肠复康诱导人结肠癌HT-29裸小鼠移植瘤细胞凋亡的机制

目的探讨肠复康诱导人结肠癌HT-29裸小鼠移植瘤细胞凋亡的机制。方法建立人结肠癌HT-29癌细胞株裸小鼠皮下移植瘤模型,用电子天平测量移植瘤的质量,苏木精伊红(HE)染色计数凋亡细胞数,免疫组化染色结合图像分析系统半定量检测移植瘤细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax、半胱天冬酶3(caspase-3)的积分光密度(IOD),同时计算Bcl-2/Bax IOD比值,并使用逐步引入剔出模型进行单因素和多因素线性回归分析。结果与模型组比,肠复康组和西药组均使移植瘤瘤体质量量明显减轻(P<0.05或0.01),凋亡细胞数明显增多(P均<0.01),同时能显著增高瘤细胞iNOS、Bax及caspase-3蛋白的含量(P<0.05或0.01),显著降低瘤细胞Bcl-2/Bax比值(P<0.05或0.01);单因素回归分析显示,瘤细胞iNOS、Bcl-2、Bax及caspase-3含量和Bcl-2/Bax比值与移植瘤凋亡细胞数有关;多因素回归分析显示,移植瘤凋亡细胞数与瘤体质量呈明显负相关(r=-0.775,P<0.01),瘤细胞iNOS及Bax蛋白含量与移植瘤凋亡细胞数呈明显正相关(r=0.771,P<0.01,r=0.763,P<0.01)。结论肠复康能诱导人结肠癌HT-29裸小鼠移植瘤细胞凋亡,其机制之一可能是促进NO的生成,通过线粒体凋亡途径激活caspase-3,导致瘤细胞凋亡。     

回生口服液调控Wnt通路CyclinD1影响人肺腺癌细胞增殖的机制

目的：研究回生口服液调控Wnt信号传导通路细胞周期蛋白D1（CyclinD1）影响人肺腺癌细胞（LAC）增殖的机制。方法：制备高、中、低剂量（11．6g／kg,5．8g／kg,2．9g／kg）回生口服液含药血清,与人肺腺癌细胞系共同培养,MTT法检测含药血清对肺腺癌细胞的抑制率,流式细胞仪检测肺腺癌细胞周期相对分布;建立C57BL／6人肺腺癌荷瘤小鼠模型,予回生口服液高、中、低剂量治疗,免疫组化法检测小鼠移植瘤肺腺癌细胞Cyclin—D1阳性表达水平。结果：与阴性对照组比较,回生口服液高、中剂量组及顺铂组含药血清对肺腺癌细胞的生长抑制率明显增高,且干预的肺腺癌细胞G1期细胞比例明显增高,s期、G2期细胞比例明显减少（P〈0．01,P〈0．05）;回生口服液中、高剂量及顺铂（DDP）治疗组小鼠肺腺癌细胞内CyclinD1阳性表达率明显低于模型组（P〈0．01）。结论：回生口服液可明显抑制人肺腺癌细胞生长,使癌细胞停滞于细胞周期的G1期,并可明显降低肺腺癌细胞内CyclinD1的阳性表达。     

