基于自噬探讨左归降糖通脉方对糖尿病合并脑梗死大鼠的神经保护作用机制

目的 从自噬角度探讨左归降糖通脉方(熟地黄、枸杞子、山茱萸、黄芪、黄连等)对糖尿病合并脑梗死大鼠的神经保护作用机制。方法 将96只雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、左归降糖通脉方组(24 g·kg^-1)及二甲双胍+阿司匹林组(150 mg·kg^-1+15 mg·kg^-1),每组24只。除假手术组大鼠外,其余大鼠采用高糖高脂饲料喂养4周后腹腔注射链脲佐菌素建立2型糖尿病大鼠模型,模型复制成功后开始灌胃给药,每日1次,连续5 d。末次灌胃后采用线栓法制备大脑中动脉栓塞大鼠模型。术后进行神经功能评分;采用TTC染色法测定脑梗死率;检测大鼠血糖值及糖化血清蛋白含量;HE染色观察缺血半脑皮质区组织损伤;ELISA法检测缺血侧大脑皮质组织中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;Western Blot法检测皮质组织中微管相关蛋白轻链3(LC3)、p62蛋白表达情况;免疫荧光法检测皮质组织中LC3蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠的神经功能损伤评分、脑梗死率、血糖水平、治疗前后的体质量...     

基于RAGE/NF-κB/mTOR信号通路探讨滋阴活血解毒方对AGEs诱导VEC损伤的干预作用

目的 观察滋阴活血解毒方对糖基化终末产物(advanced glycosylation end products,AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)损伤的影响及RAGE/NF-κB/mTOR信号通路的变化,探讨该方对AGEs诱导静脉内皮细胞(vein endothelial cell,VEC)损伤的保护作用.方法 培养的HUVEC细胞以100 mg/ml的AGEs诱导损伤,随机分为7个组,除空白组外,其中3组分别加入RAGE抑制剂FPS-ZM1、NF-κB抑制剂PDTC和mTOR抑制剂雷帕霉素(RAP),余下3组加入各种抑制剂后加入50 mg/mL滋阴活血解毒方浓缩药液.以western-blot法检测RAGE和mTOR的表达,以免疫组化方法检测NF-κB核转移状况.结果 细胞添加AGEs后细胞内出现异常增殖,细胞数量明显增多,多数细胞变形皱缩,胞膜轮廓模糊,细胞内出现粗糙样颗粒变化;抑制剂组及抑制剂加中药组都表现出不同程度的逆转这种损伤的作用,特别是抑制剂加中药组,见梭形正常细胞较多,圆缩形细胞减少.中药加抑制剂组RAGE表达量比单纯抑制剂组显著降低(P<0.01);中药加抑制剂组mTOR表达量比单纯抑制剂组显著降低(P<0.01);中药加抑制剂NF-κB的核转移阳性检测率比单纯抑制剂组显著降低(P<0.01).结论 滋阴活血解毒方能降低AGEs对VEC的损伤,降低RAGE、NF-κ、mTOR的表达.     

糖尿病的中医心身医学认识及治疗

随着现代社会发展,人类生存坏境的改变,来自于心理和社会环境的因素对疾病的影响开始逐渐显露.糖尿病作为一种典型的心身疾病,其发病率逐年上升,已严重威胁到人们的心身健康.中医的心身医学理论中对于消渴病的病因病机有独特的见解,其治疗多基于脏腑辨证和气血津液理论.糖尿病的中医心身医学理论值得我们进一步的挖掘和探讨.     

基于AMPK/mTOR/ULK1自噬相关通路探讨左归降糖通脉方对AGEs合并缺糖缺氧星形胶质细胞炎性损伤的影响

目的 探讨左归降糖通脉方对糖基化终末产物（AGEs）合并缺糖缺氧（OGD）损伤后星形胶质细胞（AS）的影响及干预机制。方法 使用细胞增殖与活性检测试剂盒（CCK-8）确定AGEs作用浓度及OGD时间,选择左归降糖通脉方（ZGJTTMP）含药血浆的作用浓度;将星形胶质细胞随机分为空白组、模型（AGEs+OGD）组、ZGJTTMP组、腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）抑制剂（Compound C）组、AMPK激动剂（AICAR）组、ZGJTTMP+AICAR组,倒置显微镜下观察各组细胞形态结构,CCK-8法检测各组细胞存活率,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞中白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量;电镜下观察各组细胞内自噬小体的数目,免疫荧光染色法观察各组细胞中微管相关蛋白1轻链3（LC3）的表达情况,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞LC3、p62、磷酸化（p）-AMPK、AMPK、磷酸化（p）-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、mTOR、磷酸化（p）-UNC-51样激酶1（ULK1）、ULK1蛋白的表达情况。结果 选择AGEs 200 mg·L^-1合并OGD 6 h作为最适造模条件,5%作为ZGJTTMP含药血浆的最佳作用体积分数。倒置显微镜下见造模后细胞受损严重,ZGJTTMP组与Compound C组细胞损伤得到明显改善;ELISA结果示模型组IL-1β、IL-6、TNF-α的含量显著增加（P<0.01）,ZGJTTMP组与Compound C组炎症因子含量显著下降（P<0.01）;电镜下可见模型组细胞内自噬小体数目明显增多,免疫荧光结果示LC3荧光表达面积显著增加（P<0.01）,ZGJTTMP组与Compound C组细胞内自噬小体数目明显减少,LC3表达面积显著减少（P<0.01）;Western blot结果显示,与空白组比较,模型组细胞LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著升高（P<0.01）,p62、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1显著下降（P<0.01）,与模型组比较,ZGJTTMP组与Compound C组细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-AMPK/AMPK蛋白表达显著下降（P<0.01）,p62、p-mTOR/mTOR、p-ULK1/ULK1显著升高（P<0.01）。结论 ZGJTTMP对AGEs合并OGD炎性损伤的星形胶质细胞具有保护作用,这一作用是通过抑制了AMPK/mTOR/ULK1自噬相关通路的激活,从而抑制了自噬的过度表达实现的。     

