基于ITS序列PCR-RFLP鉴别大蓟药材及饮片中掺伪飞廉、魁蓟的方法研究

[目的]利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）,建立快速鉴别大蓟混伪品飞廉和魁蓟的方法。[方法]通过比对ITS基因序列,分别筛选飞廉、魁蓟的限制性内切酶位点并设计鉴别引物。考察PCR反应的退火温度、循环数及不同酶的适用性,对酶切反应时间和酶切底物量进行优化。同时对该方法适应性及掺伪比例的专属性、稳定性进行考察。[结果]当退火温度为58～60℃、循环数为30个时,样品均能扩增出一条379 bp的DNA条带。底物为8μL、酶切温度为37℃、酶切反应120 min时,ZraI酶将飞廉切割成120 bp和259 bp两条DNA条带;DNA底物为8μL、酶切温度为37℃、酶切反应60 min时,ApaLI酶将魁蓟切割成126 bp和253 bp两条DNA条带。[结论]试验建立的PCR-RFLP方法能够准确地鉴别大蓟混伪品飞廉、魁蓟,避免此类药材的混用,以保证临床用药安全。     

基于色差原理分析土茯苓断面颜色与成分之间的相关性

目的:利用色差原理量化土茯苓断面不同颜色,分析其断面颜色与成分含量的相关性。方法:运用nh310高品质电脑色差仪测定土茯苓断面颜色值L^*、a^*、b^*、Eab^*,测定土茯苓中浸出物的含量,采用高效液相色谱法测定土茯苓中落新妇苷、黄杞苷的含量;采用SPSS 25.0、SIMCA 13.0对数据进行分析。结果:颜色值能够很好地代表实际药材颜色,通过聚类分析、偏最小二乘法分析以及相关性分析显示,浸出物及成分含量分别与颜色值a^*、b^*呈极显著正相关(P<0.01),与颜色值L^*、Eab^*呈极显著负相关(P<0.01)。结论:土茯苓浸出物及落新妇苷、黄杞苷含量与其不同断面颜色之间存在极显著相关性,2种断面颜色之间成分含量的差异主要表现为断面淡红棕色者较淡白色者含量较高,为土茯苓药材质量提供新思路。     

炮制前后半夏多种核苷类成分变化研究

目的：建立HPLC同时测定半夏及其炮制品(姜半夏、法半夏、清半夏)中肌苷、鸟苷、胞苷、尿苷、胸苷、腺苷、尿嘧啶、次黄嘌呤8个核苷类成分的含量,比较半夏炮制前后核苷类成分含量的变化情况,探究炮制对成分含量的影响。方法：采用CAPCELL PAK C₁₈(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;检测波长为260 nm;柱温为25℃;进样量为20μL。利用SPSS 25.0、SIMCA 14.0软件对半夏及其3种炮制品的核苷类成分含量进行主成分分析(PCA)及偏最小二乘判别分析(PLS-DA)。结果：建立的HPLC法可以较好地对半夏中核苷类成分进行分离和测定,炮制前后半夏中核苷类成分含量差异较大,姜半夏中胞苷未检出,清半夏中腺苷与肌苷未检出,法半夏炮制前后成分种类无较大变化。半夏及其炮制品中核苷类成分含量较高者为鸟苷与尿苷,平均值分别为0.0113%、0.0117%。主成分分析及偏最小二乘判别分析结果显示核苷类成分能够较好地将半夏及其炮制品进行区分,对分类结果影响较大的成分分别为尿苷、胸苷、鸟苷、胞苷。结论：半...     

基于中红外技术的大蓟及小蓟鉴别研究

目的 基于中红外光谱和化学计量学方法实现大蓟与小蓟的分类鉴别。方法 采集不同地区的大蓟和小蓟样品,采用压片方法采集中红外光谱数据,建立大蓟和小蓟中红外指纹图谱,利用TQ分析软件进行色谱峰分析;用SIMCA软件进行主成分分析和偏最小二乘判别分析。结果 大蓟和小蓟指纹图谱的走势和主要吸收峰位置基本相同,所建立的PCA-MD判别模型和OPLS模型可以将大蓟与小蓟进行区分。结论 基于中红外光谱和化学计量方法可以对大蓟和小蓟进行区分鉴别。