鼠尾藻多酚的抗凝血活性研究

目的探讨鼠尾藻多酚STP-1和STP-2的抗凝血活性。方法体内实验分别以毛细管法、剪尾法测定鼠尾藻多酚对小鼠凝血时间、出血时间的影响;体外实验分别测定鼠尾藻多酚对新西兰兔血浆活化部分凝血活酶时间、血浆凝血酶原时间、血浆凝血酶时间的影响。结果鼠尾藻多酚STP-1在体内、体外均有显著的抗凝血作用,而且中剂量组(1.0mg/mL)抗凝血活性最佳。结论鼠尾藻多酚STP-1在体内、外均有抗凝血活性。     

重组沙蚕溶栓活性蛋白酶的纯化及其性质研究

目的表达、纯化重组沙蚕溶栓活性蛋白酶并对其性质进行研究。方法将表达载体pMAL-PPA转化入Ecoli DH5α构建工程菌，IPTG诱导工程菌大量表达麦芽糖结合蛋白一沙蚕溶栓活性蛋白酶（MBPPPA），细胞裂解液中融合蛋白经Amylose-resin亲和层析与DEAE-Sepharose FF离子交换层析得到了纯化。用Factor Xa切割融合蛋白后经酪蛋白平板法检测其纤维蛋白溶酶原激活活性，然后对其部分性质进行了研究。结果构建了表达MBP—PPA的工程菌。经纯化得到相对分子质量约51kDa的融合蛋白，Factor Xa切割融合蛋白后，重组沙蚕溶栓活性蛋白酶（PPA）体外具有纤维蛋白溶酶原激活活性，性质研究表明PPA热稳定性好，最适pH为8．0，该酶在pH6．0～9．0范围内有较好的稳定性，酶活在有机溶剂中至少维持20d，25mmol·L^-1PMSF能完全抑制其活性。结论证实PPA是一种纤溶酶原激活剂，且将来有望成为一种新型溶栓药物。     

生产β-胡萝卜素大肠杆菌工程菌的构建

将噬夏孢欧文氏菌β-胡萝卜素合成相关基因crtE,crtB,crtI融合后克隆进表达载体pET-15b,构建表达载体pET-15bcrtEIB;将crtY首先克隆进pET-15b,构建pET-15bcrtY,再将crtY连同T7启动子和终止子切下,插入pACYC-184构建pACYC-184crtY。将以上两重组质粒共转化E.coli BL21(DE3)构建工程菌,IPTG诱导工程菌累积橙色色素,经吸收光谱分析,确定工程菌中合成的色素为β-胡萝素。β-胡萝卜素的最高含量可达3.5mg/g.DW,每升发酵液可得6.53g干菌体。