血脂异常ApoE基因缺失小鼠视网膜色素上皮细胞胞浆内黑色素和脂褐素的改变

目的 探讨血脂异常载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因缺失(ApoE-/-)小鼠视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞胞浆内黑色素和脂褐素的改变.方法 将24只2个月龄ApoE-/-小鼠随机分为高脂组和普食组,每组12只,另用12只2个月龄C57BL小鼠作为普食组,喂养4个月后检测其血浆总胆固醇(total plasma cholesterol,TC)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、甘油三酯(plasma triglyceride,TG)含量,Masson三色、银氨液浸染法和醛品红法染色后光镜下观察视网膜光感受器细胞(photoreceptor cell,PRC)、RPE细胞、Bruch膜形态结构,半定量检测视网膜PRC数、RPE细胞数、Bruch 膜厚度、RPE细胞胞浆内黑色素和脂褐素含量,采用逐步引入-剔除法多元线性回归分析RPE细胞数与TC、LDL、TG含量的相关性及RPE细胞胞浆内黑色素、脂褐素含量与PRC数、RPE细胞数、Bruch膜厚度的相关性.结果ApoE-/-高脂组、ApoE-/-普食组、C57BL普食组小鼠血浆TC的含量分别为(13.262±0.458) mmol·L-1、(9.722±0.412) mmol·L-1、(5.150±0.308)mmol·L-1,LDL的含量分别为(2.030±0.186)mmol·L-1、(1.047±0.158)mmol·L-1、(0.427±0.080) mmol·L-1,TG的含量分别为(1.233±0.199) mmol·L-1、(0.777±0.161)mmol·L-1、(0.530±0.168) mmol · L-1,PRC细胞核面积分别为(20 135.000±1473.272) μm2、(23 208.000±716.913) μm2、(26 952.000±2449.104) μm2,RPE细胞数分别为8.900±1.148、10.200±0.835、13.800±1.016,Bruch膜厚度分别为(0.982±0.071) μm、(0.870±0.042) μm、(0.594±0.031) μm.ApoE-/-高脂组和普食组小鼠TC、LDL、TG含量较C57BL普食明显增高(P＜0.05或0.001).光镜下观察发现:ApoE-/-高脂组和ApoE-/-普食组小鼠视网膜PRC、RPE细胞排列紊乱、萎缩,RPE细胞内黑色素分布稀疏、面积小,脂褐素分布密集、范围广,Bruch膜粗细不等,胶原分叉,部分小鼠视网膜下可见玻璃膜疣形成;半定量结果显示,ApoE-/-高脂组和ApoE-/-普食组小鼠视网膜PRC细胞核面积、RPE细胞数较C57BL普食组明显减少(P＜0.01或0.001),Bruch膜显著增厚(P ＜0.001),RPE细胞内黑色素含量明显降低(P＜0.01或0.001),脂褐素含量明显增高(P ＜0.001).多元线性回归分析显示,RPE细胞数与TC、LDL、TG含量呈显著负相关(r=-0.911、-0.888、-0.669,P=0.000、0.00、0.001),黑色素含量与Bruch膜厚度呈明显负相关(r=-0.691,P =0.001),与RPE细胞数、PRC数呈明显正相关(r=0.745、0.408,P=0.000、0.047).脂褐素含量与Bruch膜厚度呈明显正相关(r =0.830,P=0.000),与RPE细胞数、PRC数呈负相关(r=-0.826、-0.340,P=0.000、0.084).结论 血脂异常ApoE-/-小鼠可出现明显高脂血症,引起视网膜RPE细胞损伤,细胞内黑色素减少、脂褐素增加,导致年龄相关性黄斑变性产生.     

妊娠糖尿病患者胎盘组织中γ-氨基丁酸A受体π亚基（GABRP）的表达及其对IR条件下滋养层细胞胰岛素敏感性的影响

目的 研究妊娠糖尿病（GDM）中γ-氨基丁酸A受体π亚基（GABRP）的表达及其对胰岛素抵抗（IR条件下的滋养层细胞对胰岛素敏感性的影响与相关分子机制。方法 选取自2018年1月至2020年1月至成都中医药大学附属医院妇产科就诊的35例GDM(GDM组)与正常妊娠对照组（Normal组）的胎盘组织为研究对象。使用H-E染色及免疫组织化学染色观察两组胎盘组织的病理学改变及GABRP的表达;体外培养人绒毛膜滋养层细胞系HTR-8/Svneo(HTR-8),使用不同的胰岛素浓度探究胰岛素抵抗（IR）的最佳条件,Western blot法检测GABRP在IR模型中滋养层细胞内的表达;脂质体转染法过表达HTR-8细胞中GABRP,并将细胞分为4组：HTR-8组、IR组、IR+GABPR组及IR+vector组;葡萄糖消耗试验检测各组细胞对葡萄糖的摄取能力;Westernblot检测各组细胞中胰岛素敏感性相关蛋白：INSRα、INSRβ、IRS-1、IRS-2、p-PI3K/PI3K、GLUT4、p-AMPK/AMPK水平。结果 与对照组相比,GDM组胎盘组织中GABRP的蛋白及mRNA表达水平均...     

