自身免疫性肝炎小鼠模型差异表达基因的筛查及柴胡皂苷D对部分差异表达基因表达的影响

目的对自身免疫性肝炎(AIH)小鼠模型的差异表达基因进行基因芯片筛查,并观察柴胡皂苷D(SS-d)对部分差异表达基因表达的影响,探讨AIH的发病机制及SS-d对该病的治疗作用机制。方法健康、雌性SPF级C57BL/6小鼠40只[体质量(20±2)g],分为基因芯片组(n=8)和SS-d治疗组(n=32)。基因芯片组小鼠又分为正常对照组(n=4)和模型组(n=4),正常对照组常规饲养,模型组小鼠按15 mg/kg剂量给予尾静脉注射刀豆蛋白A(Con A),12 h后处死并提取肝组织,按Agilent芯片说明书进行差异表达基因的筛选,采用荧光定量PCR技术对部分差异表达基因进行验证。SS-d治疗组小鼠随机分为正常组(常规饲养)、模型组(按15 mg/kg剂量给予尾静脉注射Con A)、SS-d低剂量组和SS-d高剂量组(分别按2.5 mg/kg和5.0 mg/kg剂量给予腹腔注射SS-d预处理,8 h后按15 mg/kg剂量给予尾静脉注射Con A)(每组8只)。12 h后收集各组小鼠静脉血,ELISA法检测血清ALT、AST。无菌条件下提取小鼠肝组织,部分多聚甲醛固定后切片,并进行HE染色;部分肝组织用于提取RNA,采用荧光定量PCR技术检测部分差异表达基因(IFNγ、IL-4、IL-5、IL-13和IL-17)的mRNA水平变化。多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t法检验;两组间比较采用t检验。结果基因芯片组小鼠共筛查差异表达基因11512个,其中上调5189个,下调6323个,显著富集于138条信号通路;荧光定量PCR验证结果显示,与正常对照组比较,模型组小鼠IFNγmRNA和IL-17 mRNA的表达升高(P值均<0.01),而IL-4 mRNA、IL-5 mRNA和IL-13 mRNA的表达下调(P值均<0.01),与芯片筛查结果一致。在SS-d治疗组中,与正常对照组比较,模型组小鼠血清ALT、AST水平均升高(P值均<0.01);肝组织内可见大量淋巴细胞浸润;IFNγmRNA和IL-17 mRNA的表达水平明显升高(P值均<0.05),而IL-4 mRNA、IL-5 mRNA和IL-13 mRNA的表达水平明显降低(P值均<0.05)。与模型组比较,SS-d低剂量组和SS-d高剂量组小鼠血清ALT、AST水平均降低(P值均<0.05),肝组织内淋巴细胞浸润程度减轻;IFNγmRNA和IL-17 mRNA的表达水平均降低(P值均<0.05),IL-4 mRNA、IL-5 mRNA和IL-13 mRNA的表达水平均升高(P值均<0.05),上述基因的含量变化差异在SS-d高剂量组与SS-d低剂量组之间具有统计学意义(P<0.05)。结论AIH的发生发展系大量基因异常表达的共同作用结果。其中IFNγ、IL-4、IL-5、IL-13、IL-17与AIH的发病密切相关,同时也是SS-d发挥免疫调节及肝损伤保护作用的生物学靶点。     

针刺治疗小儿麻痺症二例

例一:冯爱珠,女,四岁。代诉:前两天突发高热,继即右足麻痹无力,不能站立行走。诊断:小儿麻痹症(即脊髓灰白质炎引起之神经瘫痪)。治疗:用毫针浅刺皮表,取穴大椎、身柱、命门、环跳、委中、阳陵泉、三阴交。效果:经一次治疗后第二天即     

环状RNA参与自身免疫性肝炎小鼠肝损伤的相关性分析

背景：自身免疫性肝炎的发病机制尚未明确阐明，环状RNA(CircRNAs)是RNA领域的一个研究热点，参与了许多自身免疫性疾病的发病，但CircRNAs在自身免疫性肝炎中的作用尚不清楚。目的：探讨CircRNAs与刀豆蛋白A诱导自身免疫性肝炎小鼠肝损伤的关系。方法：对前期微阵列技术筛选出差异表达的CircRNAs谱进行生物信息学分析，包括基因本体论(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析，探讨上述差异表达基因潜在的生物学功能。采用随机数字表法将12只C57BL/6小鼠分为正常组和模型组，每组6只，模型组通过尾静脉注射刀豆蛋白A建立自身免疫性肝炎模型，造模12 h后处死小鼠，提取小鼠肝脏及外周血，利用qRT-PCR技术验证部分CircRNAs的表达水平，通过比色法检测小鼠血清中肝损伤指标谷丙转氨酶和谷草转氨酶的水平，通过微孔板法检测小鼠肝脏中氧化应激指标丙二醛和NO的水平，并将肝损伤指标和氧化应激水平的相关性进行分析。结果与结论：(1)GO分析结果显示，表达上调CircRNAs的靶基因参与的生物过程主要为“SNARE复合装配的调节”(P=0.004)等，分子功能主要为“金属...