粉防己根的化学成分研究

目的：研究粉防己根的化学成分。方法：采用大孔树脂、硅胶、Sephadex LH-20葡聚糖凝胶、ODS柱色谱等方法对粉防己根的70%乙醇提取物进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据进行结构鉴定。结果：从粉防己根中分离得到11个化合物,分别鉴定为：(-)-oblongine(1)、fordianoside(2)、乌药碱(3)、荷包牡丹碱(4)、木兰花碱(5)、N,N-dimethyllindcarpine(6)、防己菲碱(7)、N-trans-feruloyl tyramine(8)、4-羟基苯乙醇-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、粉防己碱(10)、防己诺林碱(11)。结论：其中,化合物2、3、6、8、9为首次从粉防己中分离得到。     

粉防己细胞色素P450基因StCYP80G的克隆与生物信息学分析

目的 克隆粉防己Stephania tetrandra苄基异喹啉类生物碱生物合成途径中的细胞色素P450基因StCYP80G,进行生物信息学分析、表达载体构建和组织特异性表达分析。方法 设计特异性引物,从粉防己cDNA中克隆得到StCYP80G编码蛋白的基因序列;利用生物信息学在线工具预测StCYP80G蛋白的结构域、理化性质和跨膜区等分子特征;利用MEGA11.0对氨基酸进行多序列比对和系统进化关系分析;通过同源重组法构建含有StCYP80G基因的重组质粒;采用实时荧光定量PCR技术分析该基因在粉防己不同组织中的相对表达量。结果 StCYP80G基因开放阅读框长度为1 458 bp,编码485个氨基酸,蛋白质相对分子质量为54 770,预测其具有CYP450的保守结构域,含有跨膜结构域,可能定位在内质网上。氨基酸序列比对与系统进化树分析显示,StCYP80G与莲NnCYP80G、智利桂LsCYP80G的序列具有同源性且一致度较高,推测StCYP80G与这2条序列具有相似的功能。StCYP80G基因在粉防己叶中表达量显著高于根中。质粒序列分析结果表明,重组质粒pESC-Leu-StCYP80G构建成功。结论 StCYP80G基因的克隆、生物信息学分析、重组质粒的构建、以及组织表达特异性的研究结果,为进一步探究其在苄基异喹啉类生物碱生物合成途径中的功能奠定了基础。