西藏木瓜HPLC指纹图谱研究及多成分测定

目的建立西藏木瓜的HPLC多指标定量指纹图谱,为西藏木瓜的质量控制和真伪鉴别提供方法和技术支持。方法采用高剪切分散乳化(HSDE)法提取木瓜鲜样,采用Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5.0μm)色谱柱,乙腈-0.5%冰乙酸+10 mmol/L乙酸铵水溶液为流动相,进行梯度洗脱,体积流量为0.8 m L/min,柱温为25℃,检测波长为280 nm。利用ESI-TOF/MS法对西藏木瓜提取物中多种化合物进行鉴别,在对多指标活性成分进行定量测定的基础上,建立西藏木瓜的HPLC指纹图谱。结果西藏木瓜HPLC指纹图谱共有30个共有峰,指认了其中9个峰,分别为绿原酸、香草酸、咖啡酸、藜芦酸、芸香苷、槲皮苷、金丝桃苷、齐墩果酸和熊果酸,并对其进行了定量测定。指纹图谱中相似度分析表明,10批西藏木瓜的相似度较为接近,而西藏木瓜与其他品种木瓜的相似度差别较大。结论 HSDE-HPLC-DAD-ESI-TOF/MS法可以用于木瓜鲜样的快速提取和分析,在此基础上建立的指纹图谱结合相似度分析可用于其质量评价,为提高西藏木瓜的质量控制水平提供了方法和技术支持。     

不同采收期皱皮木瓜质量动态分析

目的:考察不同采收期皱皮木瓜外观特征与内在多元药效成分的动态变化规律,探讨皱皮木瓜药材的最佳采收期。方法:观察不同采收期皱皮木瓜果实外观特征包括表面颜色、长度、直径及质量变化,采用高效液相色谱法、紫外分光光度法等对内在绿原酸、齐墩果酸、熊果酸、鞣质及总有机酸含量进行测定,用主成分分析法(principal component analysis,PCA)进行综合评价。结果:不同采收期皱皮木瓜果实外观特征及内在多元药效物质的含量呈现动态变化,综合评价显示,8月下旬采收的样品综合评价指数最高。结论:综合分析认为8月中下旬为皱皮木瓜药材最佳采收期,此时果实表示颜色由绿色变为绿黄色。该研究可为皱皮木瓜药材采收、质量评价等提供一定科学依据。     

忍冬叶活性成分周期变化及其代谢关系研究

该文通过对忍冬叶初生及次生代谢过程进行研究,探讨不同发育阶段忍冬叶代谢规律。在每月下旬采收金银花上部5~8片完全展开叶,采用HPLC测定相关代谢指标。结果表明,忍冬叶含水量在3月份最高,达到78.59%,12月份最低,为60.83%;总糖量在冬季最高,1月份达到最高275.8 mg·g~(-1),其他时间明显降低;忍冬叶中的绿原酸、新绿原酸、木犀草苷和咖啡酸的含量变化基本一致,四者的含量均在3月达到最高,分别为42.79,2.01,7.13,0.16 mg·g~(-1)。忍冬叶的初生代谢产物和次生代谢产物含量在3—5月达到较高水平,与有效成分含量相关的因素主要有钾、镁、磷、门冬氨酸、苏氨酸、脯氨酸、缬氨酸、胱氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸。     

基于花粉微观特征的木瓜品种孢粉学研究及亲缘关系分析

目的：研究不同品系木瓜孢粉学特性,为揭示木瓜的亲缘关系和分类鉴别提供孢粉学基础数据,同时为木瓜药用植物新资源的开发利用提供依据。方法：采用扫描电镜对不同品系木瓜赤道面和极面观特征、花粉形状及外壁纹饰类型等孢粉学特性进行研究,利用Screen Compass V4.0软件测量花粉极轴长、赤道轴长,采用SPSS 20.0进行聚类分析。结果：按NPC[孢粉萌发孔的数目(N)、位置(P)、特征(C)]系统分类,木瓜花粉均属于N₃P₄C₃型,为辐射对称的超长球形或长球形,极轴长为28.25～51.11μm,赤道轴长为16.49～26.58μm,外壁纹饰类型为条纹-脑纹状纹饰或脑纹状纹饰,穿孔的数目不同。聚类分析结果表明19个木瓜品系可被划分为3大组,第Ⅱ组与第Ⅲ组在遗传距离15.0处聚类,其后在遗传距离25.0处与第Ⅰ组聚成一类。结论：不同品系木瓜的赤道面和极面观特征、花粉形状及外壁纹饰类型等孢粉学特征反映其分类地位,对揭示其亲缘关系有重要意义;此为药用木瓜山东植物资源的分类及开发提供基础数据。     

