烟草脆裂病毒介导的人参基因沉默体系的构建

目的 人参Panax ginseng中构建烟草脆裂病毒（tobacco rattle virus,TRV）介导的基因沉默体系,为人参中基因功能的验证提供新方法。方法 通过序列比对得到人参中八氢番茄红素脱氢酶（phytoene desaturase,PDS）基因的完整序列,利用保守结构域预测工具得到核心片段,将其整合进pTRV2载体内。重组载体转化农杆菌后侵染人参叶片,观察表型并利用q PCR检测沉默效率。结果 通过序列比对得到了2条PDS基因。PgPDS1基因c DNA序列全长1 746 bp,编码581个氨基酸;PgPDS2基因c DNA序列全长1299bp,编码432个氨基酸。2个PgPDS蛋白均具有典型的PDS结构域。将重组载体通过农杆菌转化人参叶片,接种3周后叶片表型无变化,5周后叶片尖端以及边缘出现枯萎现象。经q PCR检测,接种后3周和5周人参内源PgPDS基因表达量分别下降至接种前的70.37%和37.35%,表明体系构建成功。结论 人参中成功构建了TRV介导的基因沉默体系。