根癌农杆菌对枳壳遗传转化的影响因素

目的：建立一套根癌农杆菌转化枳壳的有效方法,为枳壳新品种选育、引入外源基因奠定基础。方法：以枳壳实生苗的上胚轴为材料,农杆菌菌株为ＥＨＡ１０１,含质粒载体ＰＧＡ４８２ＧＧ,质粒上插入了ＧＵＳ,ＮＰＴⅡ基因。结果：２０ｄ苗龄的外植体转化再生率较高;其感染前先进行２ｄ预培养,对转化有一定促进作用;外植体与农杆菌共培养时间以２～３ｄ为宜;乙酰丁香酮能较大提高转化效率,转化再生频率达２７．５％;外植体与农杆菌共培养后延迟２ｄ选择,抗性芽发生率有所提高。结论：通过探讨根癌农杆菌对枳壳遗传转化的影响因素,获得较高的转化再生频率,建立了有效的转化再生系统。     

农杆菌介导转化法构建转CTV-cp的枳壳植株

目的 :采用农杆菌介导法 ,将能抑制病毒侵染的外壳蛋白基因转入枳壳 ,为通过基因转化进行枳壳的抗病育种提供依据和方法。方法 :以枳壳实生苗上胚轴为材料 ,农杆菌菌株为EHA₁₀₁,含有质粒载体 pGA482GG。质粒上插入了 35s启动子驱动的外源目的基因———柑桔衰退病病毒外壳蛋白基因 (CTV cp)及GUS ,NPTⅡ基因。结果 :枳壳转化试验中 ,抗菌素采用头孢霉素较好 ,浓度为 300mg·L^-1;以卡那霉素作为选择试剂 ,浓度为 5 0mg·L^-1;转化获得的抗性植株 ,GUS检测结果 ,70.0%的植株呈阳性反应 ;Southern杂交分析 (Southernblot)鉴定证明外壳蛋白基因已整合到枳壳植株的核基因组中。结论 :通过农杆菌介导的转化法 ,成功地获得了转外壳蛋白基因的枳壳植株。     

农杆菌介导枳壳转化系统的建立及PCR鉴定

目的：建立农杆菌介导的枳壳转化体系。方法：以枳壳实生苗上胚轴为转化体外植体，农杆菌Ti质粒上插入了外源目的基因--柑桔衰退病病毒外壳蛋白基因（CTV-cp），转化植株用GUS（β-葡萄苷酸酶）染色及PCR进行鉴定。结果：枳壳转化试验中，20d苗龄的外植体转化再生率较高；外植体与农杆菌共培养时间以2-3d为宜；乙酰丁香酮能较大提高转化效率，转化再生频率为27.5％。转化获得的抗性植株中，GUS反应呈阳性所占比例为70.0％。PCR分析证实外源目的基因已速合到枳壳转化株的核基因组中。结论：成功地建立了农杆菌介导的枳壳转化系统，为利用基因工程的手段进行枳壳的抗病育种奠定了基础。