从络病学角度探讨2型糖尿病并发脑梗死的病机演变

络病学具有重要的理论价值和临床价值.从络病学角度分析2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)并发脑梗死的病机演变,其病变是从局部到整体,再从整体到局部的演变过程.络脉气血功能异常、脑络瘀阻梗塞是T2DM并发脑梗死发生、加重的根本原因,临证时以治疗T2DM及络脉受损为基础,以通脑络为治疗重...     

基于AGEs/RAGE/NF-κB通路探讨左归降糖通脉方对大鼠脑微血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 观察左归降糖通脉方对晚期糖基化终末产物（advanced glycation end products, AGEs）诱导大鼠脑微血管内皮细胞（brain microvascular endothelial cells, BMECs）损伤的干预作用,并基于AGEs/RAGE/NF-κB通路探讨左归降糖通脉方的作用机制。方法 将30只SD大鼠随机均分为空白组（同体积蒸馏水）、中药组[左归降糖通脉方36 g/(kg·d)]和西药组[尼莫地平18.35 mg/(kg·d)+格列齐特27.5 mg/(kg·d)],每日灌胃1次,连续5 d,用于制备含药血清。将BMECs随机分为空白组、模型组、左归降糖通脉方组、尼莫地平+格列齐特组、晚期糖基化终末产物受体（receptor for advanced glycation end products, RAGE）抑制剂(FPS-ZM1)组及吡咯烷二硫代氨基甲酸铵（pyrrolidinedithiocarbamate ammonium, PDTC）组,BMECs加入200 mg/L的AGEs作用24 h后,分别予空白血清、空白血清、左归降糖通脉方含...     

NLRP3炎症小体与缺血性卒中的关系及中医药的干预作用

缺血性卒中又称脑梗死,是脑卒中最常见的类型。缺血性卒中危害极大,其患病率、发病率、致残率和死亡率均位居前列,给社会和家庭造成巨大负担。因此,寻找新的、有效的防治方法极为迫切。缺血性卒中的病理机制十分复杂且相互叠加,其中炎症反应是缺血性卒中级联损伤过程中的关键病理环节。NOD样受体蛋白3（NLRP3）是一种细胞内传感器,活化的NLRP3炎症小体介导的炎症级联反应通过释放炎症因子等能加剧缺血性卒中损伤。中医药领域以NLRP3炎症小体为切入点,开展了大量中医药干预NLRP3炎症小体的组装和激活的实验研究,证明了以补虚、清热解毒、祛痰、活血化瘀等为主要功效的中药单体或组方制剂能干预NLRP3炎症小体的组装和激活,降低炎症反应,从而缓解缺血性卒中。本研究从NLRP3炎症小体的组装和激活,NLRP3炎症小体在缺血性卒中的作用和中医药通过调控NLRP3炎症小体防治缺血性卒中方面进行综述,旨在为缺血性卒中的病理机制提供新的切入点,为开发缺血性卒中新的治疗手段提供方向。     

基于凝血酶诱导自噬探讨化瘀解毒法对缺血性中风（瘀毒互结证）大鼠的影响

目的：观察化瘀解毒法对缺血性中风瘀毒互结证（IS-YD）大鼠不同缺血时相、不同脑区凝血酶表达以及自噬指标LC3Ⅱ/Ⅰ的影响,分析其发挥抗缺血性脑损伤作用的可能机制。方法：于缺血后12、24 h,将116只SD大鼠,随机分为假手术组（SHAM组）、模型组（IS-YD组）、化瘀解毒方组（HJF组）和阿加曲班组（ARG组）,其中假手术组8只,其余每组36只,再分为12、24 h两个时间点,每组18只。除假手术组外,其余大鼠制备缺血性中风瘀毒互结证模型。化瘀解毒方组给予11.33 g/（kg·d）剂量灌胃,阿加曲班组予以11.16 mg/（kg·d）剂量腹腔注射,假手术组、模型组给予0.9%生理盐水灌胃。Western blot法检测大脑皮质、海马区的凝血酶、LC3Ⅱ/Ⅰ比值的表达;TTC染色法计算脑梗死体积;透射电镜观察法观察脑区自噬超微结构;HE染色法观察神经元形态学改变。结果：与假手术组比较,模型组大鼠12、24 h两个时间点的神经功能评分升高（P <0.01）,脑梗死体积占比增加（P <0.05）,大脑皮质、海马区凝血酶、LC3Ⅱ/Ⅰ比值表达均明显升高（P <0.01...     

