重组人干扰素α2b注射液稳定性研究

目的 考察重组人干扰素α2b注射液的稳定性.方法 按照＆lt;中国药典＆gt;2010年三部的方法进行检测,其中干扰素蛋白纯度采用高效液相法测定,光照试验、振摇试验、冻融试验、加速试验、低温长期留样观察方法均采用药典方法.结果 除了冻融试验中反复冻融8次后和加速试验中（37±2）℃放置3个月,干扰素α2b效价下降至理论值的80%以下,其余试验抽样点均符合质量标准的规定.结论 该品在避光,2~8 ℃密闭的储存条件下性质稳定,贮存期可为2年左右.     

抗牙龈素粘附片段Hgp44卵黄抗体对实验性牙周炎的抑制作用

目的: 观察抗牙龈素粘附片段Hgp44卵黄抗体(抗Hgp44-IgY)对大鼠实验性牙周炎的抑制作用。方法: 24只雄性SD大鼠随机分为4组:空白组(A),生理盐水孵育组(B),抗Hgp44-IgY孵育组(C)和西吡氯铵孵育组(D)。采用细线结扎大鼠4颗第一磨牙,分别接种经处理的牙龈卟啉单胞菌,辅以蔗糖饮水。4周后检测大鼠牙龈指数(GI),龈下菌斑的BANA试验。处死大鼠后检测牙槽骨丧失量(ABL),牙龈的HE染色,利用qRT-PCR检测牙龈中IL-10、OPG和RANKL mRNA相对表达水平以及OPG/RANKL比率。结果: C组和D组与B组相比,GI、ABL以及BANA结果均显著降低(P<0.01),牙龈组织中IL-10和OPG的mRNA表达水平均显著增高(P<0.01),RANKL mRNA的表达水平显著下降(P<0.05),OPG/RANKL比率显著增高(P<0.001),C组与D组相比,GI、ABL、BANA、IL-10,OPG mRNA水平和OPG/RANKL比率无统计学意义,OPG mRNA 表达水平显著降低(P<0.05)。结论: 抗Hgp44-IgY能减少牙槽骨的吸收,减缓大鼠实验性牙周炎的发展进程。     

基于Orbitrap-CID/HCD的合成多肽精氨酸侧链低能键的差异化质谱表征研究

目的 解析合成醋酸西曲瑞克的两种难解析杂质氨基酸序列及修饰,探讨氨甲酰基中性丢失效应在质谱氨基酸序列分析中的影响。方法 在合成工艺分析的基础上,利用静电场轨道阱质谱碰撞诱导解离,结合高能碰撞解离多级碎裂,解析无法合成纯品并且单一高能碰撞解离无法解析的两种杂质。结果 精氨酸侧链无修饰的杂质形成氢键,避免了氨甲酰基中性丢失。氨甲酰基中性丢失效应和空间位阻效应导致杂质3理论碎片与实测碎片不匹配。在杂质2的结构中,磺酸基与瓜氨酸羰基氧形成的氢键避免氨甲酰基中性丢失,但由于磺酸基位阻较小,发生N-S键断裂。结论 氨甲酰基中性丢失效应可能导致单一高能碰撞解离碎片与理论碎片不匹配,空间位阻效应、形成氢键也可能影响氨甲酰基中性丢失,因此当数据解析引擎显示不匹配时,还应深入分析推测氨基酸侧链的低能键,才能实现充分的杂质质控。     

雾化给药对重组人干扰素-α2b生物活性和分子结构的影响

目的:评估雾化吸入给药对重组人干扰素-琢2b(rhIFN-α2b) 生物活性和分子结构的影响。方法:采用病毒抑制法检测 rhIFN-α2b 的生物活性,通过比较雾化前后rhIFN-α2b 生物活性的变化分析空气射流对其生物活性的影响。采用高效液相色谱(HPLC)法和十二烷基磺酸钠鄄聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) 法分析干扰素分子结构的改变。结果:雾化给药不会造成rhIFN-α2b 蛋白质肽键断裂,但是空气射流会造成二硫键断裂,断裂比例与雾化前rhIFN-α2b 浓度有关,600 万IU/mL、300 万IU/mL 和100 万IU/mL rhIFN-α2b雾化后纯度分别为82.9%、90.1%和94.9%。600 万IU/mL rhIFN-α2b 溶液雾化后17.1%的rhIFN-α2b分子出现二硫键的断裂,其中0.5%的rhIFN-α2b分子出现双二硫键断裂,雾化后喷雾壶内未完全汽化的剩余液中rhIFN-α2b 的生物活性保留率为98.2%,雾化后收集的凝集液中rhIFN-α2b的生物活性保留率为96.1%。结论:rhIFN-α2b能以雾化状态稳定传输给药,生物活性基本保留。雾化后绝大部分rhIFN-α2b分子结构保持完整,少数分子出现单个或双二硫键断裂,为了尽量减少rhIFN-α2b分子的损耗,临床上雾化吸入rhIFN-α2b的浓度不应超过100 万IU/mL。     

亚稳态分子内重排诱发多肽系列降解杂质的解析研究

目的 解析合成多肽AAT002原料药中2个双环未知降解杂质及4个同位点未知水解杂质结构。方法 分析多肽侧链基团亲核进攻能力,根据杂化轨道理论,提出碳负离子消旋机制和亚稳态分子内重排机制,利用高分辨质谱二级碎片和Proteomics toolkit预测模型,匹配理论和实测B⁺、Y^＋碎片,验证6个杂质的结构。结果 匹配结果验证了碳负离子消旋机制和亚稳态分子内重排机制,建立了三级杂质降解关联网络,分析了减少杂质生成的条件。结论 碳负离子的形成是杂质降解网络的关键点,在纯化和贮存中减少促进碳负离子形成的弱碱性条件,更加有利于合成多肽冻干、储存。