结论活血养血汤改善脊髓缺血再灌注损伤的作用机制可能与上述生物信息学分析结果有关。     

丹参及丹参酮Ⅱ_A磺酸钠对脊髓缺血再灌注损伤IL-1β、ICAM-1及MPO表达的影响

目的:观察丹参及丹参酮ⅡA磺酸钠(丹参酮Ⅱ钠)对大鼠脊髓缺血再灌注损伤脊髓细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达、白细胞介素-1β(IL-1β)及髓过氧化物酶(MPO)活性的影响,探讨其作用与机制。方法:SD大鼠随机分为手术对照组、损伤组、丹参组和丹参酮组。术前30min,前两组腹腔注射0.9%氯化钠溶液,丹参组给予丹参注射液,丹参酮组给予丹参酮Ⅱ钠。手术对照组打开腹腔但不夹闭腹主动脉,余3组制作脊髓缺血再灌注损伤模型。4组分别于术后0.5、1、4、8和12h检测脊髓组织中的ICAM-1、IL-1β及MPO。结果:手术对照组各观测时点未见阳性表达。其余3组伤后0.5h,IL-1β和ICAM-1开始升高,12h达到高峰值。丹参组与丹参酮组IL-1β和ICAM-1活性在4、8、12h较损伤组明显降低(P0.05),8、12h差异显著(P0.05,P0.01)。伤后4h开始出现ICAM-1阳性表达血管,12h内持续增多,其中丹参组与丹参酮组ICAM-1阳性表达血管在4、8、12h时较损伤组明显减少(P0.05)。丹参酮组在8、12h时点尤其显著(P0.05,P0.01)。3组MPO于0.5h后开始上升,并在12h达到高峰值,丹参组与丹参酮组在4h、8h、12h较损伤组明显降低(P0.05)。结论:丹参及丹参酮Ⅱ钠可以降低脊髓缺血再灌注损伤中脊髓的IL-1β活性及ICAM-1的表达,减少中性粒细胞的浸润,减轻炎症反应。丹参酮Ⅱ钠的作用优于丹参。     

ERK1/2信号通路在3种骨肉瘤细胞中的作用和表达水平的研究

目的 观察细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)激动剂表皮生长因子(EGF)和抑制剂PD98059对3种骨肉瘤细胞株U2OS、MG63、UMR106的增殖影响以及ERK1/2基因和蛋白在3种细胞株中的表达水平，筛选出ERK1/2基因和蛋白表达最高的骨肉瘤细胞株用于后续实验研究。方法 采用细胞计数和CCK8法分别测定U2OS、MG63、UMR106细胞的生长情况，同时使用EGF和PD98059分别干预3种细胞株，观察其对3种骨肉瘤细胞增殖的影响；采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测3种细胞株中ERK1/2基因的表达；采用Western-blot检测3种细胞株中ERK1/2蛋白、p-ERK1/2蛋白的表达情况。结果 细胞计数和CCK8结果均显示，U2OS和UMR106在正常情况下培养48 h可达最佳生长状态，而MG63细胞的最佳生长状态时间为24 h; EGF在干预细胞24 h和48 h均能使U2OS、MG63、UMR106细胞增殖，而PD98059在干预细胞24 h和48 h均能使3种细胞的增殖受到抑制(P<0.05)。RT-qPCR结果显示在培养48 h后，U2OS细胞中的E...