滋阴活血解毒方对AGEs诱导VEC损伤黏附分子及凝血相关因子表达的影响

目的 观察滋阴活血解毒方对糖基化终末产物(advanced glycation end-producs,AGEs)诱导血管内皮细胞(vas-cular endothelial cell,VEC)损伤的影响及其黏附分子、凝血相关因子表达的变化,进一步探讨该方对AGEs诱导VEC损伤的保护作用.方法 以人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)作为实验对象,以终浓度(100 mg/L)的AGEs诱导HUVEC损伤.各模型组及给药组细胞分别继续培养12、24、48 h.在显微镜下观察各组细胞形态变化,并以Western-blot法检测各组黏附分子VCAM-1、ICAM-1的表达;以RT-PCR方法 检测TF、TM mRNA表达.结果 相对于空白组细胞,模型组细胞出现异常增殖,细胞数量明显增多,多数细胞变形皱缩,胞膜轮廓模糊,细胞内出现粗糙样颗粒变化,VCAM-1、ICAM-1、TF表达明显上调,TM表达下调,且在作用24 h后差异有显著性意义(P<0.01);相同时间点,给药组较模型组圆缩形细胞减少,能下调VCAM-1、ICAM-1、TF表达,上调TM表达,且随着作用时间的延长更明显(P<0.01).结论 滋阴活血解毒方能抑制AGEs对VEC的损伤,降低黏附分子的表达,下调表达组织因子mRNA转录,上调血栓调节素mRNA转录.     

基于GPR43/β-arrestin-2/IκBα/NF-κB通路探讨左归降糖通脉方对高糖合并LPS诱导的人脐静脉内皮细胞炎性损伤的影响

目的 探讨左归降糖通脉方（ZJTP）对高糖合并脂多糖（LPS）损伤后人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的影响及作用机制。方法 通过细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测细胞存活率、酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平确定LPS最适损伤浓度及作用时间、ZJTP含药血清的最佳作用浓度。将HUVECs分为空白组、模型组、ZJTP含药血清组、短链脂肪酸（SCFAs）混合液组。采用ELISA检测内皮素-1（ET-1）、一氧化氮（NO）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）和TNF-α的含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测G蛋白偶联受体43（GPR43）、β-抑制蛋白-2（β-arrestin-2）、核转录因子-κB抑制因子α（IκBα）、核转录因子-κB p65（NF-κB p65）蛋白表达；免疫荧光法（IF）观察NF-κB p65入核情况。运用小干扰核糖核酸（siRNA）的方法观察GPR43在炎性损伤调控中的作用。将干扰后的细胞分为空载体组、ZJTP含药血清组、Si-GPR43组、Si-GPR43+ZJTP含药血清组。ELISA检测IL-1β、IL-6和TNF-α含量；Western blot检测通路蛋白表达；IF观察NF-κB p65入核情况。结果 最适造模条件为1 mg·L^-1 LPS作用24 h；最佳药物干预条件为5%的ZJTP含药血清作用24 h。与空白组比较，模型组ET-1含量显著升高，NO含量显著下降（P<0.01）；炎症因子水平显著上升（P<0.01）；GPR43和IκBα蛋白表达量下降，β-arrestin-2和NF-κB p65蛋白表达量显著升高（P<0.01）；NF-κB p65蛋白由核外转移至核内（P<0.01）。与模型组比较，ZJTP含药血清组ET-1含量下降，NO含量升高（P<0.05）；炎症因子水平下降（P<0.05）；GPR43和IκBα蛋白表达升高，β-arrestin-2和NF-κB p65表达下降（P<0.05）；NF-κB p65由核外转移至核内的数量减少（P<0.01）。机制研究发现，与Si-GPR43组比较，ZJTP含药血清干预后IL-1β、IL-6和TNF-α含量显著下降（P<0.01）；GPR43和IκBα蛋白表达量显著上升（P<0.01），β-arrestin-2和NF-κB p65蛋白表达量显著下降（P<0.01）；NF-κB p65由核外转移至核内数量减少（P<0.01）。结论 ZJTP对高糖合并LPS诱导炎性损伤的HUVECs具有保护作用，其机制可能与调控GPR43/β-arrestin-2/IκBα/NF-κB通路有关。