血脂异常ApoE基因缺失小鼠视网膜及Bruch膜组织形态观察

目的观察血脂异常ApoE基因缺失(apolipoprotein E-deficient,ApoE-/-)小鼠视网膜和Bruch膜组织形态改变。方法采用随机数字表法根据小鼠体质量分层随机分组。将24只2月龄(ApoE-/-)小鼠分为高脂组和普食组,另用12只2月龄C57BL小鼠作为普食对照组,喂养4个月后检测血浆总胆固醇(totalplasma cholesterol,TC)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL),光镜和电镜观察视网膜和Bruch膜的组织形态改变,光镜下半定量检测视网膜光感受器细胞、色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)数量。结果与普食对照组相比,6月龄ApoE-/-高脂组小鼠的TC、LDL明显增高(P<0.001),同时视网膜光感受器细胞、RPE排列紊乱、萎缩、数量明显减少(P<0.001),Bruch膜粗细不等、纤维分叉、厚度明显增厚(P<0.001),部分小鼠视网膜下可见玻璃膜疣形成。电镜观察RPE基底膜皱褶变短且减少,胞质内线粒体肿胀,胞浆中可见大量空泡,Bruch膜明显变厚,纤维结构明显减少,弹力层断裂。结论血脂异常ApoE-/-小鼠视网膜、Bruch膜出现的组织形态改变符合年龄相关性黄斑变性的病理改变,该动物模型可用做年龄相关性黄斑变性的研究。     

ApoE基因缺失小鼠视网膜及Bruch膜组织形态观察

目的 探讨ApoE基因缺失(apolipoprotein E-deficient,ApoE-/-)小鼠视网膜及Bruch膜的组织形态改变.方法 随机将24只2月龄C57BL小鼠分为高脂组和普食组,每组12只,另用2月龄ApoE-/-小鼠12只作为普食组,喂养4个月后检测各组动物血浆总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)、甘油三脂(triglyceride,TG)含量,光镜和电镜下观察视网膜外核层(outer nuclear layer,ONL)细胞、视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞和Bruch膜形态结构改变,半定量检测视网膜ONL、RPE细胞数和Bruch膜厚度.结果 6月龄ApoE-/-普食组小鼠、6月龄C57 BL高脂组小鼠、6月龄C57BL普食组小鼠血浆TC的含量分别为(9.72±0.41)mmol·L-1、(6.97±0.54) mmol·L-、(5.15±0.31)mmol·L-1,LDL的含量分别为(1.05±0.16)mmol·L-1、(1.25±0.10)mmol·L-1、(0.43±0.08)mmol·L-1,TG的含量分别为(0.78±0.16) mmol·L-1、(0.56±0.19)mmol·L-1、(0.53±0.17)mmol·L-1,ONL细胞核面积分别为(23 208.00±716.91)μm2、(24 269.00±1263.13) μm2、(26 952.00±2449.10) μm2,RPE细胞数目分别为10.20±0.83、11.70±0.62、13.80±1.01,Bruch膜厚度分别为(0.87±0.04) μm、(0.77±0.07) μm、(0.59±0.03) μm.TC:6月龄ApoE-/-普食组小鼠比6月龄C57BL高脂组和普食组明显增高(P＜0.001);LDL:6月龄ApoE-/-普食组小鼠比6月龄C57BL普食组明显增高(P ＜0.001);TG:6月龄ApoE-/-普食组小鼠比6月龄C57BL普食组明显增高(P＜0.05),比6月龄C57BL高脂组增高(P＞0.05).光镜下观察发现:6月龄ApoE-/-普食组小鼠视网膜ONL、RPE细胞排列紊乱、萎缩;半定量结果显示,6月龄ApoE-/-普食组小鼠比6月龄C57BL普食组视网膜RPE细胞明显减少(P＜0.001),ONL细胞数显著减少(P＜0.01),Bruch膜显著增厚(P＜0.001).6月龄ApoE-/-普食组小鼠比6月龄C57BL高脂组视网膜RPE细胞明显减少(P＜0.O1),ONL细胞数减少(P＞0.05),Bruch膜显著增厚(P＜0.05).电镜观察发现:6月龄ApoE-/-普食组小鼠RPE基底膜皱褶减少,胞质内线粒体轻度肿胀,可见核边聚现象,Bruch膜纤维结构不均匀,弹力层断裂,有空泡出现.结论 ApoE-/-普食组小鼠出现显著高脂血症,引起视网膜ONL、RPE及Bruch膜呈现AMD的病理改变,表明ApoE-/-与AMD具有明显相关性.