金银花花中活性成分含量及其相关酶活性的动态变化规律研究

目的: 研究不同花期金银花中活性成分含量及其相关次生代谢过程中关键酶活性的动态变化规律,为确定金银花最佳采收期,调控金银花质量和相关管理规范提供指导. 方法: 测定金银花不同花期苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)的活性,以及总酚、总黄酮、绿原酸、花色苷等活性成分的含量. 结果: 从三青期到金花期,金银花中总酚、总黄酮和花色苷的含量呈下降趋势,三青期达到最高值,分别为4.04,6.71,0.26 mg·g^-1,绿原酸在三青期达到最高值,为0.968 mg·g^-1,大白期达到最低值,后又小幅升高.PAL,PPO,POD的活性从三青期逐渐下降,到银花期达到最低值,同三青期相比,三者的下降幅度分别为43%,62%,56%,后到金花期略有上升. 结论: 在金花期之前,金银花中的PPO,POD活性与酚类物质程正相关.在金银花成熟期,由于呼吸作用的加强,诱导POD活性上升,使POD成为金银花成熟阶段催化酚类物质氧化为醌的关键酶,即POD是控制金银花成熟阶段活性成分含量的关键酶.     

基于UPLC多指标含量测定和指纹图谱的不同种质金银花药材质量评价研究

目的 建立金银花药材超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱,并对有效成分新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、马钱苷、当药苷、断氧化马钱子苷、芦丁、木犀草苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C的含量进行测定,为不同种质金银花药材的质量评价提供参考。方法 采用超高效液相色谱仪,Thermo Accucore^TM C₁₈色谱柱(100mm×4.6mm,2.6μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,体积流量为0.3mL/min,梯度洗脱,分段检测波长324nm(0～13.5 min)、238 nm(13.5～18 min)、354 nm(18～27 min)、324 nm(27～40 min),柱温30℃,进样量2μL;通过对照品比对,对共有峰进行鉴定,采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》软件构建指纹图谱,进行相似度评价;通过主成分分析(principal component analysis,PCA)、正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial leastsquares discrimination analysi...     

HPLC转换波长法测定木瓜中绿原酸、齐墩果酸和熊果酸含量

目的:建立HPLC转换波长法,同时测定木瓜中绿原酸、齐墩果酸、熊果酸含量。方法 :采用HPLC法,Kromasoil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相:乙腈-0.6%磷酸溶液,梯度洗脱,流速:0.8 mL/min,检测波长:326 nm,210 nm;柱温:30℃。结果:绿原酸在0.192~2.880μg(r=0.9994),齐墩果酸在0.488~7.320μg(r=0.9999),熊果酸在0.437~6.468μg(r=1)范围内,线性关系良好;三种化合物的平均回收率为别为101.13%(RSD=1.98%,n=6)、99.64%(RSD=1.97%,n=6)及99.66%(RSD=1.90%,n=6)。结论:该方法简便准确,重现性好,可为控制木瓜质量提供参考。     

木瓜属药用植物DNA条形码鉴定研究

目的对木瓜属药用植物进行ITS2、psb A-trn H序列分析,为其分子鉴定提供依据。方法对5种木瓜属药用植物的19个样本ITS2序列进行PCR扩增和测序,用MEGA6.0计算其种间、种内的Kimura 2-parameter(K2P)距离,及各序列变异位点并构建系统发育树,并预测ITS2二级结构。结果 ITS2序列间存在明显差异,psb A-trn H序列间也存在稳定差异;构建的系统发育树显示木瓜属的不同基原样本各聚为一支,能很好将5种植物区分,显示出单系性;比较木瓜属5种植物的ITS2二级结构存在明显差异。结论 ITS和psb A-trn H序列可以有效准确鉴别5种木瓜属植物。